Сортировка ячеек - Cell sorting

Сортировка ячеек это процесс принятия клетки от организма и разделяя их по типу. Ячейки помечены и помечены, чтобы идентифицировать интересующие области и их влияние.[1] Они разделяются на основе различий в размере клеток, морфологии (форме) и экспрессии поверхностных белков.[1] Полученные в результате гомологичные популяции клеток находят важное применение в исследованиях и в качестве терапевтических средств.

Методы

Для сортировки клеток используются три основных метода: сортировка отдельных клеток, сортировка клеток с флуоресцентной активацией и сортировка клеток с магнитной активацией. Наиболее часто используемые методы: FACS (сортировка флуоресцентно активированных клеток ) и MACS (магнитно-активированная сортировка клеток ).[2] Эти методы в основном используются в гематология, цитогенетика и стволовая клетка исследовательские лаборатории. Однако в связи с многолетним совершенствованием и повышенным спросом на сотовый анализ исследователи работают над созданием микрофлюидных сортировочных устройств, которые имеют много преимуществ по сравнению с традиционными устройствами FACS и MACS, но сталкиваются с множеством препятствий для коммерциализации.[3]

Флуоресцентный активированный

Основная статья: Проточной цитометрии
Диаграмма A: Сортировка клеток с помощью флуоресценции на предмет отрицательного отбора.

Флуоресцентно-активированная сортировка клеток, или FACS, использует проточной цитометрии для обеспечения быстрого, объективного и количественного измерения внутри- и внеклеточных свойств, не включая морфологию, для сортировки неоднородный смесь клеток.[4] Это наиболее распространенный в настоящее время метод разделения ячеек, который включает инкапсуляцию ячеек в маленькие жидкие капли, выборочно помеченные электрическими зарядами и сортируемые внешним электрическим полем.[5] Устройства FACS довольно дороги и обычно встречаются только в лабораторных условиях, но обладают способностью сортировать со скоростью около 50000 ячеек в секунду и обладают высокой производительностью, а некоторые достигают чистоты 99,9% или выше, однако они имеют большие размеры и используют высокое давление, при котором может поставить под угрозу жизнеспособность клеток.[3] FACS имеет несколько системы которые работают вместе для успешной сортировки интересующих событий. К ним относятся жидкости, оптика, системы сортировки. Используя флуоресценцию, пользователи могут идентифицировать конкретную совокупность событий в образце, содержащем множество клеток с различными характеристиками. Эта технология широко используется в гематология лаборатории. Однако исследователи могут использовать различные флуоресцентные красители для создания многоцветных панелей, чтобы добиться успешной одновременной сортировки множества точно определенных типов клеток. Диаграмма A показывает FACS отрицательного выбора ячеек (нежелательная группа), а диаграмма B показывает FACS положительного выбора ячейки (желаемая группа).

Диаграмма B: Сортировка клеток с помощью флуоресценции для положительного отбора.

Флуоресцентные красители в сортировке клеток

Флуоресцентные красители могут действовать по-разному. Обычно флуоресцентный краситель возбуждается источником когерентного света (лазером) с определенной длиной волны и излучает свет с меньшей энергией и большей длиной волны. Наиболее распространенные красители действуют путем связывания с антигенами, представленными на клетках. Общие антигены-мишени: кластеры дифференциации (Компакт-диски).[6] Они относятся к определенному типу клеток. Если вы можете определить, какой CD присутствует на интересующих вас клетках, вы можете окрасить образец специфическим для него флуоресцентным красителем и с помощью FACS, отсортировав только эти клетки. Однако есть много других механизмов, с помощью которых могут действовать флуоресцентные красители.

Некоторые красители способны диффундировать через мембраны. Воспользовавшись этим свойством красителя, пользователи могут охарактеризовать внутриклеточную активность, а также поверхностную экспрессию белков. Например, в мертвых клетках иодид пропидия (PI) может проникать в ядро, где связывается с ДНК. Флуоресцентный сигнал PI можно использовать для количественного определения содержания ДНК для анализа клеточного цикла или для идентификации мертвых клеток в образце.

