Визуализация кальция - Википедия - Calcium imaging

Визуализация кальция это микроскопия метод оптического измерения кальций (Ca2+) статус изолированная ячейка, тканевый или средний. Визуализация кальция использует индикаторы кальция, флуоресцентные молекулы, которые реагируют на связывание кальция.2+ ионы, изменяя свои флуоресцентные свойства. Существует два основных класса индикаторов кальция: химические индикаторы и генетически кодируемые индикаторы кальция (GECI). Этот метод позволил изучить кальциевая сигнализация в большом количестве типов клеток. В нейронах электрическая активность всегда сопровождается притоком Ca2+ ионы. Таким образом, визуализация кальция может использоваться для мониторинга электрической активности сотен нейронов в культуре клеток или у живых животных, что позволило проанализировать функцию нейронные цепи.

Химические индикаторы

Схема типичной установки для кальциевой флуоресцентной визуализации изолированных сердечных миоцитов

Химические индикаторы - это небольшие молекулы, которые могут хелат ионы кальция. Все эти молекулы основаны на EGTA гомолог называется БАПТА, с высокой селективностью по кальцию (Ca2+) ионов против магний (Мг2+) ионы.

В эту группу показателей входят фура-2, Индо-1, флюо-3, флюо-4, Кальций Зеленый-1.

Эти красители часто используются с хелатором. карбоксильные группы замаскированный как ацетоксиметил сложные эфиры, чтобы сделать молекулу липофильной и облегчить проникновение в клетку. Как только индикатор этой формы находится в ячейке, ячейка эстеразы освободит карбоксильные группы, и индикатор сможет связывать кальций. Свободная кислотная форма красителей (т.е.без модификации ацетоксиметилового эфира) также может быть непосредственно введена в клетки через микроэлектрод или же микропипетка что устраняет неопределенности относительно клеточного компартмента, содержащего краситель (ацетоксиметиловый эфир также может попадать в эндоплазматический ретикулум и митохондрии ). Связывание Са2+ ион к молекуле флуоресцентного индикатора приводит либо к увеличению квантовый выход из флуоресценция или выброс /длина волны возбуждения сдвиг. Индивидуальный химический Ca2+ флуоресцентные индикаторы используются для измерения цитозольного кальция в самых разных клеточных препаратах. Первое в реальном времени (скорость видео) Ca2+ визуализация была проведена в 1986 году в клетках сердца с помощью усиленных видеокамер.[1] Более позднее развитие техники с использованием лазерных сканирующих конфокальных микроскопов позволило выявить субклеточный Ca2+ сигналы в виде Ca2+ искры и Ca2+ всплески. Относительные ответы от комбинации химического Ca2+ флуоресцентные индикаторы также использовались для количественной оценки переходных процессов кальция во внутриклеточных органеллах, таких как митохондрии.[2]

Визуализация кальция, также называемая картированием кальция, также используется для исследования ткани миокарда.[3] Картирование кальция - это повсеместный метод, используемый для целых изолированных сердец, таких как мыши, крысы и кролики.

Генетически закодированные индикаторы кальция

Генетически кодируемые индикаторы кальция (GECI) - мощные инструменты, полезные для визуализации in vivo клеточных, онтогенетических и физиологических процессов.[4][5][6][7] GECI не нужно загружать в ячейки; вместо этого гены, кодирующие эти белки, можно легко трансфицировать в клеточные линии. Также возможно создать трансгенных животных, экспрессирующих краситель во всех клетках или выборочно в определенных клеточных подтипах. GECI использовались в исследованиях нейронов,[8][9] Т-клетка,[10] кардиомиоцит,[11] и т.д. В общих чертах, GECI можно разделить на классы, в которых обнаружение кальция основано на флуоресценции или люминесценции; однако оба из них неизбежно полагаются на флуоресцентные белки в качестве репортеров, включая зеленый флуоресцентный белок. GFP и его варианты (eGFP, YFP, CFP).

