Нокаут-экраны CRISPR-Cas9 по всему геному - Genome-wide CRISPR-Cas9 knockout screens
Нокаут-экраны CRISPR-Cas9 по всему геному стремятся выяснить взаимосвязь между генотипом и фенотипом, устраняя экспрессию генов в масштабе всего генома и изучая возникающие в результате фенотипические изменения. Подход использует CRISPR-Cas9 система редактирования генов в сочетании с библиотеками одиночные направляющие РНК (sgRNAs), которые предназначены для нацеливания на каждый ген в геноме. В последние годы CRISPR-экран для всего генома превратился в мощный инструмент для проведения крупномасштабных проверок потери функции с низким уровнем шума, высокой эффективностью выбивания и минимальными эффектами сбоя.
История
Ранние исследования в Caenorhabditis elegans[1] и Drosophila melanogaster[2][3] видели крупномасштабные экраны систематической потери функции (LOF), выполненные через насыщающий мутагенез, демонстрируя потенциал этого подхода для характеристики генетических путей и идентификации генов с уникальными и важными функциями. Техника насыщающего мутагенеза позже была применена к другим организмам, например к рыбкам данио.[4][5] и мышей.[6][7]
Целевые подходы к нокдауну генов появились в 1980-х годах с такими методами, как гомологичная рекомбинация,[8][9] транс-расщепляющиеся рибозимы,[10][11] и антисмысловые технологии.[12][13]
К 2000 г. РНК-интерференция (RNAi) возникла как быстрый, простой и недорогой метод целевого нокдаун генов, и обычно использовался для изучения in vivo функция гена в C. elegans.[14][15][16][17] Действительно, всего через несколько лет после открытия Огнем и другие. (1998),[18] почти все из ~ 19 000 генов в C. elegans был проанализирован с использованием Нокдаун на основе РНКи.[19]
Производство библиотек РНКи облегчило применение этой технологии в масштабе всего генома, и методы, основанные на РНКи, стали преобладающим подходом для скринингового нокдауна в масштабе всего генома.[нужна цитата ]
Тем не менее, основанные на РНКи подходы к нокдаун-скринам по всему геному имеют свои ограничения. Во-первых, сильные отклонения от цели вызывают проблемы с ложноположительными наблюдениями.[20][21] Кроме того, поскольку РНКи снижает экспрессию генов на посттранскрипционном уровне за счет нацеливания на РНК, скрининг на основе РНКи приводит только к частичному и краткосрочному подавлению генов. В то время как частичное нокдаун может быть желательным в определенных ситуациях, требовалась технология с улучшенной эффективностью прицеливания и меньшим количеством попаданий вне цели.[нужна цитата ]
С момента первоначальной идентификации как прокариотическая адаптивная иммунная система,[22] бактериальный тип II сгруппированные через регулярные промежутки короткие повторы палиндрома (CRISPR) /Cas9 Система стала простым и эффективным инструментом для создания целевых мутаций LOF.[23] Он успешно применялся для редактирования геномов человека и начал вытеснять РНКи в качестве основного инструмента в исследованиях на млекопитающих.[24] В контексте нокаут-скринингов по всему геному недавние исследования продемонстрировали, что экраны CRISPR / Cas9 способны достигать высокоэффективного и полного истощения белка и преодолевать нецелевые проблемы, наблюдаемые при скринингах RNAi.[25][26] Таким образом, недавнее появление CRISPR-Cas9 резко увеличило наши возможности по выполнению крупномасштабных экранов LOF. Универсальность и программируемость Cas9 в сочетании с низким уровнем шума, высокой эффективностью выбивания и минимальными эффектами вне цели сделали CRISPR платформой выбора для многих исследователей, занимающихся таргетингом и редактированием генов.[24][27]
Методы
CRISPR / Cas9 Потеря функции
В сгруппированные через регулярные промежутки короткие повторы палиндрома (CRISPR) /Cas9 система - это технология редактирования генов, которая может ввести двухцепочечные разрывы (DSB) в целевом геномном локусе. Используя одиночная направляющая РНК (sgRNA), то эндонуклеаза Cas9 может быть доставлен в определенную последовательность ДНК, где он расщепляет нуклеотидную цепь.[28] Специфичность sgRNA определяется последовательностью из 20 нуклеотидов, гомологичной интересующему геномному локусу, а связывание с Cas9 опосредуется константной областью каркаса sgRNA. За желаемым сайтом-мишенью должен сразу следовать (от 5 ’к 3’) консервативный 3 нуклеотид. прилегающий мотив протоспейсера (ПАМ).[29][30] Чтобы восстановить DSB, ячейка может использовать сильно подверженный ошибкам негомологичное соединение концов, или же гомологичная рекомбинация. С помощью конструирования подходящих sgRNA в геном можно ввести запланированные вставки или делеции. В контексте полногеномного скрининга LOF цель состоит в том, чтобы вызвать нарушение и нокаут гена.[нужна цитата ]