Определенные флуоресцентные красители можно использовать для характеристики кинетической внутриклеточной активности, а не для фиксации клеток в формальдегиде и потери жизнеспособных клеток. В таблице ниже приведены красители, которые можно использовать для измерения нескольких параметров цитотоксичности, вызванной окислительным стрессом.

КрасительПараметрМеханизм действияВозбуждение / Эмиссия
DCFH-DAАктивные формы кислорода

(ROS)

Деацетилированный до

2’7 ’дихлорфлуоресцин, который реагирует с ROS в радикальных условиях с образованием 2’7 дихлорфлуоресцеина (DCF)

488 нм / 525 нм
Rh123Мембранный потенциал митохондрий

(MMP)

Секвестрируется активными митохондриями488 нм / 525 нм
Индо-1 АМУровни кальцияИзлучает на двух разных длинах волн в зависимости от наличия ионов кальция.350 нм / [400 нм / 485 нм]
ЧИСЛО ПИЖивой / МертвыйПроникает только в мертвые клетки и связывается с ДНК488 нм / 675 нм

Эта экспериментальная установка - всего лишь один пример возможностей проточной цитометрии. В системах FACS эти охарактеризованные клетки можно затем отсортировать и очистить для дальнейших экспериментов.

Магнитная активация

Основная статья: Сортировка клеток с магнитной активацией

Сортировка клеток с магнитной активацией (MACS) обеспечивает метод обогащения неоднородный смесь клеток на основе внеклеточных свойств, обычно клеточная поверхность белки (антигены Это метод разделения на основе колонки, когда меченые клетки пропускаются через магнитную колонку.[7] Магнитные бусины, называемые микрошарики, спариваются с группой клеток, затем либо помещаются в магнит, либо подвергаются воздействию магнитного поля после инкубации или встряхивания в буферном растворе.[8][9][10] Клетки, спаренные с микрогранулами, присоединяются к магнитному полю, а непарные клетки удаляются.[9][10] Затем этот процесс можно повторить, чтобы продолжить удаление выбранных ячеек.[8][10]

Система SEP обеспечивает метод разделения клеток без колонки, при котором пробирка с мечеными клетками помещается в магнитное поле.[11] Положительно отобранные клетки остаются в пробирке, а отрицательно отобранные клетки находятся в жидкой суспензии.

Устройства MACS значительно дешевле устройств FACS, поскольку они не требуют фокусировки ячеек в единый поток, а вместо этого могут разделять ячейки в большом количестве. Этот метод страдает от более низкой чистоты клеток-мишеней из-за вовлечения немеченых клеток в целевые популяции и сильно нелинейных магнитных сил, из-за которых клетки, далекие от источника, плохо сортируются.[3] Однако было показано, что MACS полезен при использовании, в частности, с культурами NPC (нейронных клеток-предшественников), поскольку с ним легче справиться и он вызывает минимальное повреждение живых клеток.[10]

С культурами NPC особенно трудно работать, потому что живые клетки мозга чувствительны и склонны заражать друг друга.[10] Чтобы получить более четкие результаты, лабораториям нужны более чистые материалы, а это означает более чистые линии NPC.[10] Исследование, проведенное в 2019 году (при финансовой поддержке New York Stem Cell Foundation и Ассоциации лобно-височной дегенерации), показало, что MACS является дешевым и простым способом добиться такой чистоты с минимальным повреждением клеточных линий, что позволяет поддерживать клетки более высокого качества. сбор более однородных NPC и повышение их шансов найти эффективное лечение неврологических расстройств.[10] Они использовали методы MACS и FACS для фильтрации CD271 - (полезные маркеры для мезенхимальные стволовые клетки ) и CD133 + (маркеры раковых стволовых клеток) для сравнения жизнеспособности каждого метода.[10]

