Фотоактивируемый флуоресцентный белок - Photoactivatable fluorescent protein
Фотоактивируемые флуоресцентные белки (PAFP) проявляют флуоресценцию, которая может быть изменена с помощью химической реакции, индуцированной светом.
История
Первый PAFP, Каэдэ (протеин), был изолирован от Trachyphyllia geoffroyi в скрининге библиотеки кДНК, предназначенной для идентификации новых флуоресцентных белков.[1] По счастливой случайности было обнаружено, что флуоресцентный зеленый белок, полученный из этого экрана, обладает чувствительностью к ультрафиолетовому свету.
Мы случайно оставили одну из аликвот белка на лабораторном столе на ночь. На следующий день мы обнаружили, что образец белка на столе стал красным, тогда как другие образцы, которые хранились в бумажной коробке, остались зелеными. Хотя небо было частично облачным, красный образец попадал на солнечный свет через окна, выходящие на юг.[2]
Характеристики
Многие PAFP были созданы из существующих флуоресцентных белков или идентифицированы с помощью крупномасштабных экранов после открытия Каеде. Многие из них претерпевают фотопреобразование из зеленого в красный, но доступны и другие цвета. Некоторые белки принимают участие в необратимых реакциях фотопревращения, в то время как другие реакции можно обратить вспять с помощью света определенной длины волны.
Список PAFP
| Свойства PAFP[3] | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| PAFP | Абсорбция1 (нм) | Эмиссия1 (нм) | Абсорбция2 (нм) | Эмиссия2 (нм) | Длина волны фотопреобразования | Обратимость | Яркость1* | Яркость2* | Ссылка |
| Каэдэ (протеин) | 508 | 518 | 572 | 580 | ультрафиолетовый | никто | 2,64 раза | 0.60X | [4] |
| Eos (белок) | 506 | 516 | 571 | 581 | ультрафиолетовый | никто | 1,30X | 0,70X | [5] |
| IrisFP | 488 | 516 | 551 | 580 | ультрафиолетовый | никто | 0,66X | 0,49X | [6] |
| IrisFP | 488 | 516 | 390 | ? | 490 нм | реверсивный, 390 нм | ? | ? | idem |
| IrisFP | 551 | 580 | 440 | ? | 550 нм | обратимый, 440 нм | ? | ? | idem |
| KikGR / Кикуме | 507 | 517 | 583 | 593 | ультрафиолетовый | никто | 0.60X | 0,64X | [7] |
| Дронпа | 503 | 518 | 390 | ? | 490 нм | реверсивный, 390 нм | ? | ? | [8] |
| PAGFP | 400 | ? | 504 | 517 | ультрафиолетовый | никто | 0,08 раза | 0,42 раза | [9] |
| PS-CFP | 402 | 468 | 490 | 511 | ультрафиолетовый | никто | 0,17X | 0,16X | [10] |
| KFP1 | ? | ? | 590 | 600 | зеленый | Переменная | 0,004X | 0,13X | |
| * Значения яркости указаны относительно EGFP. | |||||||||
Приложения
В отличие от других флуоресцентных белков, PAFP можно использовать в качестве селективных оптических маркеров. За полностью помеченной клеткой можно следить для оценки деления, миграции и морфологии клеток. Очень маленькие объемы, содержащие PAFP, можно активировать с помощью лазера. В этих случаях можно оценить транспорт, диффузию и оборот белка.
Рекомендации
- ^ Андо и другие. 2002 PNAS 99 (20), стр. 12651-6.
- ^ Ando et al. 2002 PNAS 99 (20) стр. 12652
- ^ Лукьянов и другие. 2005. Обзоры природы Молекулярная клеточная биология 6 (11) с. 885-91.
- ^ Андо и другие. 2002 PNAS 99 (20), стр. 12651-6.
- ^ Wiedenmann и другие. 2004. PNAS 101 (45), стр. 15905-10.
- ^ Адам и другие. 2008. PNAS 105 (47), стр. 18343–48.
- ^ Цуцуи и другие. 2005. EMBO отчеты 6 (3), стр. 233-8.
- ^ Хабучи и другие. 2005. PNAS 102 (27), стр. 9511-6.
- ^ Паттерсон и Липпинкотт-Шварц 2004. Методы 32 (4), стр 445-50.
- ^ Чудаков и другие. 2004. Природа Биотехнологии 22 (11), стр 1435-9.