Из флуоресцентных вариантов системы индикаторов кальция можно далее разделить на системы с одним флуоресцентным белком (FP) и системы с парными флуоресцентными белками. Камгаро были одними из первых разработанных вариантов, включающих единую белковую систему. Камгаро пользуются кальмодулин (CaM), белок, связывающий кальций. В этих структурах CaM вставлен в середину желтого флуоресцентного белка (YFP) в Y145. Предыдущие исследования мутагенеза показали, что мутации в этом положении придают стабильность pH при сохранении флуоресцентных свойств, что делает Y145 интересной точкой вставки. Кроме того, N- и C-концы YFP связаны пептидным линкером (GGTGGS). Когда CaM связывается с Ca2 +, эффективная pKa снижается, что позволяет депротонировать хромофор.[12] Это приводит к усилению флуоресценции при связывании кальция интенсиометрическим способом. Такое обнаружение отличается от логометрических систем, в которых наблюдается изменение спектров поглощения / излучения в результате связывания Ca2 +.[13] Позднее разработанная система с одним FP, получившая название G-CaMP, также вызывает GFP с циклической перестановкой. Один из концов слит с CaM, а другой слит с M13 (кальмодулин-связывающий домен легкой миозиновой киназы).[14] Белок сконструирован таким образом, что концы расположены близко в пространстве, что позволяет связыванию Ca2 + вызывать конформационные изменения и модуляцию хромофора, обеспечивая повышенную флуоресценцию. G-CaMP и его усовершенствованные варианты имеют наномолярные значения аффинности связывания.[15] Последним вариантом единственного белка является CatchER, который обычно считается индикатором более низкого сродства. Его связывающий кальций карман весьма отрицателен; Связывание катиона помогает экранировать большую концентрацию отрицательного заряда и позволяет восстановить флуоресценцию.[16]

В отличие от этих систем парные флуоресцентные белковые системы, которые включают прототипы Камелеоны. Камелеоны состоят из двух разных флуоресцентных белков, CaM, M13 и линкера глицилглицина.[13] В отсутствие Ca2 + флуоресцентным будет только донорский флуоресцентный белок с синим сдвигом. Однако конформационные изменения, вызванные связыванием кальция, перемещают флуоресцентный белок с красным смещением, что позволяет FRET (Передача энергии резонанса Форстера). Индикаторы Cameleon выдают логометрический сигнал (т. Е. Измеренная эффективность FRET зависит от концентрации кальция). Исходные варианты хамелеонов изначально были более чувствительны к Ca2 + и подвергались кислотному тушению.[17] Такие недостатки были устранены мутациями Q69K и V68L. Оба эти остатка были близки к скрытому анионному хромофору, и эти мутации, вероятно, препятствуют протонированию, обеспечивая большую устойчивость к pH.

Все большее значение в обнаружении кальция приобретают GECI в ближнем ИК-диапазоне (NIR), которые могут открыть возможности для мультиплексирования различных индикаторных систем и более глубокого проникновения в ткани. NIR полагаются на биливердин-связывающие флуоресцентные белки, которые в основном происходят из бактериальных фитохромы. Системы NIR похожи на перикамы inGCverse в том, что оба испытывают снижение флуоресценции при связывании Ca2 +. RCaMP и RGECO работают на длине волны 700+ нм, но они довольно тусклые и сильно рассеяны.[18] Аналог Cameleon, использующий NIR FRET, также был успешно построен.[19]

Специальный класс GECI предназначен для формирования постоянной флуоресцентной метки в активных нейронах. Они основаны на фотопереключаемом белке. Эос который превращается из зеленого в красный в результате фотокаталитического (с фиолетовым светом) расщепления основной цепи.[20] В сочетании с CaM фиолетовый свет фотопреобразует только нейроны с повышенным уровнем кальция. SynTagMA - это версия CaMPARI2, ориентированная на синапсы.[21]

