DH5-Alpha Cell - Википедия - DH5-Alpha Cell

DH5-альфа клетки находятся Кишечная палочка клетки спроектированы так, чтобы максимизировать трансформация эффективность. Их определяют три мутации[1] recA1, endA1, которые помогают вставке плазмиды, и lacZΔM15, которые позволяют синий белый экран. Клетки компетентный и часто используется с превращение хлорида кальция для вставки желаемой плазмиды. Изучение четырех методов трансформации и шести штаммов бактерий показало, что наиболее эффективным оказался штамм DH5 с Ханахан метод[2]

Мутации

  • Мутация recA1 представляет собой одноточечную мутацию, при которой глицин 160 полипептида recA заменяется остатком аспарагиновой кислоты.[3] чтобы отключить активность рекомбиназы и деактивировать гомологичная рекомбинация.
  • Мутация endA1 инактивирует внутриклеточную эндонуклеазу, чтобы предотвратить ее деградацию встроенной плазмиды.

Рекомендации

  1. ^ «Штамм - DH5α». cgsc2.biology.yale.edu. Получено 2017-05-23.
  2. ^ Чан, Венг-Тат; Verma, Chandra S .; Lane, Дэвид П .; Ган, Самуэль Кен-Эн (12 декабря 2013 г.). «Сравнение и оптимизация методов и факторов, влияющих на трансформацию Escherichia coli». Отчеты по бионауке. 33 (6). Дои:10.1042 / BSR20130098. ISSN  0144-8463. ЧВК  3860579. PMID  24229075.
  3. ^ Брайант, Флойд (9 ноября 1987 г.). «Создание рекомбиназо-дефицитного мутантного белка recA, который сохраняет одноцепочечную ДНК-зависимую активность АТФазы» (PDF). Журнал биологической химии.