Разделение и синтез пула - Википедия - Split and pool synthesis

В сплит и пул (сплит-микс) синтез это метод в комбинаторная химия которые можно использовать для получения библиотек комбинаторных соединений. Это пошагово, высокоэффективный процесс, реализованный в повторяющихся циклах. Процедура позволяет приготовить миллионы или даже триллионы соединения как смеси, которые можно использовать в исследование наркотиков.

История

Согласно традиционным методам, большинство органических соединений синтезируются одно за другим из строительных блоков, соединяющих их друг за другом поэтапно. До 1982 года никто даже не мечтал о том, чтобы сделать сотни или тысячи соединений в одном процессе. Не говоря уже о миллионах и даже триллионах. Таким образом, продуктивность метода сплит-пула, изобретенного проф. Фурка (Университет Этвёша Лоранда, Будапешт, Венгрия), 1982 год на первый взгляд казался невероятным. Метод был описан в документе, нотариально заверенном в том же году. Документ написан на венгерском языке и переведен на английский язык.[1]Мотивы, которые привели к изобретению, можно найти в статье 2002 г.[2]и метод был впервые опубликован на международных конгрессах в 1988 г.[3] затем в печати в 1991 году.[4]

Сплит и пул синтез и его особенности

Блок-схема синтеза S&P. Круги: цветные ВВ, черная и белая опора, расходящиеся стрелки: деление на равные части, вертикальные стрелки: соединение; сходящиеся стрелки: смешивание и гомогенизация

Сплит-и пул-синтез (синтез S&P) отличается от традиционных методов синтеза. Важное новшество - использование в процессе сложных смесей. В этом причина его беспрецедентно высокой производительности. Используя этот метод, один химик может произвести больше соединений за неделю, чем все химики за всю историю химии. Синтез S&P применяется поэтапно, повторяя три операции на каждом этапе процесса:

  • Разделение составной смеси на равные части
  • Присоединение одного строительного блока (BB) к каждой части
  • Объединение и тщательное перемешивание порций

Оригинальный метод основан на твердофазном синтезе Меррифилда.[5] Процедура проиллюстрирована на рисунке блок-схемой, показывающей двухцикловый синтез с использованием одних и тех же трех ВВ в обоих циклах. Выбор твердофазного метода в синтезе S&P является разумным, поскольку в противном случае удаление побочных продуктов из смеси соединения было бы очень сложно.

Эффективность

Высокая эффективность - важнейшая особенность метода. В многоэтапном (n) синтезе с использованием равного количества BB (k) на каждом шаге количество компонентов в формирующейся комбинаторной библиотеке (N) составляет:

N = kп

Это означает, что количество компонентов увеличивается экспоненциально с увеличением количества шагов (циклов), в то время как количество необходимых соединений увеличивается только линейно. Если в циклах используется другое количество строительных ББ (k1, k2, k3… .kn), то количество сформированных компонентов составляет:

N = k1.k2.k3… Kп.

Эта особенность методики дает возможность синтезировать практически неограниченное количество соединений. Например, если 1000 BB используются в четырех циклах, ожидается образование 1 триллиона соединений. Количество необходимых муфт всего 4000!

Причина высокой эффективности

Рационализированный традиционный синтез. Каждое образованное соединение разделяется, а затем вводится в реакцию с одним из реагентов следующей стадии.

Объяснение необычайной эффективности заключается в использовании смесей на стадиях синтеза. Если в традиционной реакции одно соединение сочетается с одним реагентом, образуется одно новое соединение. Если смесь соединений, содержащих n компонентов, сочетается с одним реагентом, количество новых соединений, образующихся при однократном связывании, равно n. Разница между традиционным синтезом и синтезом с разделением и пулом убедительно демонстрируется количеством стадий сочетания в традиционном и сплит-и пул синтез 3,2 миллиона пентапептидов.