В то время как флуоресцентные системы широко используются, биолюминесцентные репортеры Ca2 + могут также иметь потенциал из-за их способности устранять аутофлуоресценцию, фотообесцвечивание (длина волны возбуждения не требуется), биологическое разложение и токсичность, в дополнение к более высокому соотношению сигнал / шум.[22] Такие системы могут полагаться на экуорин и целентеразин люциферин. Связывание Ca2 + вызывает конформационные изменения, которые облегчают окисление целентеразина. Полученный фотопродукт излучает синий свет, возвращаясь в основное состояние. Совместная локализация экворина с GFP способствует BRET / CRET (биолюминесценция или хемилюминесцентный резонансный перенос энергии),[16] что привело к увеличению яркости на 19–65. Такие структуры можно использовать для измерения концентраций кальция от миллимолярных до наномолярных. Аналогичная система задействует обелин и его целентерамид люциферина, которые могут обладать более быстрым откликом на кальций и нечувствительностью к Mg2 +, чем его аналог акеорина.[23] Такие системы могут также использовать самосборку компонентов люциферазы. В системе, получившей название «нано-фонарь», люцифераза RLuc8 расщепляется и размещается на разных концах CaM. Связывание с кальцием сближает компоненты RLuc8, реформируя люциферазу и позволяя ей переходить на акцепторный флуоресцентный белок.

Чтобы свести к минимуму повреждение визуализированных клеток, часто используют двухфотонную микроскопию для обнаружения флуоресценции репортеров.[24] Использование длин волн ближнего ИК диапазона и минимизация осевого разброса точечной функции[25] обеспечивает нанометровое разрешение и глубокое проникновение в ткань. Динамический диапазон часто определяется из таких измерений. Для не-ратиометрических индикаторов (обычно индикаторов одного белка) это отношение интенсивностей флуоресценции, полученных в условиях насыщения и истощения Ca2 +, соответственно. Однако для логометрических показателей динамический диапазон - это отношение максимального коэффициента эффективности FRET (насыщенный кальцием) к минимальному коэффициенту эффективности FRET (обедненный кальцием). Еще одна общая величина, используемая для измерения сигналов, производимых потоками концентрации кальция, - это отношение сигнала к базовой линии (SBR), которое представляет собой просто отношение изменения флуоресценции (F - F0) к базовой флуоресценции. Это можно связать с отношением сигнал / шум (SNR), умножив SBR на квадратный корень из числа подсчитанных фотонов.[16]

GECIГодЗондированиеСоставление отчетовПредшественник
Камелеоны[26]1997КальмодулинПара FRET: BFP или CFP и GFP или YFP-
FIP-CBSM[27]1997КальмодулинПара FRET: BFP и RFP-
Перикамы[28]2000КальмодулинcpGFP-
GCaMP[29][30]2000КальмодулинcpEGFP-
TN-L15[31]2004Модифицированный тропонин C скелетных мышц курицыПара FRET: YFP (цитрин) и CFP (церулеан)-
TN-HumTnC[31]2004Сердечный тропонин С человекаПара FRET: YFP (цитрин) и CFP (церулеан)-
TN-XL[32]2006Модифицированный тропонин C скелетных мышц курицыПара FRET: пермутированный YFP (цитрин) и CFP (церулеан)TN-L15
TN-XXL[33]2008Модифицированный csTnC в TN-XLПара FRET: пермутированный YFP (цитрин) и CFP (церулеан)TN-XL
Twitch's[34]2014Тропонин СПара FRET (разные из двух FP)-
RCaMP1[35]2013КальмодулинmRuby (красный FP)-
jRGECO1a[36]2016КальмодулинПриложение (красный FP)Р-ГЕКО[37]

Особый класс генетически кодируемых индикаторов кальция разработан для формирования постоянной флуоресцентной метки в активных нейронах. Они основаны на фотопереключаемом белке. МЕО который меняет цвет с зеленого на красный при освещении фиолетовым светом. В сочетании с датчиком кальция кальмодулин, фиолетовый свет фотопреобразует только нейроны с повышенным уровнем кальция. SynTagMA - это версия CaMPARI2, ориентированная на синапсы.

