Диализ (биохимия) - Википедия - Dialysis (biochemistry)

Эта статья об использовании диализа в лабораторных, исследовательских, производственных или образовательных учреждениях. Для получения информации об использовании диализа для лечения почечной или печеночной недостаточности см. диализ или же диализ печени. Для получения информации об использовании диализа или обратного осмоса при очистке воды см. обратный осмос.
Низкомолекулярный диализ с использованием диализных трубок

В биохимия, диализ это процесс разделения молекулы в решение разницей в их скорости распространение через полупроницаемую мембрану, такую ​​как диализная трубка.[1]

Диализ - это распространенный лабораторный метод, работающий по тому же принципу, что и медицинский диализ. В контексте биологических исследований наиболее распространенным применением диализа является удаление нежелательных небольших молекул, таких как соли, восстановители или красители, из более крупных макромолекул, таких как белки, ДНК, или же полисахариды.[2] Диализ также обычно используется для исследований обмена буфера и связывания лекарств.

Концепция диализа была представлена ​​в 1861 году шотландским химиком Томасом Грэмом. Он использовал эту технику для разделения растворенных веществ сахарозы (малая молекула) и гуммиарабика (большая молекула) в водном растворе. Он назвал диффундирующие растворенные вещества кристаллоидами и те, которые не проходят через мембрану коллоидами.[3]

Исходя из этой концепции, диализ можно определить как процесс самопроизвольного отделения взвешенных коллоидных частиц от растворенных ионов или молекул малых размеров через полупроницаемую мембрану. Чаще всего диализные мембраны изготавливаются из целлюлозы, модифицированной целлюлозы или синтетического полимера (ацетата целлюлозы или нитроцеллюлозы).[4]

Принципы диализа

Распространение - случайное тепловое движение молекул в растворе (Броуновское движение ), что приводит к чистому перемещению молекул из области более высокого концентрация до более низкой концентрации, пока не будет достигнуто равновесие. При диализе образец и буферный раствор (называемый диализатом) разделены полупроницаемой мембраной, которая вызывает различные модели диффузии, тем самым позволяя разделение молекул как в образце, так и в диализате.

Из-за размера пор мембраны большие молекулы в образце не могут проходить через мембрану, тем самым ограничивая их диффузию из камеры для образца. Напротив, небольшие молекулы будут свободно диффундировать через мембрану и достичь равновесия по всему объему раствора, тем самым изменяя общую концентрацию этих молекул в образце и диализате (см. Диализный рисунок справа). После достижения равновесия конечная концентрация молекул зависит от объемов используемых растворов, и если уравновешенный диализат заменяется (или заменяется) свежим диализатом (см. Процедуру ниже), диффузия еще больше снизит концентрацию малых молекул. в образце.

Диализ можно использовать для введения или удаления небольших молекул из образца, поскольку небольшие молекулы свободно перемещаются через мембрану в обоих направлениях. Это делает диализ полезным методом для множества применений. Видеть диализная трубка для получения дополнительной информации об истории, свойствах и производстве полупроницаемые мембраны используется для диализа.

Диализ - это процесс, используемый для изменения матрицы молекул в образце путем дифференциации молекул по размеру. Например, диализ происходит, когда образец, содержащийся в целлюлозном мешке, погружается в раствор диализата. Во время диализа достигается равновесие между образцом и диализатом, поскольку только небольшие молекулы могут проходить через целлюлозную мембрану, оставляя после себя только более крупные частицы. Для удаления солей можно использовать диализ.

Осмос - еще один принцип, по которому диализ работает. Во время осмоса жидкость перемещается из областей с высокой концентрацией воды в области с более низкой концентрацией воды через полупроницаемую мембрану до достижения равновесия. При диализе избыточная жидкость перемещается от образца к диализату через мембрану до тех пор, пока уровень жидкости не станет одинаковым между образцом и диализатом.[5][6]

Наконец, ультрафильтрация, которая представляет собой конвективный поток воды и растворенных веществ вниз по градиенту давления, вызванному гидростатическими или осмотическими силами. При диализе ультрафильтрация удаляет из пробы молекулы отходов и лишние жидкости.[5][6]

Диализ - это процесс, используемый для изменения матрицы молекул в образце путем дифференциации молекул по размеру.