библиотеки sgRNA
Создание библиотеки
Чтобы выполнить нокаут CRISPR в масштабе всего генома, необходимо создать коллекции sgRNA, известные как библиотеки sgRNA или библиотеки CRISPR knockout. Первым шагом в создании библиотеки sgRNA является идентификация интересующих областей генома на основе известных правил нацеливания sgRNA.[31] Например, sgRNA наиболее эффективны при нацеливании на кодирующие области генов, а не на 5 ’и 3’ UTR. Консервативные экзоны представляют собой привлекательные мишени, и следует учитывать их положение относительно сайта начала транскрипции.[31] Во-вторых, определяются и выбираются все возможные PAM-сайты.[31] Следует анализировать активность на и вне мишени, а также содержание GC, и следует избегать гомополимерных растяжений.[31] Наиболее часто используемая эндонуклеаза Cas9, полученная из Streptococcus pyogenes, распознает последовательность PAM NGG.[32]
Более того, определенные нуклеотиды оказываются предпочтительными в определенных местах. Гуанин в большей степени предпочтительнее цитозина в положении 20 сразу после мотива PAM, а в положении 16 цитозин предпочтительнее гуанина.[33] Для вариабельного нуклеотида в мотиве NGG PAM было показано, что цитозин является предпочтительным, а тимин неблагоприятным.[33] С учетом таких критериев библиотека sgRNA рассчитывается на основе выбранных сайтов PAM.[31][33][34]
Множественные sgRNA (по крайней мере 4-6) должны быть созданы против каждого отдельного гена, чтобы ограничить ложноположительное обнаружение, и должны быть включены sgRNA отрицательного контроля без известных мишеней.[31][33] Затем sgRNA создаются на месте синтез, амплифицированный с помощью ПЦР и клонированный в векторную систему доставки.
Существующие библиотеки
Разработка новой библиотеки sgRNA - трудоемкий и длительный процесс. На практике исследователи могут выбрать существующую библиотеку в зависимости от их экспериментальной цели и представляющих интерес клеточных линий. По состоянию на февраль 2020 года наиболее широко используемыми ресурсами для нокаут-экранов CRISPR для всего генома были два Нокаут CRISPR в масштабе генома (GeCKO) библиотеки, созданные лабораторией Чжан.[35] Доступные через addgene, эти лентивирусные библиотеки, соответственно, нацелены на экзоны человека и мыши, и обе доступны в виде одновекторной системы (где sgRNA и Cas9 присутствуют в одной плазмиде) или как двухвекторная система (где sgRNA и Cas9 присутствуют на отдельных плазмидах). Каждая библиотека поставляется в виде двух половинных библиотек, что позволяет исследователям проводить скрининг с 3 или 6 sgRNA / ген.[36]
Помимо GeCKO, был создан ряд других библиотек CRISPR, которые стали доступными через addgene. В лабораториях Sabatini & Lander в настоящее время имеется 7 отдельных библиотек для людей и мышей, включая целевые подбиблиотеки для различных подпулков, таких как киназы и рибосомные гены (Addgene # 51043–51048). Кроме того, улучшения специфичности sgRNAs привели к библиотекам «второго поколения», таким как библиотеки Brie (Addgene # 73632) и Brunello (Addgene # 73178), созданные лабораториями Doench и Root, а также библиотека Toronto knockout (TKO). (Addgene # 1000000069), созданный лабораторией Моффата.[36]
Лентивирусные векторы
Нокаут целевого гена с использованием CRISPR / Cas9 требует использования системы доставки для введения sgRNA и Cas9 в клетку. Хотя для CRISPR потенциально доступен ряд различных систем доставки,[37][38] Скрининг потери функции по всему геному в основном проводится с использованием лентивирусных векторов третьего поколения.[35][39][40] Эти лентивирусные векторы способны эффективно трансдуцировать широкий спектр типов клеток и стабильно интегрироваться в геном делящихся и неделящихся клеток.[41][42]Лентивирусные частицы третьего поколения получают путем котрансфекции клеток эмбриональной почки человека (HEK) 293T:
- две упаковывающие плазмиды, одна кодирующая Rev и другие Кляп и Pol;