Метод MACS также использовался при репродукции (искусственное оплодотворение) и лечении трансплантата сетчатки.[8][9] В случае содействия репродукции апоптозные сперматозоиды (мертвые или поврежденные клетки) отделяются, поэтому можно собрать больше неапоптотических (нефрагментированных) сперматозоидов и использовать их для увеличения шансов субъекта на фертильность.[8] Этот тип лечения оказался более эффективным, если его проводить неоднократно, увеличивая количество неапоптотических клеток, присутствующих во время осеменения.[8]

В исследовании 2018 года, проведенном во Франции (при поддержке нескольких лиц и агентств, в том числе: Insitut de la Vision в Париже и Retina France Association), использовались крысы и метод MACS, чтобы показать, что фоторецепторы (клетки сетчатки, которые реагируют на свет) можно пересадить, чтобы вылечить слепоту.[9] В этом процессе микрошарики прикреплялись к CD73 фермент, способствующий отделению фоторецепторов (фоторецепторов) от органоидов сетчатки.[9] Когда антиген CD73 + экспрессировался с помощью клеток RCVRN + (кальций-связывающих белков в глазу), исследователи показали, что эту комбинацию CD73 + и RCVRN + можно использовать с предшественниками постмитотического PR для восстановления.[9] Хотя исследование не смогло подтвердить успех у людей, у них есть основа для дальнейших исследований, основанных на успехе сочетания неповрежденных фоторецепторов с антигеном CD73 и трансплантации крысам.[9] Этот успех в разделении клеток и спаривании посредством трансплантации дает надежду на потенциальное излечение от заболеваний сетчатки, включая полную слепоту. Пока что сообщалось только о частичном восстановлении зрения.[9]

Микрожидкостные устройства

Из-за некоторых проблем с устройствами FACS и MACS недавно были исследованы устройства для сортировки микрофлюидных клеток, и в настоящее время проводятся исследования с целью коммерциализации этих устройств для клинического использования и применения в местах оказания медицинской помощи. Микрожидкостные устройства преодолевают некоторые ограничения других методов, обеспечивая сопоставимую чистоту клеток-мишеней около 99% в некоторых случаях и высокую производительность около 48000 клеток в секунду.[12][13] Другие преимущества включают снижение риска нарушения жизнеспособности клеток из-за снижения потребности в потоке оболочки под высоким давлением для фокусировки клеток, возможность многопутевой сортировки с некоторыми устройствами, допускающими 5 разных выходов для разделения, снижение стоимости микрофлюидных каналов из-за дешевых методов производства , более низкое энергопотребление и меньший размер, при этом некоторые устройства имеют размер кредитной карты.[14][15]

Разработка малых микроканалов, сделанных с мягкая литография методы, в которых используются такие материалы, как полидиметилсилоксан (PDMS) и эпоксидные смолы, предлагают уникальный способ сортировки ячеек на основе поведения жидкости в микроканалах устройства. Эти устройства используют поведение жидкости и небольшие силы в пределах этой области порядка микрометров для управления ячейками в растворе. Были предприняты усилия по разработке методов сортировки редких клеток из раствора, которые могут использоваться в местах оказания медицинской помощи, с небольшими объемами образцов и не требуют дорогостоящего оборудования для сортировки клеток. Выделение редких клеток из раствора крови, таких как раковые, опухолевые или стволовые клетки, по-прежнему остается важной технической проблемой из-за других методов, требующих либо дорогостоящего оборудования, ограниченного лабораторными условиями, либо большого объема образца для разработки. гидродинамически сфокусированный поток одиночных ячеек.[16] Было также признано, что этот тип сортировки имеет более щадящий подход к клеткам из-за небольших сил, необходимых для их сортировки в этих доменах, что приводит к лучшей жизнеспособности клеток после сортировки.[17] Различные методы можно разделить на активные и пассивные:

Активный

Активная сортировка клеток включает обнаружение клеток-мишеней с помощью микроскопа или камеры с последующей автоматической или ручной активацией метода срабатывания для изменения потока жидкости в микрофлюидных каналах. В некоторых методах используется флуоресцентная маркировка, аналогичная той, что используется в FACS для идентификации клеток-мишеней. Путь потока изменяется, чтобы направить клетки, представляющие особый интерес, к выпускному отверстию, которое захватывает клетки для дальнейших экспериментов. Существуют различные методы срабатывания, которые, как было показано, изменяют характеристики потока и поддерживают жизнеспособность клеток после сортировки, и к ним относятся: пьезоэлектрическое срабатывание,[18] диэлектрофорез капель,[19] оптическая манипуляция,[20] и поверхностная акустическая волна (SAW) прогиб.[21][22] Эти методы обычно более дорогостоящие из-за наличия специального оборудования или сложных компонентов, которые требуют контроля для сортировки и сбора данных.[3]

Пассивный

Этот метод сортировки клеток использует поведение самой жидкости внутри микроканалов для изменения и разделения клеток в зависимости от размера и морфологии. Жидкость в коллоидном растворе будет подвергаться профилю скорости из-за взаимодействий жидкости со стенками канала, в то время как ячейки в растворе подвергаются различным силам сопротивления и инерции, которые зависят от размера ячейки и сбалансировать соответственно в разных точках профиля скорости.[23] В изогнутых микрофлюидных каналах из-за силы Дина образуются вихри, которые размещают частицы разного размера в разных местах поперечного сечения из-за числа Рейнольдса и радиуса кривизны.[24]

Например, в прямом канале более крупные клетки в коллоидном растворе находятся ближе к центру микроканала, чем клетки меньшего размера из-за большей силы сопротивления со стороны стенки, которая отталкивает клетку от стенки, и силы градиента сдвига от скорости профиль, который уравновешивает эту силу сопротивления стенки, чтобы установить ячейку в равновесие.[25]

В то время как микрофлюидные устройства привлекают большое внимание университетского и исследовательского секторов, отсутствие коммерциализации связано с их отсутствием полной интеграции, например, с необходимостью сложного управления или узкоспециализированными клапанами или трубками и их неспособностью масштабироваться до промышленного процесса из-за ПДМС растворяет газы и со временем теряет целостность. Срок службы этих устройств из-за образования пузырьков или захвата клеток довольно короткий, что влияет на производительность и уровень чистоты всего после нескольких циклов.[3]

Плавучесть активирована

Сортировка клеток с активацией плавучести (BACS), разработанная Akadeum Life Sciences, представляет собой метод разделения, при котором микропузырьки связываются с клетками посредством связывания антител с поверхностью клеток. Затем клетки-мишени удаляются из биологического образца посредством флотации.[26]

Сортировка отдельных ячеек

Сортировка отдельных клеток обеспечивает метод сортировки гетерогенной смеси клеток на основе внутриклеточных и внеклеточных свойств. Одноклеточные методы позволяют нам понять свойства клеток, которые иногда могут быть скрыты или неочевидны для популяций клеток. Есть несколько методов сортировки отдельных ячеек:

В микротекст array обеспечивает быстрый и экономичный метод выделения клеток, анализа клеток с течением времени и создания клональных популяций с уникальной способностью контролировать все внутри- и внеклеточные свойства.[27] Эта система идеально подходит как для прикрепленных, так и для неприлипающих типов клеток.

Одноклеточный метод наблюдения за ответом на внешний стимул, в данном случае клеточный ответ на лиганд, был изучен с использованием микрофлюидного устройства с микроканальными клапанами для захвата отдельной клетки в камеру. Для приведения в действие использовалась система с 23 клапанами, а для визуализации стимула использовался флуоресцентный краситель.[28]

Методы кластеризации отдельных клеток - это серия статистических методов, разработанных специалистами по обработке данных на основе внутриклеточных свойств. Весь процесс включает в себя сбор данных Single Cell RNA-Seq, предварительную обработку данных для кластеризации, кластеризацию и оценку кластеризации. Ученые применяют методы машинного обучения (в основном кластерный анализ) к данным RNA-Seq одной клетки, чтобы разделить клетки на разные категории. Все методы модифицированы для решения проблем с данными RNA-Seq, таких как выпадение генов с низкой экспрессией и неоднозначные клеточные маркеры при наличии технических предубеждений. Самые современные методы - SC3.,[29] CIDR.,[30] Seurat, а для получения более подробной информации, пожалуйста, обратитесь к Wiki-странице: Single Cell RNA-Seq Clustering.

