Двойная иммунодиффузия Оухтерлони - Ouchterlony double immunodiffusion

Изображение двойной иммунодиффузионной пластины Оухтерлони после иммунодиффузии. При этом количественно оценивается значение титра антигена. В центральной лунке содержится антитело, а в окружающих лунках снижается концентрация соответствующего антигена.
Узоры Оухтерлони, не показывающие идентичности между верхними точками
Узоры Охтерлони, демонстрирующие полную идентичность между верхними точками
Узоры Оухтерлони, демонстрирующие частичную идентичность между верхними точками

Двойная иммунодиффузия Оухтерлони (также известен как пассивный дабл иммунодиффузия) является иммунологический метод используется при обнаружении, идентификации и количественная оценка из антитела и антигены, Такие как иммуноглобулины и извлекаемые ядерные антигены. Техника названа в честь Örjan Ouchterlony, то Шведский врач, который изобрел тест в 1948 году.

Процедура

Пластину с гелем разрезают, чтобы сформировать серию отверстий («лунок») в агар или же агароза гель. Интересующий образец экстракта (например, человеческие клетки, собранные из ткани миндалин) помещают в одну лунку, а сыворотки или очищенные антитела помещают в другую лунку, и планшет оставляют на 48 часов для развития. В течение этого времени антигены в экстракте образца и антитела диффундируют из своих соответствующих лунок. Там, где встречаются два фронта диффузии, если какое-либо из антител распознает какой-либо из антигенов, они свяжутся с антигенами и образуют иммунный комплекс. Иммунный комплекс осаждает в геле, чтобы получить тонкую белую линию (линия преципитации), которая является визуальным признаком распознавания антигена.[нужна цитата ]

Метод можно проводить параллельно с несколькими лунками, заполненными различными смесями антигенов, и несколькими лунками с разными антителами или смесями антител, и реактивность антиген-антитело можно увидеть, наблюдая, между какими лунками наблюдается осадок. Когда используется более одной лунки, существует множество возможных результатов, основанных на реактивности выбранного антигена и антитела. Зона эквивалентных линий может давать полную идентичность (т. Е. Непрерывную линию), частичную идентичность (т. Е. Непрерывную линию с выступом на одном конце) или неидентичность (т. Е. Две линии полностью пересекаются).[нужна цитата ]

Теория

Осаждение происходит с большинством антигенов, потому что антиген поливалентен (то есть имеет несколько антигенных детерминант на молекулу, с которыми могут связываться антитела). Антитела имеют как минимум два антигенсвязывающих сайта (а в случае Иммуноглобулин М Существует мультимерный комплекс с максимум 10 сайтами связывания антигена), таким образом, образуются большие агрегаты или гелеобразные решетки антигена и антитела. Экспериментально увеличивающееся количество антигена добавляется к постоянному количеству антитела в растворе. Первоначально при низкой концентрации антигена все антитело содержится в осадке. Это называется зоной избытка антител (т.е. явление прозоны ). По мере добавления антигена количество осажденного белка увеличивается до тех пор, пока молекулы антиген / антитело не достигнут оптимального соотношения. Это известно как зона эквивалентности или точка эквивалентности. Когда количество антигена в растворе превышает количество антитела, количество преципитации уменьшается. Это известно как зона избытка антигена.

Рекомендации

внешняя ссылка