Анализ локальных лимфатических узлов - Local lymph node assay

В мышиный анализ локальных лимфатических узлов (LLNA) - это in vivo тест на сенсибилизация кожи.

LLNA в значительной степени вытеснила Максимальный тест на морских свинках и Тест Бюлера. Он считается более научным и менее жестоким (меньшее количество животных; меньше страданий) и нашел широкое научное и нормативное признание.

Принцип, лежащий в основе LLNA, заключается в том, что сенсибилизаторы кожи вызывают рост лимфоциты в лимфатический узел слив с сайта приложения. Лимфоцит распространение можно измерить радиоактивная маркировка (количественное определение тритиадных тимидин ), биолюминесценция (количественная оценка АТФ содержание в лимфоцитах) или иммуноанализ (ELISA используя антитело специфический для Брду ).^[1]

Тестовый материал наносят на уши мышей. Необязательно, индикаторное вещество, такое как 3H-метил-тимидин или же Брду вводится внутрибрюшинно для включения лимфоцитов. Животных умерщвляют, удаляют и анализируют их лимфатические узлы. Коэффициент включения индикатора в лимфатические узлы животных, которым вводили дозу, сравнивают с контрольными животными, получая индекс стимуляции (SI). Когда индекс стимуляции превышает 3 (SI> 3), предполагается соответствующий сенсибилизирующий потенциал. В отличие от классических тестов на морских свинках, LLNA обеспечивает количественное измерение сенсибилизирующей активности тестируемого химического вещества.^[2]

LLNA может не подходить для некоторых металлических соединений, поверхностно-активных веществ, высокомолекулярных белков, сильных раздражителей кожи и материалов, которые недостаточно прилипают к уху в течение приемлемого периода времени во время лечения. Абсолютного соответствия сенсибилизирующему потенциалу вещества у мыши, морской свинки и человека нет.

Нормативный

В Руководящие принципы ОЭСР по тестированию химических веществ директива № 429 от 23 июля 2010 г.^[3]

В Регламент REACH В параграфе 8.3 Приложения VII говорится: «Анализ локальных лимфатических узлов мышей (LLNA) является методом первого выбора для in vivo тестирование. Только в исключительных случаях можно использовать другой тест. Должно быть предоставлено обоснование для использования другого теста ".

Согласно европейскому руководству OECD 406 Skin Sensitization, LLNA или MEST (Тест на опухоль уха мыши ) может использоваться в качестве первого этапа оценки потенциала сенсибилизации кожи. Если в любом из анализов наблюдается положительный результат, тестируемое вещество может быть обозначено как потенциальный сенсибилизатор, и может не потребоваться проведение дополнительного теста на морской свинке. Однако, если в LLNA или MEST наблюдается отрицательный результат, необходимо провести тест на морской свинке (предпочтительно GPMT или BT).

Рекомендации