Обычный синтез: 3 200 000 x 5 = 16 000 000 стадий связывания приблизительно 40 000 лет Синтез S и P: 20 x 5 = 100 стадий связывания приблизительно 5 дней

Можно рационально вести традиционный синтез, как показано на рисунке. В этом случае количество циклов сцепления составляет:

20 + 400 + 8,000 + 160,000 + 3,200,000 = 3,368,420 около 9,200 лет

Теоретический верхний предел количества компонентов

Как часто упоминалось, метод разделения и пула позволяет синтезировать неограниченное количество соединений. Фактически, теоретическое максимальное количество компонентов зависит от количества библиотеки, выраженного в молях. Если, например, синтезируется 1 моль библиотеки, максимальное количество компонентов равно числу Авогадро:

6,02214076·1023

В такой библиотеке каждый компонент был бы представлен одной молекулой.

Компоненты библиотечной формы в равных молярных количествах

Насколько химический состав соединений позволяет, компоненты библиотек образуются примерно в равных молярных количествах. Это стало возможным благодаря разделению смесей на равные образцы и гомогенизации объединенных образцов путем их тщательного перемешивания. Равное молярное количество компонентов библиотеки очень важно с точки зрения их применимости. Присутствие соединений в неодинаковых количествах может затруднить оценку результатов скрининга. Твердофазный метод позволяет использовать избыток реагентов, чтобы довести реакцию до завершения, поскольку избыток можно легко удалить фильтрацией.

Возможность использования двух смесей в синтезе.

В принципе, использование двух смесей в синтезе S&P может привести к той же комбинаторной библиотеке, которая формируется в обычном методе S&P. Однако различия в реакционной способности BB приводят к большим различиям в концентрациях компонентов, и ожидается, что эти различия будут увеличиваться после каждого этапа. Хотя при использовании подхода двух смесей можно сэкономить значительное количество трудозатрат, когда в каждой позиции объединено большое количество BB, рекомендуется придерживаться обычно используемой процедуры S&P.

Наличие всех структурных разновидностей в библиотеке

Формирование всех структурных вариантов, которые можно вывести из ББ, является важной особенностью синтеза S&P. Только метод S&P может достичь этого за один процесс. С другой стороны, наличие всех возможных структурных разновидностей в библиотеке гарантирует, что библиотека является комбинаторной и подготовлена ​​комбинаторным синтезом.

Формирование одного соединения в шариках

Образование одного компаунда на одной бусине

Следствием использования одного BB в муфтах является образование одного соединения в каждом валике. Формирование библиотек OBOC - неотъемлемое свойство синтеза S&P. Причина поясняется на рисунке. Структура соединения, образующегося в шарике, зависит от реакционных сосудов, в которых шарик оказывается в процессе синтеза. Это зависит от решения химика использовать библиотеку в связанной форме (OBOC) или расщеплять соединения. от бусинок и использовать как раствор.

Реализация сплит-пула синтеза

Ручной сплит-синтезатор и пул-синтезатор. Устройство представляет собой алюминиевую трубку, установленную на лабораторном шейкере и откачиваемую водяным насосом.

Сплит-синтез и синтез пула впервые был применен для получения пептидных библиотек на твердой подложке. Синтез осуществлялся в самодельном ручном устройстве, показанном на рисунке. Устройство имеет трубку с 20 отверстиями, к которой можно присоединять реакционные сосуды. Один конец трубки соединен с контейнером для отходов и водяным насосом. Слева показаны загрузка и фильтрация, справа положение муфты и встряхивания. В первые годы комбинаторной химии автомат был сконструирован и коммерциализирован в AdvancedChemTech (Луисвилл, штат Кентукки, США). Все операции синтеза S&P выполняются автоматически под управлением компьютера. В настоящее время автоматический синтезатор Titan 357 доступен в компании aapptec (Луисвилл, штат Кентукки, США).[6]