Рекомендации

  1. ^ а б Розенталь, Беньямин; Кожекбаева Жанна; Фернхофф, Натаниэль; Цай, Джонатан М .; Трейлор-Ноулз, Никки (декабрь 2017 г.). «Разделение и выделение коралловых клеток с помощью сортировки клеток с активацией флуоресценции (FACS)». BMC Cell Biology. 18 (1): 30. Дои:10.1186 / s12860-017-0146-8. ISSN  1471-2121. ЧВК  5575905. PMID  28851289.
  2. ^ Боулз, Кэтрин Р .; T. C. W., Джулия; Цянь, Лу; Jadow, Benjamin M .; Гоут, Элисон М. (27 марта 2019 г.). Ху, Вэньхуэй (ред.). «Снижение вариабельности клеток-предшественников нейронов и повышение чистоты культур нейронов с использованием сортировки клеток с магнитной активацией». PLOS ONE. 14 (3): e0213374. Дои:10.1371 / journal.pone.0213374. ISSN  1932-6203. ЧВК  6436701. PMID  30917153.
  3. ^ а б c d е Шилдс CW, Охири К.А., Сотт Л.М., Лопес Г.П. (март 2017 г.). «Перевод микрофлюидики: технологии разделения клеток и препятствия на пути их коммерциализации». Цитометрия Часть B. 92 (2): 115–125. Дои:10.1002 / cyto.b.21388. ЧВК  5149119. PMID  27282966.
  4. ^ Сунь, Цян; Ван, Сяонин; Чен, Чжаоли; Ма, Ли; Ли, Вэнь; Ли, Цихун; Ю, Кайтао; Нин, Сянкай; Чен, Анг (2015-04-27). "Флуоресцентно-активированный анализ клеточной сортировки гетеротипических структур" клетка в клетке ". Научные отчеты. 5: 9588. Bibcode:2015НатСР ... 5Е9588Н. Дои:10.1038 / srep09588. ISSN  2045-2322. ЧВК  5386181. PMID  25913618.
  5. ^ Лири Дж. Ф. (октябрь 2005 г.). «Сверхскоростная сортировка». Цитометрия. Часть А. 67 (2): 76–85. Дои:10.1002 / cyto.a.20160. PMID  16163688. S2CID  13337181.
  6. ^ "CD человека и другие клеточные антигены - США". www.thermofisher.com. Получено 2018-12-11.
  7. ^ «МАКС» (интернет сайт). Miltenyi Biotech. Получено 2013-03-19.
  8. ^ а б c d е Дирикан, Энвер Керем (2012), "Магнитно-активированный клеточный сортировщик сперматозоидов человека", Практическое руководство по экстракорпоральному оплодотворению, Springer New York, стр. 265–272, Дои:10.1007/978-1-4419-1780-5_29, ISBN  9781441917799
  9. ^ а б c d е ж грамм час Гальярди, Джулиана; Бен М'Барек, Карим; Шаффиоль, Антуан; Слембрук-Брек, Амели; Конарт, Жан-Батист; Нанто, Селин; Рабешандратана, Ориана; Сахель, Хосе-Ален; Дуэбел, Йенс; Орие, Гаэль; Райхман, Саша (сентябрь 2018 г.). «Характеристика и трансплантация CD73-положительных фоторецепторов, выделенных из органоидов сетчатки, полученных с помощью ИПСК человека». Отчеты о стволовых клетках. 11 (3): 665–680. Дои:10.1016 / j.stemcr.2018.07.005. ЧВК  6135113. PMID  30100409.
  10. ^ а б c d е ж грамм час Боулз, Кэтрин Р .; T. C. W., Джулия; Цянь, Лу; Jadow, Benjamin M .; Гоут, Элисон М. (27 марта 2019 г.). «Снижение вариабельности клеток-предшественников нейронов и повышение чистоты культур нейронов с использованием сортировки клеток с магнитной активацией». PLOS ONE. 14 (3): e0213374. Дои:10.1371 / journal.pone.0213374. ISSN  1932-6203. ЧВК  6436701. PMID  30917153.
