Хроматофокусирование - Википедия - Chromatofocusing

Хроматофокусирование это метод разделения белков, который позволяет разрешить отдельные белки и другие амфолиты из сложной смеси по различию их изоэлектрическая точка. Хроматофокусирование использует ионообменные смолы и обычно выполняется на быстрой жидкостной хроматографии белков (FPLC) или аналогичном оборудовании, способном производить непрерывные градиенты буфера, хотя это не является обязательным требованием. В отличие от типичной ионообменной хроматографии, где связанные молекулы элюируются из смолы за счет увеличения ионной силы буферной среды, хроматофокусирование элюирует связанные частицы за счет изменения pH буфера. Это изменяет чистый поверхностный заряд связанных молекул, изменяя их привязанность к смоле. Когда изменяющийся pH буферной системы пересекает pI данной молекулы, эта молекула будет элюироваться из смолы, поскольку она больше не будет обладать чистым поверхностным зарядом (необходимым для связывания молекул с ионообменными смолами). Хроматофокусирование - это мощный метод очистки белков, так как он позволяет разделить очень похожие виды, различающиеся только на 0,02 единицы pH, которые могут плохо или вообще не разделяться при использовании традиционных стратегий ионного обмена. Главный недостаток этого метода заключается в том, что некоторые белки будут агрегатируются, когда они присутствуют в относительно высоких концентрациях и не несут чистый поверхностный заряд. Это может вызвать закупорку смолы, что очень проблематично при использовании герметичных колонок с ионообменной смолой на оборудовании FPLC, что приведет к повышению давления и возможному отказу оборудования. Очевидные проблемы агрегации иногда можно преодолеть, ограничив концентрацию образца и используя буферные добавки, которые сдерживают образование агрегатов.