Кодированный сплит и синтез пула

Хотя в синтезе S&P на каждой бусине образуется одно соединение, его структура неизвестна. По этой причине были введены методы кодирования, чтобы помочь определить идентичность соединения, содержащегося в выбранном шарике. Кодирующие молекулы присоединяются к шарикам параллельно со связью BB. Структура кодирующей молекулы должна быть легче определена, чем структура члена библиотеки на бусине. Ohlmeyer et al. опубликовал метод двоичного кодирования.[7] Они использовали смеси из 18 меченых молекул, которые после отделения их от гранул можно было идентифицировать с помощью электронной газовой хроматографии. Николаев и др. применяемые пептидные последовательности для кодирования[8]Саркар и др. описали хиральные олигомеры пентеновых амидов (COPA), которые можно использовать для создания массово кодируемых библиотек OBOC.[9]Kerr et al. представил инновационный вид кодирования.[10] К шарикам прикрепляли ортогонально защищенный съемный бифункциональный линкер. Один конец линкера использовали для присоединения неприродных BB библиотеки, в то время как с другим концом были связаны триплеты кодирующих аминокислот. Один из первых и очень успешных методов кодирования был введен Бреннером и Лернером.[11] в 1992 году. Они предложили прикрепить олигомеры ДНК к бусам для кодирования их содержимого. Метод был реализован Нильсеном, Бреннером и Джандой.[12] с использованием бифункционального линкера Kerr et al. присоединить кодирующие олигомеры ДНК. Это позволило расщепить соединение с присоединенным к нему олигомером, кодирующим ДНК.

Сплит-синтез и объединение в растворе

Han et al. описал метод, который позволяет сохранить преимущества как высокой эффективности синтеза S&P, так и преимущества гомогенной среды в химических реакциях.[13] В их методе полиэтиленгликоль (PEG) был использован в качестве растворимой основы в синтезе пептидных библиотек S&P.

MeO-CH2-CH2-O- (CH2-CH2-O) n-CH2-CH2-OH

ПЭГ оказался подходящим для этой цели, поскольку он растворим в большом количестве водных и органических растворителей, и его растворимость обеспечивает гомогенные условия реакции, даже когда присоединенная молекула сама по себе нерастворима в реакционной среде. Отделение от раствора полимера и связанных с ним синтезированных соединений может быть достигнуто осаждением и фильтрацией. Осаждение требует концентрирования реакционных растворов, затем разбавления диэтиловым эфиром или трет-бутилметиловым эфиром. В тщательно контролируемых условиях осаждения полимер со связанными продуктами осаждается в кристаллической форме, а нежелательные реагенты остаются в растворе. В твердой фазе, при синтезе S&P, на каждой грануле образуется одно соединение, и, как следствие, количество соединений не может превышает количество бусинок. Таким образом, теоретическое максимальное количество соединений зависит от количества твердой подложки и размера шариков. На 1 г полистирольной смолы, например, можно синтезировать максимум 2 миллиона соединений, если диаметр шариков смолы составляет 90 мкм, и 2 миллиарда можно получить, если размер шариков составляет 10 мкм. На практике твердую основу используют в избытке (часто в десять раз), чтобы убедиться, что все ожидаемые компоненты сформированы. Вышеуказанное ограничение полностью снимается, если не использовать твердую подложку, и синтез проводят в растворе. В этом случае нет верхнего предела относительно количества компонентов библиотеки. Как количество компонентов, так и количество библиотеки можно свободно решать, основываясь только на практических соображениях. Важная модификация была внесена в синтез кодируемых ДНК комбинаторных библиотек Харбери и Халпином.[14] В их случае твердая подложка заменяется кодирующими олигомерами ДНК. Это позволяет синтезировать библиотеки, содержащие даже триллионы компонентов, и проводить их скрининг с помощью методов связывания сродства. Другой способ проведения S&P синтеза в фазе раствора - это применение смол-поглотителей для удаления побочных продуктов. Смолы-поглотители - это полимеры, имеющие функциональные группы, которые позволяют взаимодействовать и связывать компоненты избытка реагентов, а затем отфильтровывают их из реакционной смеси.[15] Два примера: смола, содержащая первичные аминогруппы, может удалять избыток ацилхлоридов из реакционных смесей, в то время как смола ацилхлорида удаляет амины. Фторсодержащая технология была описана Курраном.[16] В фторированном синтезе используются функционализированные перфторалкильные (Rf) группы, такие как 4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,9-тридекафторононильная группа {CF3 (CF2) 4CF2CH2CH2-}, прикрепленная к субстратам. или реагенты. Группы Rf позволяют удалить продукт или реагенты из реакционной смеси. В конце процедуры группы Rf, прикрепленные к субстрату, могут быть удалены из продукта. Путем присоединения групп Rf к субстрату синтез можно проводить в растворе, и продукт может быть отделен от реакционной смеси жидкостной экстракцией с использованием фторсодержащего растворителя, такого как перфторметилциклогексан или перфторгексан. Можно видеть, что функция групп Rf в синтезе аналогична функции твердого или растворимого носителя. Если метка Rf присоединена к реагенту, его избыток может быть удален из реакционной смеси путем экстракции. Реагенты на полимерной основе также используются в синтезе S&P.[17]