- ан плазмида со сменной оболочкой кодирующий гликопротеин оболочки другого вируса (чаще всего G-белок вируса везикулярного стоматита (VSV-G));
- одна или две (в зависимости от применяемой библиотеки) переносят плазмиды, кодирующие Cas9 и sgRNA, а также маркеры отбора.[35][43][44]
Супернатант, содержащий лентивирусные частицы, собирают, концентрируют и впоследствии используют для заражения клеток-мишеней.[45] Точный протокол производства лентивирусов будет варьироваться в зависимости от цели исследования и прикладной библиотеки.[35][43][44] Если используется, например, двухвекторная система, клетки последовательно трансдуцируют Cas9 и sgRNA в двухступенчатой процедуре.[35][44] Хотя это более сложно, это дает преимущество более высокого титра вируса библиотеки sgRNA.[35]
Фенотипический отбор
В общем, существует два разных формата нокаут-экранов CRISPR для всего генома: группированные и объединенные. В матричном скрининге каждая лунка содержит конкретную и известную sgRNA, нацеленную на конкретный ген.[46] Поскольку sgRNA, отвечающая за каждый фенотип, известна на основе местоположения лунки, фенотипы можно идентифицировать и анализировать, не требуя генетического секвенирования. Этот формат позволяет измерять более специфические клеточные фенотипы, возможно, по флуоресценции или люминесценции, и позволяет исследователям использовать больше типов библиотек и методов доставки.[46] Однако для крупномасштабных экранов LOF массивные форматы считаются малоэффективными и дорогими с точки зрения финансовых и материальных ресурсов, поскольку популяции клеток необходимо изолировать и культивировать индивидуально.[46]
В объединенном скрининге клетки, выращенные в одном сосуде, трансдуцируют в массе вирусными векторами, в совокупности содержащими всю библиотеку sgRNA. Чтобы гарантировать, что количество клеток, инфицированных более чем одной sgRNA-содержащей частицей, ограничено, используется низкая множественность инфекции (MOI) (обычно 0,3-0,6).[46][47] На данный момент данные свидетельствуют о том, что каждая sgRNA должна быть представлена минимум в 200 клетках.[48][23] Будут отбираться трансдуцированные клетки с последующим положительным или отрицательным отбором для интересующего фенотипа, и для идентификации интегрированных sgRNA потребуется генетическое секвенирование.[46]
Секвенирование и анализ совпадений нового поколения
После фенотипического отбора геномная ДНК извлекается из выбранных клонов вместе с контрольной популяцией клеток.[23][46][49] В наиболее распространенных протоколах нокаута по всему геному «библиотека секвенирования следующего поколения (NGS)» создается с помощью двухэтапной полимеразной цепной реакции (ПЦР).[23][46] На первом этапе амплифицируется область sgRNA с использованием праймеров, специфичных для последовательности интеграции лентивируса, а на втором этапе добавляются последовательности Illumina i5 и i7.[23] NGS продуктов ПЦР позволяет идентифицировать восстановленные sgRNA, и можно использовать этап количественной оценки для определения относительной численности каждой sgRNA.[23]
Последний шаг в скрининге - это вычислительная оценка значительно обогащенных или истощенных sgRNA, проследить их до соответствующих генов и, в свою очередь, определить, какие гены и пути могут быть ответственны за наблюдаемый фенотип. В настоящее время для этой цели доступно несколько алгоритмов, наиболее популярным из которых является метод анализа на основе модели CRISPR / Cas9 Knockout (MAGeCK).[50] MAGeCK, разработанный специально для экранов вывода CRISPR / Cas9 в 2014 году, продемонстрировал лучшую производительность по сравнению с альтернативными алгоритмами того времени.[50] и с тех пор продемонстрировал надежные результаты и высокую чувствительность в различных экспериментальных условиях.[51] С 2015 года алгоритм MAGeCK был расширен, чтобы ввести измерения контроля качества и учесть ранее упущенную эффективность нокаута sgRNA.[51] Также был интегрирован веб-инструмент визуализации (VISPR), позволяющий пользователям в интерактивном режиме исследовать результаты, анализ и контроль качества.[51]
Приложения
Сотовые сигнальные механизмы
В последние годы CRISPR-экран для всего генома превратился в мощный инструмент для изучения сложных сетей клеточной передачи сигналов.[52] Передача клеточных сигналов важна для ряда фундаментальных биологических процессов, включая рост клеток, пролиферацию, дифференцировку и апоптоз.