Типы

Диффузионный диализ

Диффузионный диализ - это процесс самопроизвольного разделения, в котором движущей силой, вызывающей разделение, является градиент концентрации. Он имеет увеличение энтропии и уменьшение свободной энергии Гиббса, что означает, что он термодинамически выгоден. В диффузионном диализе используются анионообменные мембраны (AEM) или катионообменные мембраны (CEM) в зависимости от соединений, которые необходимо разделить. AEM позволяет прохождение анионов, в то время как препятствует прохождению катионов из-за отторжения коионов и сохранения электронейтральности. С катионообменными мембранами происходит обратное.[7]

Электродиализ

Электродиализ - это процесс разделения, в котором в качестве движущей силы используются ионообменные мембраны и электрический потенциал. В основном он используется для удаления ионов из водных растворов. Обычно используются три процесса электродиализа - диализ Доннана, обратный электродиализ и электродиализ. Эти процессы будут объяснены ниже.[8]

Доннан Диализ

Доннановский диализ - это процесс разделения, который используется для обмена ионами между двумя водными растворами, которые разделены мембраной CEM или AEM. В случае наличия катионообменной мембраны и двух растворов с разной кислотностью протоны (H+) проходят через мембрану в менее кислую сторону. Он индуцирует электрическую мощность, которая вызывает поток катионов, присутствующих на менее кислотной стороне, в более кислую сторону. Процесс завершится, когда изменение концентрации H+ по порядку величины совпадает с разностью концентраций выделенного катиона.[9]

Обратный электродиализ

Обратный электродиализ - это технология, основанная на мембране, которая получает электричество от смешивания двух водных потоков с разной соленостью. Обычно используются анионообменные мембраны (AEM) и катионообменные мембраны (CEM). AEM используются для обеспечения прохождения анионов и препятствования прохождению катионов, а CEM используются для обратного. Катионы и анионы в воде с высокой соленостью перемещаются в воду с низкой соленостью, катионы проходят через CEM, а анионы через AEM. Это явление можно преобразовать в электричество.[10]

Электро-электродиализ

Электро-электродиализ - это электромембранный процесс с использованием трех отсеков, который сочетает электродиализ и электролиз. Он обычно используется для извлечения кислоты из раствора с использованием AEM, CEM и электролиза. Три отсека разделены двумя барьерами - ионообменными мембранами. В отсеке посередине находится вода, которую нужно обработать. Расположенные по бокам отсеки содержат чистую воду. Анионы проходят через AEM, а катионы проходят через CEM. Электричество позволяет создавать H+ на стороне анионов реагировать с ними и ОН− в части катионов, чтобы также реагировать с ними.[8]

Процедура диализа

Оборудование

Разделение молекул в растворе диализом - относительно простой процесс. Помимо буфера для образца и диализата, все, что обычно требуется, это:

  • Диализная мембрана подходящего формата (например, трубка, кассета и т. Д.) И отсечка по молекулярной массе (MWCO)
  • Контейнер для диализата буфер
  • Возможность перемешивать растворы и контролировать температуру

Общий протокол

Типичная процедура диализа образцов белка выглядит следующим образом:

  1. Подготовьте мембрану согласно инструкции.
  2. Загрузите образец в диализную трубку, кассету или устройство
  3. Поместите образец во внешнюю камеру диализного буфера (осторожно перемешивая буфер).
  4. Диализ в течение 2 часов (при комнатной температуре или 4 ° C)
  5. Замените диализный буфер и проведите диализ еще 2 часа.
  6. Замените диализный буфер и проведите диализ в течение 2 часов или на ночь.

Общий объем образца и диализата определяют конечную равновесную концентрацию малых молекул по обе стороны мембраны. Используя соответствующий объем диализата и многократные замены буфера, можно снизить концентрацию мелких загрязняющих веществ в образце до приемлемого или незначительного уровня. Например, при диализе 1 мл образца против 200 мл диализата концентрация нежелательных диализируемых веществ будет уменьшена в 200 раз при достижении равновесия. После двух дополнительных замен буфера по 200 мл каждая уровень загрязнения в образце снизится в 8 x 10 раз.6 (200 х 200 х 200).

