Получение антигена - Antigen retrieval

Ткани, сохраненные формальдегид, высокореактивное соединение, содержат множество химических модификаций, которые могут снизить обнаруживаемость белков в биомедицинских процедурах, таких как иммуногистохимия. Получение антигена это подход к уменьшению или устранению этих химических модификаций. Два основных метода антиген извлечение опосредовано теплом эпитоп поиск (HIER) и протеолитический индуцированный поиск эпитопа (PIER).

Извлечение эпитопа, индуцированное протеазой (PIER)

В PIER ферменты, включая протеиназу K, трипсин и пепсин, использовались для восстановления связывания антитела с его эпитопом. Предполагаемый механизм действия - расщепление пептидов, маскирующих эпитоп, восстанавливая антигенность.

К недостаткам PIER относятся низкая вероятность восстановления иммунореактивности, а также возможное разрушение морфологии ткани и интересующего антигена.

Извлечение эпитопа, индуцированного нагреванием (HIER)

Считается, что HIER изменяет некоторые поперечные связи и позволяет восстановить вторичную или третичную структуру эпитопа.[1] Протокол требует оптимизации для каждой исследуемой ткани, метода фиксации и антигена.

В целом, HIER имеет гораздо более высокий уровень успеха, чем PIER. HIER можно выполнять с помощью микроволновых печей, скороварок, пароварок для овощей, автоклавов или водяных бань. HIER зависит от времени, температуры, буфера и pH.

Извлечение эпитопа при комнатной температуре (RTER)

RTER включает изменение поперечных связей с использованием кислот, таких как соляная кислота (pH 1) или муравьиная кислота (pH 2).

Рекомендации

  1. ^ «Методы поиска антигена». Системы НИОКР. Получено 20 марта 2019.