Активация базофилов - Basophil activation

Аллергические симптомы вызваны начальным системным гистамин выпуск активирован базофилы и тучные клетки, что может привести к шоку от отек гортани, обструкция нижних дыхательных путей и гипотония. Вот почему базофилы вместе с тучными клетками считаются ключевыми клетками при аллергических заболеваниях.

активация и мечение базофилов

Процесс активации

Иммуноглобулин E (IgE ) представляет собой класс антител (или "изотип" иммуноглобулина), который был обнаружен только у млекопитающих. Он играет важную роль при аллергии и особенно связан с типом 1. гиперчувствительность. Есть рецепторы (FcεR) для константной области IgE, Fc регион на несколько типов клеток, включая тучные клетки и базофилы. Базофилы содержат внутри клетки множество гранул, которые заполнены различными активными веществами, вызывающими аллергическую реакцию при дегрануляции. Клетки активируются и начинают дегрануляцию, когда антитело IgE, связывающееся с аллергеном, которое может связываться со специфической вариабельной областью IgE, Fab регион, привязать к Рецептор Fc

В пробирке метод теста на аллергию

В большинстве случаев для выявления аллергии используется положительная кожная проба, но активация базофильных гранулоцитов анти-IgE, экспрессия антигена CD63 на поверхности клетки (плазматической мембране) позволяет идентифицировать аллерген, ответственный за реакцию гиперчувствительности. без выполнения обычных скретч-тест. Для этого эксперимента требуется совсем немного крови, что делает его удобным в использовании, поскольку его можно проводить параллельно с обычным исследованием крови. Его можно использовать при различных аллергиях (например, пчелиный яд, наркотики, контрастные вещества^[1]).

Дегрануляция

Дегранулированные клетки обнажают CD63^[2] молекулы на их внешней клеточной мембране, следовательно, гранулы, которые содержат на своей внутренней поверхности молекулы CD63, слитые с клеточной мембраной. Внутренняя клеточная поверхность гранул становится внешней клеточной поверхностью базофилов / тучных клеток в процессе дегрануляции.

Маркировка и сортировка

В качестве проточной цитометрии является ценным инструментом для анализа большого количества клеток и для идентификации клеточных популяций, даже при низких концентрациях; можно определить процент базофилов, активированных после стимуляции in vitro аллергенами и экспрессирующих маркер CD63. Маркер CD63 - это флуоресцеина изотиоцианат меченый антиген, который может связываться с белком CD63 и используется для сортировки клеток с помощью FACS (сортировка / сортировщик клеток с активацией флуоресценции). Этот меченый FITC антиген излучает свет с длиной волны 530 нм. Поскольку интенсивность испускаемой флуоресценции пропорциональна участкам связывания каждой отдельной клетки, интенсивность будет увеличиваться в соответствии с количеством FITC-конъюгированных антител, связанных с клетками, экспрессирующими CD63.

Процедура

Пробирку готовят с буфером для стимуляции базофилов (BSB), включая Интерлейкин 3 и аллерген который должен быть проверен. Добавляется образец крови, и пробирка инкубируется при 37 ° C в течение нескольких минут, чтобы убедиться, что аллергены могут связываться с IgE. Добавляя EDTA в пробирку процесс дегрануляции немедленно останавливается. После дегрануляции в пробирку добавляют маркер CD63 (меченые антитела). Несколько минут при комнатной температуре дают маркеру время для связывания с белками CD63 на клеточной мембране базофила. На этапе лизирования эритроциты лизируются. Потому что они намного превосходят лейкоциты их необходимо удалить, чтобы провести FACS-анализ базофилов.

Смотрите также

• Врожденная иммунная система
• Аллергия
• В клетка
• Рецептор Fc

Рекомендации

внешняя ссылка

• CMA клиническая молекулярная аллергия