Одним из практических примеров является идентификация генов, необходимых для передачи сигналов пролиферации в раковых клетках. Клетки трансдуцируются с помощью библиотеки sgRNA CRISPR и исследуются на предмет роста с течением времени. Сравнивая количество sgRNA в выбранных клетках с контролем, можно определить, какие sgRNA становятся истощенными и, в свою очередь, какие гены могут быть ответственными за дефект пролиферации. Такие скрининговые исследования использовались для выявления генов, необходимых для рака, в острый миелоидный лейкоз[53] и нейробластома,[54] и для описания опухолеспецифических различий между линиями раковых клеток.[55]
Выявление синтетических летальных партнеров
Целенаправленная терапия рака предназначены для нацеливания на конкретные гены, белки или среды, способствующие росту или выживанию опухолевых клеток. Однако после периода продолжительного лечения этими методами у опухолевых клеток может развиться устойчивость. Хотя механизмы, лежащие в основе устойчивости к противораковым лекарствам, плохо изучены, потенциальные причины включают: изменение мишени, деградацию лекарственного средства, ускользание от апоптоза и эпигенетические изменения.[56] Устойчивость широко известна и представляет собой серьезную проблему в лечении рака.[нужна цитата ]
Чтобы преодолеть эту проблему, синтетический смертельный партнера можно идентифицировать. Полногеномный скрининг LOF с использованием CRISPR-Cas9 можно использовать для скрининга синтетических летальных партнеров.[57] Для этого клеточную линию дикого типа и линию опухолевых клеток, содержащую мутацию, вызывающую устойчивость, трансдуцируют с помощью библиотеки sgRNA CRISPR. Две клеточные линии культивируются, и любые недопредставленные или мертвые клетки анализируются для выявления потенциальных синтетических летальных генов-партнеров. Недавнее исследование Хинце и другие. (2019)[58] использовали этот метод для выявления синтетического летального взаимодействия между химиотерапевтическими препаратами аспарагиназа и два гена в Сигнальный путь Wnt НКД2 и ЛГР6.
Факторы зависимости от хозяина при вирусной инфекции
Из-за своего небольшого размера геномов и ограниченного числа кодируемых белков вирусы используют белки-хозяева для проникновения, репликации и передачи. Идентификация таких белков-хозяев, также называемых факторами зависимости от хозяина (HDF), особенно важна для идентификации терапевтических целей. В последние годы многие группы успешно использовали CRISPR / Cas9 на уровне всего генома в качестве стратегии скрининга HDF при вирусных инфекциях.[59]
Один из примеров представлен Марсо. и другие. (2017),[60] кто стремился проанализировать факторы хозяина, связанные с денге и гепатит С (ВГС) инфекция (два вируса в семье Flaviviridae). ELAVL1, РНК-связывающий белок, кодируемый геном ELAVL1, оказался критическим рецептором для проникновения HCV, и было продемонстрировано заметное расхождение в факторах зависимости от хозяина между двумя flaviviridae.[60]
Дальнейшие приложения
Дополнительные сообщения о применении полногеномных CRISPR-экранов включают изучение митохондриального метаболизма,[61] устойчивость к бактериальным токсинам,[62] генетические драйверы метастазирования,[63] лекарственная устойчивость рака,[64] Гибель клеток, вызванная вирусом Западного Нила,[65] и генные сети иммунных клеток.[66][67]
Ограничения
В этом разделе конкретно рассматриваются CRISPR-экраны для всего генома. Для обзора ограничений CRISPR см. Lino et al. (2018)[38]
Библиотека sgRNA
Скрининг CRISPR по всему геному в конечном итоге будет ограничен свойствами выбранной библиотеки sgRNA. Каждая библиотека будет содержать другой набор sgRNA, и средний охват каждого гена может варьироваться. Доступные в настоящее время библиотеки, как правило, смещены в сторону sgRNAs, нацеленных на ранние (5 ’) экзоны, кодирующие белок, а не на библиотеки, нацеленные на более функциональные домены белка.[58] Эта проблема была подчеркнута Хинце. и другие. (2019),[58] кто отметил, что гены, связанные с аспарагиназа чувствительность не удалось оценить в их полногеномном скрининге устойчивых к аспарагиназе лейкозных клеток.