Оптимизация переменных и протокола

Хотя диализ образца относительно прост, универсальная процедура диализа для всех приложений не может быть предоставлена ​​из-за следующих переменных:

  • Объем образца
  • Размер разделяемых молекул
  • Используемая мембрана
  • Геометрия мембраны, влияющая на расстояние диффузии

Кроме того, конечная точка диализа в некоторой степени субъективна и зависит от приложения. Следовательно, общая процедура может потребовать оптимизации.

Мембраны для диализа и MWCO

Мембраны для диализа производятся и характеризуются согласно отсечка по молекулярной массе (MWCO) лимиты. В то время как мембраны с MWCO в диапазоне от 1 до 1000000 кДа коммерчески доступны, наиболее часто используются мембраны с MWCO около 10 кДа. MWCO мембраны является результатом количества и среднего размера пор, созданных во время изготовления диализной мембраны. MWCO обычно относится к наименьшей средней молекулярной массе стандартной молекулы, которая не будет эффективно диффундировать через мембрану во время расширенного диализа. Таким образом, диализная мембрана с молекулярной массой 10 кДа обычно удерживает более 90% белка с молекулярной массой не менее 10 кДа.[11][12]

Важно отметить, что MWCO мембраны не является четко определенной величиной. Молекулы с массой, близкой к пределу MWCO мембраны, будут диффундировать через мембрану медленнее, чем молекулы, значительно меньшие, чем MWCO. Чтобы молекула могла быстро диффундировать через мембрану, она, как правило, должна быть по крайней мере в 20-50 раз меньше, чем рейтинг MWCO мембраны. Следовательно, нецелесообразно отделять белок 30 кДа от белка 10 кДа с помощью диализа через диализную мембрану, рассчитанную на 20 кДа.

Диализные мембраны для лабораторного использования обычно изготавливаются из пленки регенерированной целлюлозы или сложных эфиров целлюлозы. См. Ссылку для обзора целлюлозных мембран и производства.[13]

Форматы лабораторного диализа

Диализ обычно проводят в закрытых пакетах диализных трубок или в различных форматированных диализаторах. Выбор используемой схемы диализа во многом зависит от размера образца и предпочтений пользователя.Трубка диализа это самый старый и, как правило, наименее дорогой формат, используемый для диализа в лаборатории. Трубку разрезают и закрывают зажимом на одном конце, затем заполняют и запечатывают зажимом на другом конце. Трубки обеспечивают гибкость, но вызывают повышенное беспокойство относительно обращения, герметизации и извлечения проб. Трубки для диализа обычно поставляются влажными или сухими в рулонах или складчатых телескопических трубках.

Широкий выбор диализных устройств (или диализаторов) доступен от нескольких поставщиков. Диализаторы предназначены для определенных диапазонов объемов пробы и обеспечивают большую безопасность пробы, а также повышенную простоту использования и производительности при проведении диализных экспериментов по трубкам. Наиболее распространенными предварительно отформатированными диализаторами являются линейки продуктов Slide-A-Lyzer, Float-A-Lyzer и Pur-A-lyzer / D-Tube / GeBAflex Dialyzers.

Поставщики

Приложения

Диализ имеет широкий спектр применения. Их можно разделить на две категории в зависимости от типа используемого диализа.

Диффузионный диализ

Некоторые применения диффузионного диализа объясняются ниже.