  11. ^ Kokaji AI, Holland S, Fairhurst MA, Thomas TE, Guilbault BG (апрель 2009 г.). «Простой одностадийный метод выделения высокоочищенных плазматических дендритных клеток из периферической крови человека». Журнал иммунологии. 182: 33–78.
  12. ^ Госсетт Д.Р., Уивер В.М., Мах А.Дж., Хур С.К., Цзе Х.Т., Ли В., Амини Х., Ди Карло Д. (август 2010 г.). «Безмаркировочное разделение и сортировка клеток в микрофлюидных системах». Аналитическая и биоаналитическая химия. 397 (8): 3249–67. Дои:10.1007 / s00216-010-3721-9. ЧВК  2911537. PMID  20419490.
  13. ^ Хулспас Р., Вилла-Комарофф Л., Коксал Е., Этьен К., Роджерс П., Таттл М., Корсгрен О., Шарп Дж. К., Берглунд Д. (октябрь 2014 г.). «Очистка регуляторных Т-клеток с использованием полностью закрытой высокоскоростной микрофлюидной системы». Цитотерапия. 16 (10): 1384–9. Дои:10.1016 / j.jcyt.2014.05.016. PMID  25065635.
  14. ^ Шилдс CW, Reyes CD, López GP (март 2015 г.). «Микрожидкостная сортировка клеток: обзор достижений в разделении клеток от разуплотнения до выделения редких клеток». Лаборатория на чипе. 15 (5): 1230–49. Дои:10.1039 / C4LC01246A. ЧВК  4331226. PMID  25598308.
  15. ^ Дин Х, Линь С.К., Лэпсли М.И., Ли С., Го Х, Чан Си, Чан И.К., Ван Л., Маккой Дж. П., Хуанг Т. Дж. (Ноябрь 2012 г.). «Многоканальная сортировка клеток на основе стоячей поверхностной акустической волны (SSAW)». Лаборатория на чипе. 12 (21): 4228–31. Дои:10.1039 / C2LC40751E. ЧВК  3956451. PMID  22992833.
  16. ^ Чжоу Дж., Каспер С., Папаутский И. (ноябрь 2013 г.). «Улучшенный улавливание частиц в зависимости от размера с помощью микровихрей». Микрофлюидика и нанофлюидика. 15 (5): 611–623. Дои:10.1007 / s10404-013-1176-у. ЧВК  3810988. PMID  24187531.
  17. ^ Дин Х, Линь С.К., Лэпсли М.И., Ли С., Го Х, Чан Си, Чан И.К., Ван Л., Маккой Дж. П., Хуанг Т. Дж. (Ноябрь 2012 г.). «Многоканальная сортировка клеток на основе стоячей поверхностной акустической волны (SSAW)». Лаборатория на чипе. 12 (21): 4228–31. Дои:10.1039 / c2lc40751e. ЧВК  3956451. PMID  22992833.
  18. ^ Чо Ш., Чен Ч., Цай Ф. С., Годин Дж. М., Ло Ю. Х. (июнь 2010 г.). «Сортировка клеток млекопитающих человека с использованием высокоинтегрированного микросборщика клеток, активируемых флуоресценцией (microFACS)». Лаборатория на чипе. 10 (12): 1567–73. Дои:10.1039 / c000136h. ЧВК  3118392. PMID  20379604.