Особенности синтеза комбинаторных библиотек, кодируемых ДНК

Самосборные библиотеки, кодированные ДНК

Самостоятельная сборка библиотеки. Круг и пятиугольник - это BB, синий и красный прямоугольники - их коды. Зеленые прямоугольники - гибридизирующие домены

Одним из лучших примеров особенностей, обусловленных кодированием ДНК, является синтез библиотеки самосборки, представленный Mlecco et al.[18] Сначала синтезируются две подбиблиотеки. В одной из подбиблиотек BB прикреплены к 5’-концу олигонуклеотида, содержащего домен димеризации, за которым следуют коды BB. В другой подбиблиотеке BB присоединены к 3’-концу олигонуклеотидов, также содержащих домен димеризации и коды другого набора BB. Две подбиблиотеки смешивают в эквимолярных количествах, нагревают до 70 ° C, затем дают остыть до комнатной температуры, гетеродимеризуются и формируют самособирающуюся комбинаторную библиотеку. Один член такой библиотеки двух фармакофоров показан на рисунке. При скрининге аффинности два BB фармакофора могут взаимодействовать с двумя соседними сайтами связывания целевого белка.

Библиотеки шаблонов ДНК

Схема пошагового темплатного синтеза. Круг, квадрат, звезда - это BB, цветные прямоугольники - коды BB.
Сцепление в йокто-реакторе

При синтезе шаблонных комбинаторных библиотек ДНК способность двойной спирали ДНК направлять регион-специфические химические реакции используется Gartner et al.[19] [20] Реагенты, связанные с ДНК, хранятся в непосредственной близости. Это эквивалентно виртуальному увеличению локальной концентрации, которая почти постоянна на расстоянии 30 нуклеотидов. Эффект близости помогает протекать реакциям. Синтезированы две библиотеки. Библиотека шаблонов, содержащая на одном конце одну из BB и ее код, за которыми следуют две области отжига для кодов BB двух библиотек реагентов. Каждая из двух библиотек реагентов содержит кодирующий олигонуклеотид, связанный расщепляемыми связями с реагентом (BB), способным образовывать связь с уже связанным BB, используя эффект близости. Синтез осуществляется в два этапа, как показано на рисунке. Каждый этап состоит из трех операций: смешивания, отжига, муфты-скалывания.

Синтез в Yoctoreactor

Йоктореакторный метод, предложенный Hansen et al.[21] основан на геометрии и стабильности трехмерной структуры ДНК, которая создает химический реактор размером в йоктолитр (10-24 л), в котором близость ВВ вызывает реакции между ними. Олигомеры ДНК содержат штрих-код ДНК для прикрепленных ВВ и образуют структурные элементы реактора. Один вид формата йоктореактора показан на рисунке.