  • Сильные водные растворы каустической соды можно очистить от гемицеллюлозы. путем диффузионного диализа. Это характерно для в значительной степени устаревших вискозный процесс. Первым шагом в этом процессе является обработка почти чистой целлюлозы (хлопковый линт или же растворяющаяся пульпа ) крепкими (17-20% мас.) растворами едкий натр (каустическая сода) в воде. Одним из результатов этого шага является растворение гемицеллюлозы (низкий-МВт полимеры). В некоторых случаях желательно удалить как можно больше гемицеллюлозы из процесса, и это можно сделать с помощью диализа.[14][15][16]
  • Кислоты могут быть восстановлены из водных растворов с использованием анионообменных мембран. Этот процесс представляет собой альтернативную очистку промышленных сточных вод. Он используется для восстановления смешанной кислоты (HF + HNO3), извлечение и концентрация Zn2+ и Cu2+, в H2ТАК4+ CuSO4 и H2ТАК4+ ZnSO4 и восстановление H2ТАК4 из отработанных растворов серной кислоты, содержащих ионы Fe и Ni, которые образуются в процессе производства алмазов.[3]
  • Щелочные отходы могут быть восстановлены с помощью диффузионного диализа из-за его низкой стоимости энергии. Основание NaOH может быть извлечено из раствора для травления алюминия с применением технологии, разработанной Astom Corporation of Japan.[7]
  • Деалкоголизация пива еще одно применение диффузионного диализа. Принимая во внимание, что для этого метода применяется градиент концентрации, спирт и другие низкомолекулярные соединения переносятся через мембрану от более высоких концентраций к более низким, то есть к воде. Он используется для этого применения в тяжелых условиях эксплуатации и с возможностью удаления спирта до 0,5%.[17]

Электродиализ

Некоторые применения электродиализа объясняются ниже.

  • Опреснение сыворотки это самая большая область применения этого типа диализа в пищевой промышленности. Для производства различных продуктов, таких как пирожные, хлеб, мороженое и детское питание, необходимо удалить сырую сыворотку, содержащую кальций, фосфор и другие неорганические соли. Предел деминерализации сыворотки составляет почти 90%.[18]
  • Раскисление фруктового сока такие как виноград, апельсин, яблоко и лимон - это процессы, в которых применяется электродиализ. В этом методе используется анионообменная мембрана, подразумевающая, что ионы цитрата из сока экстрагируются и заменяются ионами гидроксида.[18]
  • Обессоливание соевого соуса. Обычные значения соли в сваренном соевом соусе составляют около 16-18%, что является довольно высоким содержанием. Электродиализ используется для уменьшения количества соли в соевом соусе. В настоящее время в обществе широко распространены диеты с низким содержанием соли.[18]
  • Разделение аминокислот на кислотные, основные и нейтральные группы. В частности, цитоплазматические белки листьев экстрагируются из листьев люцерны с помощью электродиализа. Когда белки денатурируют, растворы могут быть обессолены (K+ ионов) и подкисляют H+ ионы.[18]

Преимущества и недостатки

У диализа есть не только преимущества, но и недостатки. Следуя структуре предыдущего раздела, обсуждаются плюсы и минусы в зависимости от типа используемого диализа. Преимущества и недостатки как диффузионного диализа, так и электродиализа описаны ниже.

Диффузионный диализ

Основным преимуществом диффузионного диализа является низкое энергопотребление аппарата. Эта мембранная технология работает при нормальном давлении и не имеет изменения состояния, следовательно, требуемая энергия значительно снижается. В то же время это снижает и эксплуатационные расходы. Кроме того, необходимо отметить низкую стоимость установки, простоту эксплуатации, а также стабильность и надежность процесса. Еще один ключевой аспект, поскольку изменение климата в наши дни становится все более и более важным, заключается в том, что диффузионный диализ не загрязняет окружающую среду.[7]

В отличие от этого диффузионный диализатор имеет низкую производительность. Кроме того, еще один момент, который следует учитывать, - это низкая эффективность обработки. Существуют и другие методы, такие как электродиализ и обратный осмос, которые позволяют достичь большей эффективности, чем диффузионный диализ.[7]

Электродиализ

Основное преимущество электродиализа - высокая степень извлечения, особенно при извлечении воды. Другим преимуществом является то, что применяется не высокое давление, что означает, что эффект загрязнения не является значительным, и, следовательно, для борьбы с ними не требуются химические вещества. Кроме того, слой загрязнения не является компактным, что приводит к более высокому извлечению и увеличению срока службы мембраны. Также важно, чтобы обработка проводилась для концентраций выше 70 000 ppm, что устраняет предел концентрации. Наконец, энергия, необходимая для работы, мала из-за отсутствия фазового перехода. Фактически, он ниже по сравнению с необходимостью в процессах многоэтапной дистилляции (MED) и механического сжатия пара (MVC).[19]