Если подходящая библиотека недоступна, создание и усиление новой библиотеки sgRNA - длительный процесс, который может занять много месяцев. Возможные проблемы включают: (i) эффективный дизайн sgRNA; (ii) обеспечение полного охвата sgRNA по всему геному; (iii) конструкция остова лентивирусного вектора; (iv) производство достаточного количества высококачественного лентивируса; (v) преодоление низкой эффективности преобразования; (vi) правильное масштабирование бактериальной культуры.[68]
Поддержание покрытия клеточной sgRNA
Одним из самых серьезных препятствий для CRISPR-скрининга в масштабах всего генома является обеспечение адекватного охвата библиотеки sgRNA в популяции клеток.[23] На данный момент данные свидетельствуют о том, что каждая sgRNA должна быть представлена и поддерживаться минимум в 200-300 клетках.[23][48]
Учитывая, что в стандартном протоколе используется кратность заражения ~ 0,3 и эффективность трансдукции 30-40%[44][23] количество ячеек, необходимых для создания и поддержания подходящего покрытия, становится очень большим. Например, самой популярной библиотекой sgRNA человека является Библиотека GeCKO v2 созданный лабораторией Чжан;[30] он содержит 123 411 sgRNA. Исследования, использующие эту библиотеку, обычно преобразуют более 1 × 108 клетки [58][59][69]
Поскольку CRISPR продолжает демонстрировать низкий уровень шума и минимальные эффекты вне мишени, альтернативной стратегией является уменьшение количества sgRNA на ген для первичного скрининга. Для выбора совпадений используются менее строгие отсечки, а дополнительные sgRNA позже используются в более специфическом вторичном скрининге. Этот подход продемонстрирован Денчем. и другие. (2016),[33] которые обнаружили, что> 92% генов, восстановленных с использованием стандартного протокола, также были восстановлены с использованием меньшего количества sgRNA на ген. Они предполагают, что эта стратегия может быть полезна в исследованиях, где масштабирование чрезмерно дорого.[нужна цитата ]
Лентивирусные ограничения
Лентивирусные векторы имеют определенные общие ограничения. Во-первых, невозможно контролировать, где вирусный геном интегрируется в геном хозяина, и это может повлиять на важные функции клетки. Ваннуччи и другие.[70] предоставить отличный обзор вирусных векторов вместе с их общими преимуществами и недостатками. В конкретном контексте CRISPR-скрининга на уровне всего генома производство и преобразование лентивирусных частиц является относительно трудоемким и требует много времени, всего около двух недель.[44] Кроме того, поскольку ДНК интегрируется в геном хозяина, доставка лентивирусов приводит к долговременной экспрессии Cas9, потенциально приводя к нецелевым эффектам.[нужна цитата ]
Массивные и объединенные экраны
В матричном скрининге каждая лунка содержит конкретную и известную sgRNA, нацеленную на конкретный ген. Таким образом, матричные экраны позволяют детальное профилирование отдельной клетки, но ограничены высокими затратами и трудозатратами, необходимыми для выделения и культивирования большого количества отдельных популяций клеток.[46] Обычные объединенные экраны CRISPR относительно просты и рентабельны в исполнении, но ограничиваются исследованием всей популяции клеток. Это означает, что редкие фенотипы может быть труднее идентифицировать, и только грубые фенотипы могут быть отобраны, например, для выживаемость клеток, пролиферация или экспрессия репортерного гена.[нужна цитата ]
СМИ культуры
Выбор питательная среда может повлиять на физиологическую значимость результатов экспериментов на культурах клеток из-за различий в составе и концентрациях питательных веществ.[71] Систематическая погрешность в сгенерированных наборах данных недавно была показана для CRISPR и РНКи подавление гена экраны (особенно метаболические гены),[72] и для метаболического профилирования рака Сотовые линии.[71] Например, более сильная зависимость от ASNS (аспарагинсинтетаза) была обнаружена в клеточных линиях, культивируемых в DMEM, в котором отсутствует аспарагин, по сравнению с клеточными линиями, культивируемыми в RPMI или F12 (содержащий аспарагин).[72] Избежать такой систематической ошибки можно, используя однородную среду для всех проверенных клеточных линий и, в идеале, используя среда роста это лучше отражает физиологический уровень питательных веществ. В последнее время такие медиа-типы, как Plasmax[73] и плазмоподобная среда человека (HPLM),[74] были разработаны.