Маршрутизация с кодировкой последовательности

Маршрутизация с кодировкой последовательности
Синтез библиотеки с одним фармакофором путем пошагового связывания и кодирования

Харбери и Хэлпин разработали библиотеки шаблонов ДНК, которые, подобно генам, направляют синтез кодируемых ДНК органических библиотек.[22][23] Члены комбинаторной библиотеки шаблонов содержат коды всех ББ и их порядок связывания. На рисунке показан один член простой библиотеки шаблонов оцДНК (A), содержащей коды трех BB (2, 4, 6), которые планировалось присоединить последовательно. Кодирующие области разделены одинаковыми некодирующими областями (1, 3, 5, 7) во всех членах. В процедуре, управляемой последовательностью, используется серия столбцов полимерных шариков, каждый из которых покрыт антикодоном одного из BB (B). . Когда библиотека шаблонов переносится в столбец антикодона, соответствующий элемент шаблона захватывается путем гибридизации, а затем соединяется с соответствующим BB. После завершения со всеми колонками антикодона в позиции связывания (CP) библиотеки элюируют из гранул смешанных колонок антикодона, и упомянутые операции повторяют с серией столбцов антикодона следующего CP. На рисунке C показан один член библиотеки шаблонов, захваченный второй «желтой» библиотекой антикодонов CP. Шаблон содержит «красный» BB, уже связанный в CP1, и «желтый» BB, прикрепленный после его захвата. Окончательная библиотека содержит все синтезированные органические соединения, присоединенные к кодирующим их олигомерам ДНК.

Пошаговое связывание и кодирование

Один из наиболее перспективных методов, обычно используемых для кодирования ДНК, применяется при синтезе библиотек с одним фармакофором.[24] Как показано на рисунке, библиотека построена с повторением обычных циклов синтеза S&P. Вторая операция цикла модифицируется: в дополнение к связыванию с BB олигомер кодирующей ДНК удлиняется за счет присоединения кода BB путем лигирования.

Синтез с использованием макроскопических единиц твердой подложки

Были разработаны модификации, позволяющие при раздельном и объединенном синтезе производить известные соединения в больших количествах, чем содержание шарика твердой подложки, и сохранять высокую эффективность исходного метода. Как опубликовано Moran et al.[25] и Nicolau et al.[26] смола, обычно используемая в твердофазном синтезе, была заключена в проницаемые капсулы, включая радиочастотную метку, записывающую ВВ в порядке их связывания. И ручная, и автоматическая машина была сконструирована для сортировки капсул в соответствующие реакционные сосуды. Сяо и др. Представили другой вид маркированного макроскопического твердого носителя. [27] Опоры представляют собой квадратные пластины с привитым полистиролом 1х1 см. Носитель, несущий код, представляет собой керамическую пластину 3x3 мм в центре подставки для синтеза. Код выгравирован на керамической подложке с помощью CO2-лазера в виде двумерного штрих-кода, который может быть считан специальным сканером.

Синтез струн

Прочные опорные блоки. Проницаемая капсула (A), привитая квадратная пластина (B), коронка Mimotope со стержнем, капсула в форме монеты для автоматического сортировщика
Сортировка подразделений поддержки

Синтез струн, представленный Furka et al.[28] использует струнные макроскопические твердые опоры (коронки), и эти единицы идентифицируются по их занимаемому положению на струне. Каждому строительному блоку в синтезе назначается одна строка. На стадии связывания колонна находится в соответствующем реакционном сосуде. Содержимое строк, выходящих из синтетического шага, должно быть перераспределено в строки следующего шага. Единицы не объединяются. Перераспределение, показанное на рисунке, следует правилу комбинаторного распределения: все продукты, образованные на стадии синтеза, поровну делятся между всеми реакционными сосудами следующей стадии синтеза. Могут использоваться различные форматы распределения, что позволяет идентифицировать содержимое каждой коронки в зависимости от положения на новой строке и реакционного сосуда-получателя строки.[29]

Струнные коронки (A), сортировочные лотки с прорезями (B), коронки в прорезях (C), струнные коронки в реакционном сосуде (D), третья остановка в сортировке, коронки, перенесенные в эту остановку, отмечены черным (E)
Эскиз автоматического сортировщика.

