Гибридома кролика - Rabbit hybridoma

А кролик гибридома представляет собой гибридную клеточную линию, образованную путем слияния кроличьего продуцента антител. В клетка с раковой B-клеткой (миелома ).

История

Иммунная система кролика была задокументирована как средство развития антитела с высшим близость и более разнообразное распознавание многих молекул, включая фосфопептиды, углеводы и иммуногены, которые иначе не иммуногенный в мышке.[1] Однако до недавнего времени количество антител, доступных от кроликов, ограничивалось поликлональные антитела. Было предпринято несколько попыток создания кролика. моноклональные антитела после развития мыши гибридомная технология в 1970-е гг.[2] Были проведены исследования гетерогибридом мышь-кролик для получения кроличьих моноклональных антител.[1][3] Однако эти гетерогибридомы в конечном итоге было трудно клонировать, а клоны, как правило, нестабильны и не секретировали антитела в течение длительного периода времени.

Первоначальный партнер по слиянию

В 1995 году Кэтрин Найт и ее коллеги из Чикагского университета Лойола сумели разработать двойного трансгенного кролика, сверхэкспрессирующего онкогены v-abl и c-myc под контролем энхансеров тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина. У кролика образовалась миеломоподобная опухоль, что позволило выделить линию клеток плазмоцитомы, названную 240E-1. Слияние клеток 240E-1 с лимфоцитами кролика привело к образованию гибридом, которые последовательно секретировали моноклональные антитела кролика.[4] Однако, как и в случае с ранними линиями миеломы мышей, разработанными в 1970-х годах, стабильность была проблемой. Ряд лабораторий, которые получили линию клеток 240E-1 из лаборатории доктора Найта, сообщили о проблемах стабильности линии клеток слияния 240E-1.[5]

Улучшенный партнер по слиянию

В 1996 году Вэйминь Чжу и Роберт Пайтела из Калифорнийского университета в Сан-Франциско (UCSF) получили 240E-1 в лаборатории доктора Найта и попытались разработать улучшенную гибридому кролика.[4] Улучшение характеристик 240E-1 было достигнуто путем многократного субклонирования, отбора по высокой эффективности слияния, устойчивому росту и морфологическим характеристикам, таким как яркий внешний вид под фазово-контрастный микроскоп. Отобранные субклоны дополнительно тестировали на их способность продуцировать стабильную гибридому и секрецию моноклональных антител. После нескольких раундов процессов субклонирования и отбора была идентифицирована новая линия клеток, названная 240E-W, которая продемонстрировала лучшую эффективность и стабильность слияния. Клеточная линия 240E-W с тех пор была усовершенствована и оптимизирована для производства кроличьих моноклональных антител для исследовательских и коммерческих целей.

Обработать

Процесс образования гибридомы у кролика в первую очередь влечет за собой получение В-клетки от кролика, который был иммунизирован. Существует множество протоколов иммунизации кроликов, особенно для получения поликлональных антител.[6][7][8] После иммунизации В-клетки сливают с линией клеток-кандидатов-кроликов-партнеров по слиянию с образованием гибридом. Полученные в результате гибридомы антитела проверяются на антиген, который отвечает интересующим критериям, с помощью диагностических тестов, таких как ELISA, Вестерн-блоттинг, Иммуногистохимия и FACS. Полученные в результате гибдомы могут быть субклонированы для обеспечения моноклональных характеристик.

Гуманизация кроличьих антител

Митчелл Хо и его коллеги из Национального института рака выделили группу кроличьих моноклональных антител (например, YP218, YP223), которые распознают редкие эпитопы мезотелина, в том числе плохо иммуногенные участки, для лечения рака. [9] Митчелл Хо и Ифань Чжан проанализировали сложные структуры кроличьих антител с их антигенами из банка данных по белкам и идентифицировали антиген-контактирующие остатки на кроличьем Fv на расстоянии 6 ангстрем от его антигена.[10] Они назвали «HV4» и «LV4» в Fv кролика, петлях некомплементарно-определяющей области (CDR), которые структурно близки к антигену и расположены в каркасной области 3 тяжелой цепи и легкой цепи кролика соответственно. На основе структурного анализа они разработали стратегию гуманизации путем трансплантации комбинированных CDR Кабата / IMGT / Paratome в каркасную последовательность зародышевой линии человека. Иммунотоксины, состоящие из гуманизированных кроличьих Fv (включая hYP218), слитых с клинически используемым токсином, показали более сильную цитотоксичность против опухолевых клеток, чем иммунотоксины, полученные из их исходных кроличьих Fv. CAR T-клетки (мезо3) на основе антитела hYP218, нацеленного на проксимальный к мембране эпитоп мезотелина, демонстрируют эффективное ингибирование больших опухолей у мышей. [11] Этот метод (т.е. прививка комбинированных кроличьих CDR по Кабату / IMGT / Paratome к стабильной структуре зародышевой линии человека) был предложен в качестве общего подхода к гуманизации кроличьих антител.[10]