Будущие направления
CRISPR + одноклеточная РНК-seq
Новые технологии стремятся объединить объединенные экраны CRISPR с детальным разрешением массово параллельных одноклеточное РНК-секвенирование (RNA-seq). Исследования с использованием «CRISP-seq»,[75] «CROP-seq»,[76] и «PERTURB-seq»[77] продемонстрировали богатые возможности считывания геномов, точно определяя сигнатуры экспрессии отдельных генов в сложном пуле клеток. Эти методы обладают дополнительным преимуществом, заключающимся в получении профилей транскрипции индуцированных sgRNA клеток.[нужна цитата ]
Рекомендации
- ^ Бреннер С. (май 1974 г.). «Генетика Caenorhabditis elegans». Генетика. 77 (1): 71–94. ЧВК 1213120. PMID 4366476.
- ^ Ганс М., Аудит С, Массон М. (декабрь 1975 г.). «Выделение и характеристика сцепленных с полом мутантов с женской стерильностью у Drosophila melanogaster». Генетика. 81 (4): 683–704. ЧВК 1213428. PMID 814037.
- ^ Nüsslein-Volhard C, Wieschaus E (октябрь 1980 г.). «Мутации, влияющие на количество сегментов и полярность у дрозофилы». Природа. 287 (5785): 795–801. Bibcode:1980Натура.287..795Н. Дои:10.1038 / 287795a0. PMID 6776413. S2CID 4337658.
- ^ Хаффтер П., Гранато М., Бренд М., Маллинз М.С., Хаммершмидт М., Кейн Д.А. и др. (Декабрь 1996 г.). «Идентификация генов с уникальными и важными функциями в развитии рыбок данио, Danio rerio». Разработка. 123: 1–36. PMID 9007226.
- ^ Дривер В., Сольница-Крезель Л., Шир А.Ф., Нойхаусс С.К., Малики Дж., Стемпл Д.Л. и др. (Декабрь 1996 г.). «Генетический скрининг мутаций, влияющих на эмбриогенез у рыбок данио». Разработка. 123: 37–46. PMID 9007227.
- ^ Нолан П.М., Питерс Дж., Стривенс М., Роджерс Д., Хаган Дж., Сперр Н. и др. (Август 2000 г.). «Систематическая, геномная, управляемая фенотипом программа мутагенеза для изучения функций генов у мышей». Природа Генетика. 25 (4): 440–3. Дои:10.1038/78140. PMID 10932191. S2CID 9028853.
- ^ Касарскис А., Манова К., Андерсон К.В. (июнь 1998 г.). «Скрининг на основе фенотипа на летальные эмбриональные мутации у мышей». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 95 (13): 7485–90. Bibcode:1998PNAS ... 95.7485K. Дои:10.1073 / пнас.95.13.7485. ЧВК 22659. PMID 9636176.
- ^ Госслер А., Дотчман Т., Корн Р., Серфлинг Е., Кемлер Р. (декабрь 1986 г.). «Трансгенез с помощью линий эмбриональных стволовых клеток, полученных из бластоцист». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 83 (23): 9065–9. Bibcode:1986PNAS ... 83.9065G. Дои:10.1073 / пнас.83.23.9065. ЧВК 387075. PMID 3024164.
- ^ Капеччи М.Р. (июнь 1989 г.). «Изменение генома путем гомологичной рекомбинации». Наука. 244 (4910): 1288–92. Bibcode:1989Sci ... 244.1288C. Дои:10.1126 / science.2660260. PMID 2660260.
- ^ Zaug AJ, Grosshans CA, Чех TR (декабрь 1988 г.). «Последовательно-специфическая эндорибонуклеазная активность рибозима Tetrahymena: усиленное расщепление некоторых олигонуклеотидных субстратов, которые образуют несовместимые комплексы рибозим-субстрат». Биохимия. 27 (25): 8924–31. Дои:10.1021 / bi00425a008. PMID 3069131.
- ^ Кэмерон Ф. Х., Дженнингс, Пенсильвания (декабрь 1989 г.). «Специфическое подавление генов с помощью сконструированных рибозимов в клетках обезьян». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 86 (23): 9139–43. Bibcode:1989PNAS ... 86.9139C. Дои:10.1073 / пнас.86.23.9139. ЧВК 298449. PMID 2556702.
- ^ Эккер-младший, Дэвис Р.В. (август 1986 г.). «Ингибирование экспрессии генов в растительных клетках путем экспрессии антисмысловой РНК». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 83 (15): 5372–6. Bibcode:1986PNAS ... 83.5372E. Дои:10.1073 / пнас.83.15.5372. ЧВК 386288. PMID 16593734.