Струнные коронки (A), сортировочные лотки с прорезями (B), коронки в прорезях (C), струнные коронки в реакционном сосуде (D), третья остановка в сортировке, коронки, перенесенные в эту остановку, отмечены черным (E)]] На рисунке показаны завязанные короны и лотки, используемые при ручной сортировке. Целевой лоток постепенно перемещается в направлении стрелки. Коронки переносятся группами из прорезей исходного лотка во все противоположные прорези целевого лотка. Трансферы управляются компьютером, а изделия идентифицируются по положению коронок на последних струнах. Также была описана быстрая автоматическая сортировочная машина.[30] Сортировщик показан на рисунке. Он имеет два набора выровненных трубок. Нижние постепенно перемещаются в направлении, указанном стрелкой, и монетоподобные блоки сбрасываются из верхних трубок источника в нижние трубки назначения. Пробирки также могут служить реакционными сосудами. Также было разработано программное обеспечение, которое может управлять сортировкой, если не синтезируется полная комбинаторная библиотека, только готовится набор ее компонентов, которые выбираются из полной библиотеки.[31]

Рекомендации

  1. ^ Furka Á. Tanulmány, gyógyászatilag hasznosítható peptidek szisztematikus felkutatásának lehetőségéről (и Исследование возможности систематического поиска фармацевтически полезных пептидов) https://mersz.hu/mod/object.php?objazonosito=matud202006_f42772_i2
  2. ^ Á. Фурка, Комбинаторная химия: 20 лет на… Открытие лекарств сегодня 2002, 7, 1-2.
  3. ^ Á. Фурка, Ф. Себастьен, М. Асгедом, Г. Дибо, Рог изобилия пептидов путем синтеза в основных моментах современной биохимии, Труды 14-го Международного конгресса по биохимии, VSP. Утрехт, Нидерланды, 1988, т. 5. С. 47.
  4. ^ Фурка А., Себестьен Ф, Асгедом М., Дибо Дж. (1991) Общий метод быстрого синтеза многокомпонентных пептидных смесей, Int J Peptide Protein Res 37; 487-93.
  5. ^ Меррифилд Р. Б. Твердофазный синтез пептидов. I. Синтез тетрапептида (1963) J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154.
  6. ^ https://www.peptide.com/peptide-synthesizers/titan/
  7. ^ Ohlmeyer MHJ, Swanson RN, Dillard LW, Reader JC, Asouline G, Kobayashi R, Wigler M, Still WC (1993) Комплексные синтетические химические библиотеки, проиндексированные с помощью молекулярных тегов, Proc Natl Acad Sci USA 90; 10922-10926.
  8. ^ В. Николаев, А. Стиерандова, В. Крчнак, Б. Селигман, К. С. Лам, С. Е. Салмон, М. Лебль Pept. Res. 1993, 6, 161.
  9. ^ Sarkar M, Pascal BD, Steckler C, Aquino C., Micalizio GC, Kodadek T., Chalmers MJ (1993) Декодирование комбинаторных библиотек с разделением и объединением с помощью тандемной масс-спектрометрии с диссоциацией электронного переноса, J Am Soc Mass Spectrom 24 (7): 1026- 36.
  10. ^ Дж. М. Керр, С. С. Банвилл, Р. Н. Цукерманн, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 2529.
  11. ^ S. Brenner и R.A. Lerner Proc. Natl. Акад. Sci. США 1992, 89, 5381.
  12. ^ Дж. Нильсен, С. Бреннер, К. Д. Янда, J. ​​Am. Chem. Soc. 1993, 115, 9812.
  13. ^ Х. Хан, М. М. Вулф, С. Бреннер, К. Д. Джанда Жидкофазный комбинаторный синтез Proc Natl Acad Sci USA 1995, 92: 6419.