использованная литература

  1. ^ а б Рэйбоулд Т.Дж., Такахаши М. (июнь 1988 г.). «Получение стабильных гибридом кролика и мыши, которые секретируют кроличьи mAb определенной специфичности». Наука. 240 (4860): 1788–90. Bibcode:1988Научный ... 240.1788R. Дои:10.1126 / science.3289119. PMID  3289119.
  2. ^ Коллинз Дж. Дж., Блэк П. Х., Стросберг А. Д., Хабер Э, Блох К. Дж. (Февраль 1974 г.). «Трансформация обезьяньим вирусом 40 клеток селезенки гипериммунного кролика: доказательства синтеза иммуноглобулина трансформированными клетками». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 71 (2): 260–2. Bibcode:1974PNAS ... 71..260C. Дои:10.1073 / пнас.71.2.260. JSTOR  62751. ЧВК  387981. PMID  4150020.
  3. ^ Kuo MC, Sogn JA, Max EE, Kindt TJ (апрель 1985). «Гибридомы кролика и мыши, секретирующие интактный кроличий иммуноглобулин». Молекулярная иммунология. 22 (4): 351–9. Дои:10.1016/0161-5890(85)90119-1. PMID  4033662.
  4. ^ а б Spieker-Polet H, Sethupathi P, Yam PC, Knight KL (сентябрь 1995 г.). «Моноклональные антитела кролика: создание партнера слияния для получения гибридом кролика и кролика». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 92 (20): 9348–52. Bibcode:1995PNAS ... 92.9348S. Дои:10.1073 / пнас.92.20.9348. ЧВК  40982. PMID  7568130.
  5. ^ Лигуори М.Дж., Хофф-Велк Д.А., Острув Д.Х. (июнь 2001 г.). «Рекомбинантный человеческий интерлейкин-6 усиливает секрецию иммуноглобулинов в гибридоме кролик-кролик». Гибридома. 20 (3): 189–98. Дои:10.1089/027245701750293529. PMID  11461668.
  6. ^ Ховард Г.К., Казер М.Р., ред. (2007). Изготовление и использование антител: практическое руководство. CRC Press. ISBN  9780849335280.
  7. ^ Харлоу Е., Лейн D (1988). Антитела: лабораторное руководство. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор. ISBN  978-1-936113-81-1.
  8. ^ Колиган Дж. Э., Круисбек А. М. и др., Ред. (1994). Текущие протоколы в иммунологии. Грин и Уайли.
  9. ^ Чжан Ю.Ф., Фунг Й., Гао В., Кава С., Хассан Р., Пастан И., Хо М. (май 2015 г.). «Новые высокоаффинные моноклональные антитела распознают неперекрывающиеся эпитопы мезотелина для мониторинга и лечения мезотелиомы». Научные отчеты. 5: 9928. Bibcode:2015НатСР ... 5Е9928Z. Дои:10.1038 / srep09928. ЧВК  4440525. PMID  25996440. CC-BY icon.svg Материал был скопирован из этого источника, который доступен под Международная лицензия Creative Commons Attribution 4.0.
  10. ^ а б Чжан Ю.Ф., Хо М. (апрель 2017 г.). «Гуманизация кроличьих моноклональных антител путем пересадки комбинированных областей, определяющих комплементарность по Кабату / IMGT / Paratome: обоснование и примеры». mAbs. 9 (3): 419–429. Дои:10.1080/19420862.2017.1289302. ЧВК  5384799. PMID  28165915. Эта статья включает текст из этого источника, который находится в всеобщее достояние.
  11. ^ Zhang Z, Jiang D, Yang H, He Z, Liu X, Qin W и др. (Июнь 2019). «Модифицированные CAR Т-клетки, нацеленные на проксимальный к мембране эпитоп мезотелина, усиливают противоопухолевую функцию против большой солидной опухоли». Смерть и болезнь клеток. 10 (7): 476. Дои:10.1038 / s41419-019-1711-1. ЧВК  6572851. PMID  31209210.

внешние ссылки

внешние ссылки