Покрытие реплики - Replica plating

Отрицательный выбор через покрытие реплики на экран для колоний, чувствительных к ампициллину

Покрытие реплики это микробиологический техника, в которой одна или несколько вторичных Чашки Петри содержащие различные твердые вещества (агар -основан) селективная питательная среда (не содержащие питательных веществ или содержащие химические ингибиторы роста, такие как антибиотики ) инокулируют теми же колониями микроорганизмы из первичной чашки (или мастер-чашки), воспроизводя исходный пространственный узор колоний. Техника предполагает нажатие на вельвет -крытый диск, а затем импринтинг вторичных планшетов с клетками в колониях, удаленных с исходной чашки материалом. Как правило, большое количество колоний (примерно 30-300) высевают на чашки-реплики из-за сложности выращивания. полосы каждый отдельно на отдельной тарелке.

Стерильный бархат на пластиковом блоке для покрытия реплики.

Целью нанесения покрытия на реплики является возможность сравнить эталонную пластину и любые вторичные пластины, обычно экран для желаемого фенотип. Например, когда колония, которая присутствовала на первичной чашке (или основной чашке), не появляется на вторичной чашке, это показывает, что колония была чувствительна к веществу на этой конкретной вторичной чашке. Общие подлежащие скринингу фенотипы включают: ауксотрофия и устойчивость к антибиотикам.

Покрытие реплик особенно полезно для "отрицательный выбор ». Однако правильнее использовать термин« отрицательный скрининг »вместо термина« отбор ». Например, если кто-то хочет отобрать колонии, чувствительные к ампициллин, первичная пластина может быть воспроизведена на вторичном усилителе.⁺ пластина с агаром. Чувствительные колонии на вторичной чашке погибнут, но колонии все еще можно будет вывести из первичной чашки, поскольку они имеют одинаковые пространственные структуры для колоний, устойчивых к ампициллину. Затем чувствительные колонии можно было снять с первичного планшета. Часто последняя пластина будет неизбирательной. На фигуре неселективный планшет будет реплицирован после планшета Amp +, чтобы подтвердить, что отсутствие роста на селективном планшете связано с самим отбором, а не с проблемой переноса клеток. Если наблюдается рост на третьей (неселективной) пластине, но не на второй, то селективный агент отвечает за отсутствие роста. Если неселективный планшет не показывает роста, нельзя сказать, были ли вообще перенесены жизнеспособные клетки, и нельзя сделать никаких выводов о наличии или отсутствии роста на селективных средах. Это особенно полезно, если есть вопросы о возрасте или жизнеспособности клеток на исходном планшете.

Увеличивая разнообразие вторичных пластин с разными селективная питательная среда можно быстро провести скрининг большого количества отдельных изолированных колоний на столько фенотипов, сколько имеется вторичных чашек.

Разработка покрытия реплики потребовала двух шагов. Первым шагом было определение проблемы: метод идентифицируемого дублирования колоний. Второй шаг заключался в разработке средств для надежной реализации первого шага. Покрытие реплик впервые было описано Эстер Ледерберг и Джошуа Ледерберг в 1952 г.^[1]

Рекомендации