GECIГодЗондированиеСоставление отчетовПредшественник
КАМПАРИ[38]2015Кальмодулин + фиолетовый светmEos: преобразование зеленого в красный-
КАМПАРИ2[39]2018Кальмодулин + фиолетовый светmEos: преобразование зеленого в красныйКАМПАРИ
SynTagMA[40]2020Кальмодулин + фиолетовый светmEos: преобразование зеленого в красныйКАМПАРИ2

использование

Независимо от типа используемого индикатора, процедура визуализации в целом очень похожа. Клетки, загруженные индикатором или экспрессирующие его в случае GECI, могут быть просмотрены с помощью флуоресцентного микроскопа и захвачены с помощью Scientific CMOS (sCMOS)[41] камера или CCD камера. Конфокальный и двухфотонные микроскопы обеспечивают возможность оптического разделения, так что кальциевые сигналы могут быть разделены на микродомены, такие как дендритные шипы или же синаптические бутоны даже в толстых образцах, таких как мозг млекопитающих. Изображения анализируются путем измерения изменений интенсивности флуоресценции для одной длины волны или двух длин волн, выраженных в виде отношения (ратиометрические показатели). При необходимости полученные значения интенсивности и соотношения флуоресценции могут быть нанесены на график против откалиброванных значений для известного Ca2+ уровни для измерения абсолютного Ca2+ концентрации. Микроскопия светового поля методы[42] расширить функциональные возможности считывания нейронной активности в трехмерных объемах.

