Фрагмент ограничения - Википедия - Restriction fragment

А рестрикционный фрагмент это ДНК фрагмент, полученный в результате разрезания нити ДНК рестрикционный фермент (эндонуклеазы рестрикции), этот процесс называется рестрикцией.[1] Каждый рестрикционный фермент является высокоспецифичным, распознавая конкретную короткую последовательность ДНК или сайт рестрикции и разрезая обе нити ДНК в определенных точках внутри этого сайта. Большинство сайтов с ограничениями палиндромный, (последовательность нуклеотидов одинакова на обеих цепях при чтении в направлении от 5 'до 3' каждой цепи) и составляет от четырех до восьми нуклеотиды длинный. Многие разрезы выполняются одним рестрикционным ферментом из-за случайного повторения этих последовательностей в длинной молекуле ДНК, в результате чего получается набор рестрикционных фрагментов. Конкретная молекула ДНК всегда будет давать один и тот же набор рестрикционных фрагментов при воздействии одного и того же рестрикционного фермента. Фрагменты рестрикции можно анализировать с использованием таких методов, как гель-электрофорез или используется в рекомбинантная ДНК технологии.[2]

Иллюстрация типичного расщепления рестрикционным ферментом.

Приложения

В технологии рекомбинантной ДНК используются специфические эндонуклеазы рестрикции, которые будут выделять конкретный ген и расщеплять сахарно-фосфатные скелеты в различных точках (сохраняя симметрию), так что двухцепочечные рестрикционные фрагменты имеют одноцепочечные концы. Эти короткие расширения, называемые липкие концы, может образовывать водородная связь пары оснований с дополнительными липкими концами на любой другой ДНК, разрезанной тем же ферментом (такой как бактериальная плазмида).

В электрофорез в агарозном геле рестрикционные фрагменты дают картину полос, характерную для исходной молекулы ДНК и используемого рестрикционного фермента, например, относительно небольшие молекулы ДНК вирусов и плазмид могут быть идентифицированы просто по структуре их рестрикционных фрагментов. Если нуклеотидные различия двух разных аллели происходят в пределах сайта рестрикции конкретного рестрикционного фермента, расщепление сегментов ДНК от индивидуумов с разными аллелями этого конкретного гена этим ферментом будет давать разные фрагменты, и каждый из них дает разные картины полос при гель-электрофорезе.

Рекомендации

  1. ^ Робертс, Р. Дж. (2005). «Как рестрикционные ферменты стали рабочими лошадками молекулярной биологии». Труды Национальной академии наук. 102 (17): 5905–5908. Дои:10.1073 / pnas.0500923102. ЧВК  1087929. PMID  15840723.
  2. ^ Кэмпбелл, Нил А.; Джейн Б. Рис (2005). Биология (Седьмое изд.). Бенджамин Камминс. ISBN  0-8053-7171-0.