Трипсинизация - Википедия - Trypsinization

Трипсинизация это процесс диссоциации клеток с использованием трипсин, а протеолитический фермент, расщепляющий белки, чтобы отделить прикрепленные клетки от сосуда, в котором они культивируются. При добавлении к клеточной культуре трипсин расщепляет белки, которые позволяют клеткам прилипать к сосуду. Трипсинизация часто используется для переноса клеток в новый сосуд. Когда процесс трипсинизации завершится, клетки будут находиться во взвешенном состоянии и будут иметь округлую форму.

В экспериментальных целях клетки часто выращиваются в контейнерах, которые имеют форму пластиковых колб или тарелок. В таких колбах ячейки снабжены среда роста содержат основные питательные вещества, необходимые для пролиферации, и клетки прилипают к контейнеру и друг к другу по мере роста.

Этот процесс культура клеток или же культура ткани требуется метод отделения клеток от контейнера и друг от друга. Трипсин, фермент обычно встречается в пищеварительный тракт, можно использовать для "переваривания" белки которые облегчают адгезию к контейнеру и между ячейками.

После того, как клетки отсоединились от своего контейнера, необходимо дезактивировать трипсин, если трипсин не является синтетическим, поскольку белки клеточной поверхности также будут расщепляться со временем, и это повлияет на функционирование клеток.[1] Трипсин ингибируется сывороткой, которая обеспечивает двухвалентные катионы, такие как кальций и магний, которые играют роль как во внутриклеточном, так и во межклеточном сигнальном процессе, т.е. формируют CAMs, поэтому сыворотка обычно добавляется в контейнер после отделения клеток - это может быть подтверждено наблюдением под микроскоп.

Трипсинизация часто проводится для обеспечения перехода клеток в новый контейнер, наблюдения для экспериментов или уменьшения степени слияния в колбе путем удаления некоторого процента клеток.

Рекомендации

  1. ^ Huang, H.L .; Hsing, H.W .; Lai, T. C .; Чен, Ю. В .; Lee, T. R .; Chan, H.T .; Лю, П. С .; Wu, C. L .; Lu, Y.C .; Lin, S.T .; Lin, C.W .; Lai, C.H .; Chang, H.T .; Chou, H.C .; Чан, Х. Л. (2010). «Трипсин-индуцированное изменение протеома во время субкультуры клеток в клетках млекопитающих». Журнал биомедицинских наук. 17 (1): 36. Дои:10.1186/1423-0127-17-36. ЧВК  2873939. PMID  20459778.