- ^ Тулме Дж. Дж., Элен С. (декабрь 1988 г.). «Антисмысловые олигодезоксирибонуклеотиды: альтернатива антисмысловой РНК для искусственной регуляции экспрессии генов - обзор». Ген. 72 (1–2): 51–8. Дои:10.1016/0378-1119(88)90127-8. PMID 2468575.
- ^ Чейз Д., Серафинас С., Эшкрофт Н., Косински М., Лонго Д., Феррис Д. К., Голден А (январь 2000 г.). «Поло-подобная киназа PLK-1 необходима для разрушения ядерной оболочки и завершения мейоза у Caenorhabditis elegans». Бытие. 26 (1): 26–41. Дои:10.1002 / (sici) 1526-968x (200001) 26: 1 <26 :: aid-gene6> 3.0.co; 2-o. PMID 10660671.
- ^ Кавано Т., Фудзита М., Сакамото Х. (июль 2000 г.). «Уникальные и повторяющиеся функции белков SR, консервативного семейства факторов сплайсинга, в развитии Caenorhabditis elegans». Механизмы развития. 95 (1–2): 67–76. Дои:10.1016 / s0925-4773 (00) 00339-7. PMID 10906451. S2CID 17256368.
- ^ Пауэрс Дж., Боссингер О., Роуз Д., Стром С., Сакстон В. (октябрь 1998 г.). «Кинезин нематоды, необходимый для продвижения борозды деления». Текущая биология. 8 (20): 1133–6. Дои:10.1016 / s0960-9822 (98) 70470-1. ЧВК 3209536. PMID 9778533.
- ^ Hsu JY, Sun ZW, Li X, Reuben M, Tatchell K, Bishop DK, et al. (Август 2000 г.). «Митотическое фосфорилирование гистона H3 регулируется Ipl1 / aurora киназой и Glc7 / PP1 фосфатазой у почкующихся дрожжей и нематод». Клетка. 102 (3): 279–91. Дои:10.1016 / s0092-8674 (00) 00034-9. PMID 10975519. S2CID 16057773.
- ^ Огонь А., Сюй С., Монтгомери М.К., Костас С.А., Драйвер С.Е., Мелло СС (февраль 1998 г.). «Мощное и специфическое генетическое вмешательство двухцепочечной РНК в Caenorhabditis elegans». Природа. 391 (6669): 806–11. Bibcode:1998Натура.391..806F. Дои:10.1038/35888. PMID 9486653. S2CID 4355692.
- ^ Агравал Н., Дасаради П.В., Мохмед А., Малхотра П., Бхатнагар Р.К., Мукерджи С.К. (декабрь 2003 г.). «РНК-интерференция: биология, механизм и приложения». Обзоры микробиологии и молекулярной биологии. 67 (4): 657–85. Дои:10.1128 / mmbr.67.4.657-685.2003. ЧВК 309050. PMID 14665679.
- ^ Sigoillot FD, Lyman S, Huckins JF, Adamson B, Chung E, Quattrochi B, King RW (февраль 2012 г.). «Метод биоинформатики выявляет заметные нецелевые транскрипты на экранах РНКи». Методы природы. 9 (4): 363–6. Дои:10.1038 / nmeth.1898. ЧВК 3482495. PMID 22343343.
- ^ Эчеверри К.Дж., Бичи П.А., Баум Б., Бутрос М., Бухгольц Ф., Чанда С.К. и др. (Октябрь 2006 г.). «Сведение к минимуму риска сообщения о ложных срабатываниях на крупномасштабных экранах РНКи». Методы природы. 3 (10): 777–9. Дои:10.1038 / nmeth1006-777. HDL:1874/21016. PMID 16990807. S2CID 1737581.
- ^ Баррангу Р., Фремо С., Дево Х., Ричардс М., Боявал П., Муано С. и др. (Март 2007 г.). «CRISPR обеспечивает приобретенную устойчивость к вирусам у прокариот». Наука. 315 (5819): 1709–12. Bibcode:2007Научный ... 315.1709B. Дои:10.1126 / science.1138140. HDL:20.500.11794/38902. PMID 17379808. S2CID 3888761.
- ^ а б c d е ж грамм час я Яу Э. Х., Рана TM (2018). «Следующее поколение секвенирования полногеномных CRISPR-экранов». Секвенирование следующего поколения. Методы молекулярной биологии. 1712. С. 203–216. Дои:10.1007/978-1-4939-7514-3_13. ISBN 978-1-4939-7512-9. ЧВК 6089254. PMID 29224076.