Рекомендации

  1. ^ Каннелл М.Б., Берлин-младший, Ледерер В.Дж. (01.01.1987). «Внутриклеточный кальций в сердечных миоцитах: переходные процессы кальция, измеренные с помощью флюоресцентной визуализации». Серия Общества общих физиологов. 42: 201–14. PMID  3505361.
  2. ^ Иванников М.В., Маклеод Г.Т. (июнь 2013 г.). «Уровни свободного Ca²⁺ в митохондриях и их влияние на энергетический метаболизм в двигательных нервных окончаниях дрозофилы». Биофизический журнал. 104 (11): 2353–61. Bibcode:2013BpJ ... 104.2353I. Дои:10.1016 / j.bpj.2013.03.064. ЧВК  3672877. PMID  23746507.
  3. ^ Хаймс Р., Уолтон Р.Д., Пасуа П., Бернус О., Ефимов И.Р., Кей М.В. (июнь 2016 г.). «Технический обзор оптического картирования внутриклеточного кальция в ткани миокарда». Американский журнал физиологии. Сердце и физиология кровообращения. 310 (11): H1388-401. Дои:10.1152 / ajpheart.00665.2015. ЧВК  4935510. PMID  27016580.
  4. ^ Хендель, Т., Манк, М., Шнелл, Б., Грисбек, О., Борст, А., и Рейфф, Д. Ф. (2008). Изменения флуоресценции генетических индикаторов кальция и OGB-1 коррелировали с нервной активностью и кальцием in vivo и in vitro. Журнал неврологии: официальный журнал Общества нейробиологии, 28 (29), 7399–7411.
  5. ^ Гордон С. и Дикинсон М. Х. (2006). Роль кальция в регулировании механической силы полета насекомых. Слушания Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки, 103 (11), 4311–4315.
  6. ^ Керр, Р., Лев-Рам, В., Бэрд, Г., Винсент, П., Цзян, Р. Ю., и Шафер, В. Р. (2000). Оптическая визуализация переходных процессов кальция в нейронах и мышцах глотки C. elegans. Нейрон, 26 (3), 583–594.
  7. ^ Ким, Дж., Ли, С., Юнг, К. и др. Интенсиометрические биосенсоры визуализируют активность множества малых GTPases in vivo. Нац Коммуна 10, 211 (2019).
  8. ^ Афшар Сабер W, Гаспароли FM, Диркс М.Г., Ганн-Мур Ф.Дж., Антковяк М (2018). «Полностью оптический анализ для изучения биологических нейронных сетей». Границы неврологии. 12: 451. Дои:10.3389 / fnins.2018.00451. ЧВК  6041400. PMID  30026684.
  9. ^ Ковальчук Ю., Хомма Р., Лян Ю., Маслюков А., Гермес М., Теструп Т. и др. (Февраль 2015 г.). «Свойства ответа запаха in vivo мигрирующих взрослых нейронов в обонятельной луковице мыши». Nature Communications. 6: 6349. Bibcode:2015 НатКо ... 6,6 349 тыс.. Дои:10.1038 / ncomms7349. PMID  25695931.
  10. ^ Mues M, Bartholomäus I, Thestrup T, Griesbeck O, Wekerle H, Kawakami N, Krishnamoorthy G (июнь 2013 г.). «Анализ активации Т-клеток в центральной нервной системе in vivo в реальном времени с использованием генетически кодируемого индикатора кальция». Природа Медицина. 19 (6): 778–83. Дои:10,1038 / нм.3180. PMID  23685843.
  11. ^ Шиннави Р., Хубер И., Майзельс Л., Шахин Н., Гепштейн А., Арбель Г. и др. (Октябрь 2015 г.). «Мониторинг индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток кардиомиоцитов с помощью генетически кодированных флуоресцентных репортеров кальция и напряжения». Отчеты о стволовых клетках. 5 (4): 582–96. Дои:10.1016 / j.stemcr.2015.08.009. ЧВК  4624957. PMID  26372632.
  12. ^ Бэрд, Г. С., Захариас, Д. А., и Циен, Р. Ю. (1999). Круговая перестановка и вставка рецептора в зеленые флуоресцентные белки. Слушания Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки, 96 (20), 11241–11246.
  13. ^ а б Парк, Дж. Г., и Палмер, А. Э. (2014). Количественное измерение Ca2 + и Zn2 + в клетках млекопитающих с использованием генетически кодируемых флуоресцентных биосенсоров. Методы молекулярной биологии (Клифтон, Нью-Джерси), 1071, 29–47.
  14. ^ Родригес Э.А., Кэмпбелл Р.Э., Лин Дж.Й., Линь М.З., Мияваки А., Палмер А.Э., Шу Х, Чжан Дж., Цзянь Р.Я. Набор инструментов для выращивания и свечения флуоресцентных и фотоактивных белков. Trends Biochem Sci. 2017 Февраль; 42 (2): 111-129.
  15. ^ Накай Дж., Окура М. и Имото К. Зонд Ca2 + с высоким отношением сигнал / шум, состоящий из одного зеленого флуоресцентного белка. Nat Biotechnol 19, 137–141 (2001).