  19. ^ Agresti JJ, Antipov E, Abate AR, Ahn K, Rowat AC, Baret JC, Marquez M, Klibanov AM, Griffiths AD, Weitz DA (март 2010 г.). «Сверхвысокопроизводительный скрининг капельной микрофлюидики для направленной эволюции». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 107 (9): 4004–9. Bibcode:2010PNAS..107.4004A. Дои:10.1073 / pnas.0910781107. ЧВК  2840095. PMID  20142500.
  20. ^ Чен Й, Чунг А.Дж., Ву Т.Х., Тейтелл М.А., Ди Карло Д., Чиу П.Й. (май 2014 г.). «Импульсная лазерная активация сортировки клеток с трехмерной инерционной фокусировкой без оболочки». Маленький. 10 (9): 1746–51. Дои:10.1002 / smll.201302885. ЧВК  4324602. PMID  24536017.
  21. ^ Шмид Л., Вайц Д.А., Франке Т. (октябрь 2014 г.). «Сортировка капель и клеток с акустикой: акустический микрофлюидный флюоресцентный сортировщик клеток». Лаборатория на чипе. 14 (19): 3710–8. Дои:10.1039 / c4lc00588k. PMID  25031157. S2CID  9893236.
  22. ^ Рен Л, Чен И, Ли П, Мао З, Хуанг П.Х., Руфо Дж., Го Ф, Ван Л., Маккой Дж. П., Левин С.Дж., Хуанг Т.Дж. (октябрь 2015 г.). «Высокопроизводительный акустический сортировщик ячеек». Лаборатория на чипе. 15 (19): 3870–3879. Дои:10.1039 / c5lc00706b. ЧВК  4641751. PMID  26289231.
  23. ^ Мартель Дж. М., Тонер М (июль 2014 г.). «Инерционная фокусировка в микрофлюидике». Ежегодный обзор биомедицинской инженерии. 16 (1): 371–96. Дои:10.1146 / annurev-bioeng-121813-120704. ЧВК  4467210. PMID  24905880.
  24. ^ Martel JM, Тонер M (26 ноября 2013 г.). «Фокусировка частиц в изогнутых микрофлюидных каналах». Научные отчеты. 3: 3340. Bibcode:2013НатСР ... 3Э3340М. Дои:10.1038 / srep03340.
  25. ^ Geislinger TM, Franke T (июнь 2014 г.). «Гидродинамический подъем везикул и эритроцитов в потоке - от Fåhræus & Lindqvist до сортировки микрофлюидных клеток». Достижения в области коллоидов и интерфейсной науки. 208: 161–76. Дои:10.1016 / j.cis.2014.03.002. PMID  24674656.
  26. ^ «Терминология, использование, методы и технологии разделения клеток». Академ Наук о жизни. Получено 2017-09-11.
  27. ^ «Система Isoraft» (интернет сайт). Клеточные микросистемы. Получено 2013-03-19.
  28. ^ Тан SJ, Ки MZ, Mathuru AS, Burkholder WF, Jesuthasan SJ (2013-11-08). «Микрожидкостное устройство для сортировки клеток на основе динамического ответа на стимул». PLOS ONE. 8 (11): e78261. Bibcode:2013PLoSO ... 878261T. Дои:10.1371 / journal.pone.0078261. ЧВК  3826715. PMID  24250795.
  29. ^ Киселев В., Киршнер К., Шауб М. и др. (2017). «SC3: согласованная кластеризация одноклеточных данных РНК-seq». Методы природы. 483 (486): 483–486. Дои:10.1038 / nmeth.4236. ЧВК  5410170. PMID  28346451.
  30. ^ Лин П., Группа М, Хо Дж. В. (2017). «CIDR: сверхбыстрая и точная кластеризация посредством вменения для одноклеточных данных РНК-seq». Геном Биол. 18 (59): 59. Дои:10.1186 / s13059-017-1188-0. ЧВК  5371246. PMID  28351406.

внешняя ссылка

Библиотечные ресурсы о
Сортировка ячеек