Интеграция, опосредованная рестрикционным ферментом - Restriction enzyme mediated integration

Интеграция, опосредованная рестрикционным ферментом (сокращенно REMI) - метод интегрирования ДНК (линеаризованный плазмида ) в сайты генома, которые были созданы тем же рестрикционный фермент используется для линеаризации ДНК.[1] Интеграция плазмиды происходит по соответствующим сайтам в геном, часто путем регенерации сайтов узнавания с помощью того же рестрикционного фермента, который используется для линеаризации плазмиды.

Механизм

Специфический рестрикционный фермент расщепляет геномную ДНК в случайных точках и генерирует сайты узнавания.[2] Вставляемый фрагмент ДНК линеаризуют с использованием указанного рестрикционного фермента и смеси, вводимой в клетку, с последующей успешной вставкой фрагмента ДНК.[3]

Приложения

Метод REMI был использован для создания генетически модифицированные организмы в том числе Saccharomyces cerevisiae, Dictyostelium discoideum и Xenopus laevis.[1][4][5]

Геномная инженерия

REMI использовался для крупномасштабных трансгенез в X. laevis эмбрионов с целью изучения различных сигнальных путей, включая FGF и Щитовидная железа система.[3][6]

Рекомендации

  1. ^ а б Schiestl, R. H .; Питес, Т. Д. (1991-09-01). «Интеграция фрагментов ДНК путем незаконной рекомбинации в Saccharomyces cerevisiae». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 88 (17): 7585–7589. Дои:10.1073 / пнас.88.17.7585. ISSN  0027-8424. ЧВК  52346. PMID  1881899.
  2. ^ Kessler, C .; Манта, В. (1990-08-16). «Специфичность рестрикционных эндонуклеаз и модификаций ДНК метилтрансфераз - обзор (издание 3)». Ген. 92 (1–2): 1–248. Дои:10.1016 / 0378-1119 (90) 90486-б. ISSN  0378-1119. PMID  2172084.
  3. ^ а б Kroll, K. L .; Амая, Э. (1996-10-01). «Трансгенные эмбрионы Xenopus от трансплантации ядер сперматозоидов выявляют потребности в передаче сигналов FGF во время гаструляции». Разработка. 122 (10): 3173–3183. ISSN  0950-1991. PMID  8898230.
  4. ^ Куспа, А .; Лумис, В. Ф. (15 сентября 1992 г.). «Маркировка генов развития в Dictyostelium путем интеграции плазмидной ДНК, опосредованной рестрикционными ферментами». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 89 (18): 8803–8807. Дои:10.1073 / пнас.89.18.8803. ISSN  0027-8424. ЧВК  50009. PMID  1326764.
  5. ^ Воробей, Дункан Б.; Латинкич, Бранко; Мохун, Тим Дж. (2000-02-15). «Упрощенный метод создания трансгенных Xenopus». Исследования нуклеиновых кислот. 28 (4): e12. Дои:10.1093 / nar / 28.4.e12. ISSN  0305-1048. ЧВК  102591. PMID  10648800.
  6. ^ Турке, Натали; Палмьер, Карима; Ле Мевель, Себастьян; Аллиот, Кэролайн; Деменеикс, Барбара А. (1 ноября 2005 г.). «Быстрый физиологический протокол для тестирования транскрипционных эффектов агентов, нарушающих работу щитовидной железы, у дометаморфных головастиков Xenopus». Перспективы гигиены окружающей среды. 113 (11): 1588–1593. Дои:10.1289 / ehp.7992. ISSN  0091-6765. ЧВК  1310923. PMID  16263516.