  16. ^ а б c Перес Колденкова, В., и Нагаи, Т. (2013). Генетически закодированные индикаторы Ca (2+): свойства и оценка. Biochimica et biophysica acta, 1833 (7), 1787–1797.
  17. ^ Мияваки А., Грисбек О., Хейм Р. и Циен Р. Ю. (1999). Динамические и количественные измерения Ca2 + с использованием улучшенных камелеонов. Слушания Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки, 96 (5), 2135–2140.
  18. ^ Цянь Ю., Пяткевич К.Д., Мак Ларни Б. и др. Генетически кодируемый флуоресцентный индикатор ионов кальция ближнего инфракрасного диапазона. Нат. Методы 16, 171–174 (2019).
  19. ^ Шеметов А.А., Монахов М.В., Чжан К.и др. Генетически кодируемый индикатор кальция в ближнем инфракрасном диапазоне для визуализации in vivo. Nat Biotechnol (2020).
  20. ^ Ниенхаус, К., Ниенхаус, Г. У., Виденманн, Дж., И Нар, Х. (2005). Структурная основа фотоиндуцированного расщепления белка и превращения флуоресцентного белка EosFP из зеленого в красный. Слушания Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки, 102 (26), 9156–9159.
  21. ^ Фоск, Б.Ф., Сан, Ю., Дана, Х., Янг, CT, Охьяма, Т., Тадросс, М.Р., Патель, Р., Златич, М., Ким, Д.С., Аренс, М.Б., Джаяраман, В., Looger, LL, и Schreiter, ER (2015). Нейронные цепи. Маркировка активных нейронных цепей in vivo с помощью разработанных интеграторов кальция. Наука, 347 (6223), 755–760.
  22. ^ Бобе, В., Ле Муэллик, Х., Кэмпбелл, А. К., Лукас-Менье, Э., Фосье, П., и Брюле, П. (2000). Химерный зеленый флуоресцентный белок-экворин как биолюминесцентный репортер Ca2 + на одноклеточном уровне. Слушания Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки, 97 (13), 7260–7265.
  23. ^ Борис А. Илларионов, Людмила А. Франк, Виктория А. Илларионова, Владимир С. Бондарь, Евгений С. Высоцкий, Джон Р. Блинкс, Рекомбинантный обелин: клонирование и экспрессия кДНК, очистка и характеристика в качестве индикатора кальция, Методы в Enzymology, Academic Press, Volume 305, 2000 (223-249).
  24. ^ О, Дж., Ли, К. и Каанг, Б. К. (2019). Визуализация и анализ генетически закодированных индикаторов кальция, связывающих нейронные цепи и поведение. Корейский журнал физиологии и фармакологии: официальный журнал Корейского физиологического общества и Корейского общества фармакологии, 23 (4), 237–249. https://doi.org/10.4196/kjpp.2019.23.4.237
  25. ^ Каминер, Идо; Немировский Джонатан; Сегев Мордехай (2013). «Оптимизация 3D многофотонной флуоресцентной микроскопии». Письма об оптике. 38 (19): 3945–3948
  26. ^ Мияваки А., Ллопис Дж., Хайм Р., Маккаффери Дж. М., Адамс Дж. А., Икура М., Цзянь Р. Я. (август 1997 г.). «Флуоресцентные индикаторы Са2 + на основе зеленых флуоресцентных белков и кальмодулина». Природа. 388 (6645): 882–7. Bibcode:1997Натура.388..882М. Дои:10.1038/42264. PMID  9278050.
  27. ^ Ромозер В.А., Хинкль П.М., Персечини А. (май 1997 г.). «Обнаружение в живых клетках Ca2 + -зависимых изменений флуоресцентного излучения индикатора, состоящего из двух зеленых вариантов флуоресцентного белка, связанных кальмодулин-связывающей последовательностью. Новый класс флуоресцентных индикаторов». Журнал биологической химии. 272 (20): 13270–4. Дои:10.1074 / jbc.272.20.13270. PMID  9148946.
  28. ^ Нагаи Т., Савано А., Парк ES, Мияваки А. (март 2001 г.). «Зеленые флуоресцентные белки с круговой перестановкой, сконструированные для восприятия Ca2 +». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 98 (6): 3197–202. Bibcode:2001ПНАС ... 98.3197Н. Дои:10.1073 / pnas.051636098. ЧВК  30630. PMID  11248055.
  29. ^ Накаи Дж., Окура М., Имото К. (февраль 2001 г.). «Зонд Ca (2+) с высоким отношением сигнал / шум, состоящий из одного зеленого флуоресцентного белка». Природа Биотехнологии. 19 (2): 137–41. Дои:10.1038/84397. PMID  11175727.