Основным недостатком электродиализа является ограничение плотности тока, процесс должен проводиться при более низкой плотности тока, чем максимально допустимая. Дело в том, что при приложении определенного напряжения диффузия ионов через мембрану не является линейной, что приводит к диссоциации воды, что снижает эффективность работы. Другой аспект, который следует принять во внимание, заключается в том, что, хотя для работы требуется низкая энергия, чем выше концентрация соли в исходном сырье, тем выше будет необходимая энергия. Наконец, в случае некоторых продуктов необходимо учитывать, что электродиализ не удаляет микроорганизмы и органические загрязнители, поэтому необходима дополнительная обработка.[19]

Рекомендации

  1. ^ Рид, Р. (2007). Практические навыки в биомолекулярных науках, 3-е изд.. Эссекс: Pearson Education Limited. п. 379. ISBN  978-0-13-239115-3.
  2. ^ Берг, JM (2007). Биохимия, 6-е изд.. Нью-Йорк: W.H. Фримен и компания. п.69. ISBN  978-0-7167-8724-2.
  3. ^ а б Станчева, К. (2008). «Применение диализа». Сообщения об окислении 31. 4: 758–775.
  4. ^ Нинфа, А.Дж., Баллоу, Д.П. и Бенор, М. (2009). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии. п. 45. ISBN  978-0-470-08766-4.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
  5. ^ а б «Что такое диализ и как работает диализ?».
  6. ^ а б "Что такое диализ?".
  7. ^ а б c d Луо, Дж., Ву, К., Сюй, Т. и Ву, Ю. (2011). «Диффузионный диализ - концепция, принцип и применение». Журнал мембрановедения. 366 (1–2): 1–16. Дои:10.1016 / j.memsci.2010.10.028.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
  8. ^ а б Луис, П. (2018). Фундаментальное моделирование мембранных систем: мембранные и технологические характеристики. Эльзевир. С. 275–292. ISBN  978-0-12-813483-2.
  9. ^ Скотт, К. (1995). Справочник промышленных мембран. Кидлингтон: передовые технологии Elsevier. стр.704 -706.
  10. ^ Мэй, Ю. и Тан, С.Ю. (2018). «Последние разработки и перспективы технологии обратного электродиализа: обзор». Опреснение. 425: 156–174. Дои:10.1016 / j.desal.2017.10.021.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
  11. ^ «Разделительные характеристики диализных мембран». Получено 13 ноября 2013.
  12. ^ «Основы мембранного диализа». Получено 13 ноября 2013.
  13. ^ Клемм, Дитер; Бриджит Хойблен; Ханс-Петер Финк; Андреас Бон (2005). «Целлюлоза: очаровательный биополимер и экологически чистое сырье». Angewandte Chemie International Edition. 44 (22): 3358–3393. Дои:10.1002 / anie.200460587. PMID  15861454.
  14. ^ Ловетт, Луи Э. (1938). «Применение осмоса для извлечения растворов каустической соды, содержащих гемицеллюлозу, в вискозной промышленности». Пер. Электрохим. Soc. 73 (1): 163–172. Дои:10.1149/1.3493960.
  15. ^ Marshall, R.D .; Сторроу, Дж. Андерсон (1 декабря 1951 г.). «Диализ растворов каустической соды». Ind. Eng. Chem. 43 (12): 2934–2942. Дои:10.1021 / ie50504a074.CS1 maint: дата и год (связь)
  16. ^ Ли, Эрик К .; Корос, В. Дж. (2003). «Мембраны синтетические, применение: промышленный диализ». ScienceDirect. Из Энциклопедия физических наук и технологий (3-е издание). Получено 29 сентября 2020.
  17. ^ Jackowski, M. и Trusek, A. (2018). «Производство безалкогольного пива - обзор». Польский журнал химической технологии. 20 (4): 32–38. Дои:10.2478 / pjct-2018-0051. S2CID  104447271.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
  18. ^ а б c d Скотт К. и Хьюз Р. (1996). Промышленная технология мембранного разделения. Springer-Science + Business Media, B.V., стр. 222–225. ISBN  978-94-010-4274-1.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
  19. ^ а б Харисиадис, К. «Электродиализ / обращение ЭД» (PDF).

Смотрите также