  14. ^ Харбери Д.Р., Халпин Д.Р. (2000) WO 00/23458.
  15. ^ Стивен В. Лей, Ян Р. Баксендейл, Роберт Н. Лещ, Филип С. Джексон, Эндрю Г. Лич, Дебора А. Лонгботтом, Марселла Неси, Джеймс С. Скотт, Р. Ян Сторер и Стивен Дж. Тейлор Многошаговый органический синтез с использованием реагентов и поглотителей на твердой основе: новая парадигма в создании химической библиотеки J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2000, 3815–4195.
  16. ^ Деннис П. Карран Разделение на уровне стратегии в органическом синтезе: от планирования к практике Angew. Chem. Int. Эд. 1998, 37, 1174 - 1196.
  17. ^ Стивен В. Калдор, Майлз Г. Сигель Комбинаторная химия с использованием реагентов на полимерной основе. Текущее мнение в области химической биологии (1997) 101-106. https://doi.org/10.1016/S1367-5931(97)80115-9.
  18. ^ Melkko S, Scheuermann J, Dumelin CE, Neri D (2004) Закодированные самособирающиеся химические библиотеки Nat Biotechnol 22; 568-574.
  19. ^ Gartner ZJ, Liu DR (2001) Универсальность ДНК-шаблонного синтеза как основы для развития неприродных малых молекул. J Am Chem Soc 123, 6961–3. DOI: 10.1021 / ja015873n.
  20. ^ Сяоюй Ли и Дэвид Р. Лю ДНК-шаблонный органический синтез: природная стратегия контроля химической реакционной способности применительно к синтетическим молекулам Angew. Chem. Int. Эд. 2004 г., 43,4848 - 4870.
  21. ^ Маргит Хаар Хансен, Питер Блакшер, Ларс Кольстер Петерсен, Тара Хайтнер Хансен, Йонас Вестергард Хойфельдт, Курт Вестерагер Готельф, Нильс Якоб, Вест Хансен ДНК-реактор йоктолитрового масштаба для эволюции малых молекул J. AM. ХИМ. SOC. 2009, 131, 1322–1327.
  22. ^ D. R. Halpin, P. B. Harbury DNA Display I. Последовательная маршрутизация популяций ДНК. Биология PLoS. 2004, 2, 1015-1021.
  23. ^ Д. Р. Халпин, П. Б. Harbury DNA Display II. Генетические манипуляции с библиотеками комбинаторной химии для эволюции малых молекул - PLoS Biology 2004, 2, 1022-1030.
  24. ^ Mannocci L, Zhang Y, Scheuermann J, Leimbacher M, De Bellis G, Rizzi E, Dumelin C, Melkko S, Neri D. Высокопроизводительное секвенирование позволяет идентифицировать связывающие молекулы, выделенные из химических библиотек, кодируемых ДНК. Труды Национальной академии наук. 2008; 105: 17670–17675.
  25. ^ Э. Дж. Моран, С. Саршар, Дж. Ф. Каргилл, М. Шахбаз, А Лио, А. М. М. Мьялли, Р. В. Армстронг, J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 10787.
  26. ^ К. С. Николау, X –Y. Xiao, Z. Parandoosh, A. Senyei, M. P. Nova Angew. Chem. Int. Эд. Англ. 1995, 36, 2289.
  27. ^ X.-Y. Сяо, К. Чжао, Х. Поташ, М. П. Нова Ангью. Chem. Int. Эд. Англ., 1997, 36, 780.
  28. ^ Á. Фурка, Дж. В. Кристенсен, Э. Хили, Х. Р. Таннер, Х. Саней Синтез струн. Пространственно адресуемая процедура разделения J. Comb. Chem. 2000, 2, 220.
  29. ^ Фурка А. Перераспределение в комбинаторном синтезе. Теоретический подход. Комбинаторная химия и высокопроизводительный скрининг 2000, 3, 197-209.
  30. ^ Á. Патент Furka, США, 16.07.2002.
  31. ^ Á Фурка, Дж. Дибо, Н. Гомбосурен Подготовка комбинаторных библиотек, собранных из вишен, методом струнного синтеза. Текущие технологии открытия лекарств, 2005, 2, 23-27.