  30. ^ Дана Х., Сан Й., Мохар Б., Халс Б.К., Керлин А.М., Хассеман Дж. П. и др. (Июль 2019). «Высокоэффективные датчики кальция для визуализации активности нейрональных популяций и микрокомпартментов». Методы природы. 16 (7): 649–657. Дои:10.1038 / s41592-019-0435-6. PMID  31209382.
  31. ^ а б Хайм Н., Грисбек О. (апрель 2004 г.). «Генетически закодированные индикаторы динамики клеточного кальция на основе тропонина С и зеленого флуоресцентного белка». Журнал биологической химии. 279 (14): 14280–6. Дои:10.1074 / jbc.M312751200. PMID  14742421.
  32. ^ Манк М., Райфф Д.Ф., Хайм Н., Фридрих М.В., Борст А., Грисбек О. (март 2006 г.). «Кальциевый биосенсор на основе FRET с быстрой кинетикой сигнала и высоким изменением флуоресценции». Биофизический журнал. 90 (5): 1790–6. Bibcode:2006BpJ .... 90,1790M. Дои:10.1529 / biophysj.105.073536. ЧВК  1367327. PMID  16339891.
  33. ^ Манк М., Сантос А.Ф., Диренбергер С., Миссис-Флогель Т.Д., Хофер С.Б., Штейн В. и др. (Сентябрь 2008 г.). «Генетически кодируемый индикатор кальция для хронической двухфотонной визуализации in vivo». Методы природы. 5 (9): 805–11. Дои:10.1038 / nmeth.1243. PMID  19160515.
  34. ^ Теструп Т., Литцлбауэр Дж., Бартоломеус I, Муес М., Руссо Л., Дана Х. и др. (Февраль 2014). «Оптимизированные ратиометрические датчики кальция для функциональной визуализации in vivo нейронов и Т-лимфоцитов» (PDF). Методы природы. 11 (2): 175–82. Дои:10.1038 / nmeth.2773. HDL:11858 / 00-001M-0000-0017-C32A-B. PMID  24390440.
  35. ^ Акербум Дж., Каррерас Кальдерон Н., Тиан Л., Вабниг С., Пригге М., Толо Дж. И др. (2013). «Генетически закодированные индикаторы кальция для многоцветной визуализации нейронной активности в сочетании с оптогенетикой». Границы молекулярной неврологии. 6: 2. Дои:10.3389 / fnmol.2013.00002. ЧВК  3586699. PMID  23459413.
  36. ^ Дана Х., Мохар Б., Сан Й., Нараян С., Гордус А., Хассеман Дж. П. и др. (Март 2016 г.). «Чувствительные индикаторы кальция красного белка для визуализации нервной активности». eLife. 5: e12727. Дои:10.7554 / eLife.12727. ЧВК  4846379. PMID  27011354.
  37. ^ Чжао Ю., Араки С., Ву Дж., Терамото Т., Чанг Ю.Ф., Накано М. и др. (Сентябрь 2011 г.). «Расширенная палитра генетически закодированных индикаторов Ca²⁺». Наука. 333 (6051): 1888–91. Bibcode:2011Научный ... 333.1888Z. Дои:10.1126 / science.1208592. ЧВК  3560286. PMID  21903779.
  38. ^ Fosque BF, Sun Y, Dana H, Yang CT, Ohyama T, Tadross MR и др. (Февраль 2015 г.). «Нейронные цепи. Маркировка активных нейронных цепей in vivo с помощью разработанных интеграторов кальция». Наука. 347 (6223): 755–60. Дои:10.1126 / science.1260922. PMID  25678659.
  39. ^ Moeyaert B, Holt G, Madangopal R, Perez-Alvarez A, Fearey BC, Trojanowski NF, et al. (Октябрь 2018 г.). «Усовершенствованные методы маркировки активных популяций нейронов». Nature Communications. 9 (1): 4440. Bibcode:2018НатКо ... 9,4440 млн. Дои:10.1038 / s41467-018-06935-2. ЧВК  6202339. PMID  30361563.
  40. ^ Перес-Альварес А., Фири BC, О'Тул Р.Дж., Ян В., Арганда-Каррерас I, Ламот-Молина П.Дж. и др. (Май 2020 г.). «Стоп-кадр изображения синаптической активности с использованием SynTagMA». Nature Communications. 11 (1): 2464. Дои:10.1038 / с41467-020-16315-4. ЧВК  7235013. PMID  32424147.
  41. ^ Нгуен Дж. П., Шипли Ф. Б., Линдер А. Н., Пламмер Г. С., Лю М., Сетру С. С., Шаевиц Д. В., Лейфер А. М. (февраль 2016 г.). "Визуализация кальция всего мозга с клеточным разрешением у свободно ведущих Caenorhabditis elegans". Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 113 (8): E1074–81. arXiv:1501.03463. Bibcode:2016PNAS..113E1074N. Дои:10.1073 / pnas.1507110112. ЧВК  4776509. PMID  26712014.
  42. ^ Пегард, Северная Каролина, Лю Х.Й., Антипа Н., Герлок М., Адесник Х., Уоллер Л. (май 2016 г.). «Компрессионная световая микроскопия для записи трехмерной нейронной активности». Optica. 3 (5): 517–24. Bibcode:2016 Оптический ... 3..517P. Дои:10.1364 / optica.3.000517.

дальнейшее чтение