Диэтиламиноэтилцеллюлоза - Diethylaminoethyl cellulose

Схематическая структура DEAE-C: положительно заряженные группы диэтиламиноэтанола могут связывать отрицательные ионы

Диэтиламиноэтилцеллюлоза (DEAE-C) является положительно заряженным смола используется в ионообменная хроматография, тип колоночная хроматография, для разделения и очистки белков и нуклеиновых кислот. Гранулы гелевой матрицы дериватизированный с диэтиламиноэтанол (DEAE) и блокируют отрицательно заряженные белки или нуклеиновые кислоты в матрице. Белки высвобождаются из смолы путем увеличения концентрации соли в растворителе или изменения pH раствора, чтобы изменить заряд белка.

Подготовка

DEAE-C синтезируется катализируемой щелочью реакцией целлюлоза (получен из хлопковая фабрика ) с 2-хлортриэтиламином, как показано ниже:[1]

Препарат целлюлозы DEAE.svg

Типы

Общие смолы

DEAE-C обычно коммерчески доступен как DE52 и DE53.[2] Эти смолы готовятся предварительно набухшими.[3] хотя целлюлозообменники набухают в сильной основной среде, увеличивая доступ к участкам связывания.[4]

DE52 имеет pKa из 11,5.[нужна цитата ] Диапазон буферизации для диэтаноламин составляет 8,4-8,8, хотя диапазон для DEAE-C варьируется от производителя.[5]

DEAE-D

DEAE-Декстран (DEAE-D) представляет собой положительно заряженное производное декстрана, которое можно использовать для вакцина производство, генная терапия, стабилизация белка, дислипидемия профилактика, флокулянты и многие другие приложения.[6] DEAE-D также используется для трансфекция клетки животных с чужеродной ДНК. Его добавляют в раствор, содержащий ДНК, предназначенную для трансфекции. Он связывается и взаимодействует с отрицательно заряженными молекулами ДНК и по неизвестному механизму вызывает поглощение нуклеиновые кислоты по ячейке. Эта процедура очень подходит для временной трансфекции, используемой для различных молекулярная биология исследования.[7]

Прочие производные

DEAE-Сефароза, DEAE-650 и DEAE-Сефадекс обычно используются в хроматографии.

Ионообменная хроматография

DEAE-C - слабый анионообменник. Этот обмен используется для разделения белков, которые имеют слегка различающиеся заряды. Как и все анионообменники, смола несет положительный заряд, который благоприятно взаимодействует с отрицательными зарядами. Положительный заряд ДЭАЭ-целлюлозы обусловлен протонированной аминогруппой. Чтобы убедиться, что смола протонирована и положительно заряжена, хроматографию следует проводить как минимум на 2 единицы pH ниже pKa аминогруппы, 10. Прочность связи между смолой и белком сильно зависит от pH диапазон в столбце и число Пи интересующего белка. Смола является слабым теплообменником, потому что она лишь частично ионизируется при большинстве значений pH, и эффективное разделение с помощью DEAE-C хроматография требует определенного узкого диапазона pH.[8]

Целлюлоза, декстран, агароза и другие нерастворимые комплексы не подвержены влиянию, потому что они составляют инертные матрицы, поэтому их так часто дериватизируют с помощью сильных и слабых катионитов и анионитов в хроматографии. Гранулы DEAE-C имеют диэтиламиноэтильные цепи, ковалентно связанные с атомами кислорода на D-глюкоза подразделения целлюлоза.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Руссо, Рональд У .; Феррелл, Джеймс К .; Рирдон, Роберт Ф. (1984-06-01). «Синтез диэтиламиноэтилцеллюлозы на хлопчатобумажной ткани». Промышленная и инженерная химия, исследования и разработки продуктов. 23 (2): 250–252. Дои:10.1021 / i300014a015. ISSN  0196-4321.
  2. ^ «Анионообменная целлюлоза Whatman® DE52». Сигма-Олдрич. Получено 11 мая 2016.
  3. ^ Reuveny, S .; Silberstein, L .; Shahar, A .; Freeman, E .; Мизрахи, А. (февраль 1982 г.). «Целлюлозные микроносители DE-52 и DE-53: I. Рост первичных и установленных якорно-зависимых клеток». In vitro. 18 (2): 92–98. JSTOR  20170418.
  4. ^ Петерсон, Эльберт А .; Собер, Герберт А. (1956). «Хроматография белков. I. Ионообменные адсорбенты целлюлозы». Журнал Американского химического общества. 78 (4): 751–755. Дои:10.1021 / ja01585a016. ISSN  0002-7863.
  5. ^ «Руководство по эксплуатации ионообменных гелей DEAE и CM Bio-Gel ® A» (PDF). Био-Рад. Получено 11 мая 2016.
  6. ^ «ДЭАЭ-Декстран» (PDF). GE Life Sciences. Amersham Biosciences. Архивировано из оригинал (PDF) 11 июня 2016 г.. Получено 11 мая 2016.
  7. ^ Гулик, Тод (2003). «Трансфекция с использованием ДЭАЭ-декстрана». Текущие протоколы в клеточной биологии. 19: 20.4.1–20.4.10. Дои:10.1002 / 0471143030.cb2004s19. PMID  18228428.
  8. ^ Нинфа, Александр (2010). Фундаментальные лабораторные подходы в биохимии и биотехнологии. Хобокен, Нью-Джерси: Джон Уайли. ISBN  978-0-470-08766-4.