Технология QMCF - QMCF Technology

Эта статья включает Список ссылок, связанное чтение или внешняя ссылка, но его источники остаются неясными, потому что в нем отсутствует встроенные цитаты. Пожалуйста, помогите улучшать эта статья введение более точные цитаты. (Февраль 2018 г.) (Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения)

Технология QMCF это эпизодический производство белка система, которая использует генетически модифицированный клетки млекопитающих и специально разработанные плазмиды. Плазмиды QMCF несут комбинацию регуляторные последовательности от мыши полиомавирус (Py) Репликация ДНК происхождение, которое в сочетании с Эпштейн-Барр вирус (EBV) EBNA-1 сайт связывания белка в качестве ядерных удерживающих элементов обеспечивает стабильное размножение плазмид в клетках млекопитающих. Кроме того, векторы несут маркер выбора оперативный для выбора носителя плазмиды бактерии и клетки QMCF, бактериальные ColE1 происхождение репликации и кассета за выражение интересующего белка. QMCF Сотовые линии выражать Большой Т-антиген и белки EBNA-1, которые связывают вирусные последовательности на плазмиде QMCF и, следовательно, поддерживают репликацию и поддержание плазмиды в клетках. Технология QMCF имеет несколько важных отличий по сравнению с широко известными системами экспрессии временной экспрессии и стабильной клеточной линии. В отличие от системы временной экспрессии, технология QMCF позволяет поддерживать эписомально реплицирующиеся плазмиды QMCF внутри клеток до 50 дней, что дает возможность для фазы продуцирования в течение 2–3 недель. Поэтому уровень производства технологии QMCF выше (до 1 г / л). Еще одно отличие - возможность установления выражения банки клеток в течение одной недели, что невозможно при переходной системе. По сравнению с использованием стабильной клеточной линии, технология QMCF представляет собой быстрый метод, исключающий трудоемкий этап отбора клонов во время разработки клеточной линии.

Заявление

Технология QMCF может использоваться для:

• производство белков, антитела и вирусоподобные частицы для фундаментальных исследований и фармацевтических разработок
  • Процесс производства белка начинается с клонирования кДНК молекулы-мишени в QMCF вектор выражения. После этого 1-6 мкг плазмидной ДНК трансфицируют электропорация в клетки QMCF (CHO или же HEK293 на основе клеток) для экспрессии в бессывороточной суспензии. Поскольку плазмиды QMCF содержат устойчивость к антибиотикам ген и способны стабильно копировать и остаются внутри делящихся клеток, отбор и рост культура клеток происходит. Это позволяет увеличить производство до желаемого объема. Наконец, процесс переводится в фазу производства путем изменения температуры среды до 30 ̊C.
• строительство транслокация белков анализы для исследования и разработки в целях проверки
  • Прилипшие клеточные линии QMCF основаны на клетках U2OS.

Рекомендации

• Силла, Т .; Haal, I .; Geimanen, J .; Яниксон, К .; Abroi, A .; Устав, Э .; Устав, М. (2005). «Эпизомальное поддержание плазмид с гибридным происхождением в клетках мыши». Журнал вирусологии. 79 (24): 15277–15288. Дои:10.1128 / JVI.79.24.15277-15288.2005. ЧВК  1316011. PMID  16306599.
• Европейский патент № EP1851319^{[постоянная мертвая ссылка ]}; Заявка на патент США №11 / 351,809; заявленные патенты в Австралии, Канаде и Японии

внешняя ссылка

• Технология QMCF разработан Фабрика клеток Icosagen