- ^ а б Boettcher M, McManus MT (май 2015 г.). «Выбор подходящего инструмента для работы: RNAi, TALEN или CRISPR». Молекулярная клетка. 58 (4): 575–85. Дои:10.1016 / j.molcel.2015.04.028. ЧВК 4441801. PMID 26000843.
- ^ Гилберт Л.А., Хорлбек М.А., Адамсон Б., Вильялта Дж. Э., Чен Ю., Уайтхед Е. Х. и др. (Октябрь 2014 г.). "Контроль репрессии и активации генов, опосредованный CRISPR в масштабе генома". Клетка. 159 (3): 647–61. Дои:10.1016 / j.cell.2014.09.029. ЧВК 4253859. PMID 25307932.
- ^ Конг Л., Ран Ф.А., Кокс Д., Лин С., Барретто Р., Хабиб Н. и др. (Февраль 2013). «Мультиплексная геномная инженерия с использованием систем CRISPR / Cas». Наука. 339 (6121): 819–23. Bibcode:2013Наука ... 339..819C. Дои:10.1126 / наука.1231143. ЧВК 3795411. PMID 23287718.
- ^ Эверс Б., Ястшебски К., Хейманс Дж. П., Грернрум В., Бейерсберген Р. Л., Бернардс Р. (июнь 2016 г.). «Нокаут-скрининг CRISPR превосходит shRNA и CRISPRi в идентификации основных генов». Природа Биотехнологии. 34 (6): 631–3. Дои:10.1038 / nbt.3536. PMID 27111720. S2CID 22384060.
- ^ Джинек М., Чилински К., Фонфара И., Хауэр М., Дудна Дж. А., Шарпантье Е. (август 2012 г.). «Программируемая двойная РНК-управляемая ДНК-эндонуклеаза в адаптивном бактериальном иммунитете». Наука. 337 (6096): 816–21. Bibcode:2012Sci ... 337..816J. Дои:10.1126 / наука.1225829. ЧВК 6286148. PMID 22745249.
- ^ Wu X, Kriz AJ, Sharp PA (июнь 2014 г.). «Целевая специфичность системы CRISPR-Cas9». Количественная биология. 2 (2): 59–70. Дои:10.1007 / s40484-014-0030-х. ЧВК 4338555. PMID 25722925.
- ^ а б Чжан Ф, Вэнь И, Го Х (сентябрь 2014 г.). «CRISPR / Cas9 для редактирования генома: прогресс, последствия и проблемы». Молекулярная генетика человека. 23 (R1): R40-6. Дои:10.1093 / hmg / ddu125. PMID 24651067.
- ^ а б c d е ж Joung J, Konermann S, Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Platt RJ, Brigham MD, et al. (Апрель 2017 г.). «Геномный нокаут CRISPR-Cas9 и скрининг транскрипционной активации». Протоколы природы. 12 (4): 828–863. Дои:10.1038 / nprot.2017.016. ЧВК 5526071. PMID 28333914.
- ^ Эндо М., Миками М., Эндо А., Кая Х., Ито Т., Нисимасу Х. и др. (Январь 2019). «Редактирование генома растений с помощью инженерного CRISPR-Cas9, распознающего NG PAM». Природа Растения. 5 (1): 14–17. Дои:10.1038 / s41477-018-0321-8. PMID 30531939. S2CID 54462288.
- ^ а б c d е Денч Дж. Г., Фузи Н., Суллендер М., Хегде М., Ваймберг Е. В., Донован К. Ф. и др. (Февраль 2016). «Оптимизированный дизайн sgRNA для максимизации активности и минимизации побочных эффектов CRISPR-Cas9». Природа Биотехнологии. 34 (2): 184–191. Дои:10.1038 / nbt.3437. ЧВК 4744125. PMID 26780180.
- ^ Cancellieri S, Canver MC, Bombieri N, Giugno R, Pinello L (ноябрь 2019 г.). «CRISPRitz: быстрая, высокопроизводительная и учитывающая варианты in silico идентификация нецелевых сайтов для редактирования генома CRISPR». Биоинформатика. 36 (7): 2001–2008. Дои:10.1093 / биоинформатика / btz867. ЧВК 7141852. PMID 31764961.
- ^ а б c d е ж Sanjana NE, Shalem O, Zhang F (август 2014 г.). «Улучшенные векторы и полногеномные библиотеки для CRISPR-скрининга». Методы природы. 11 (8): 783–784. Дои:10.1038 / nmeth.3047. ЧВК 4486245. PMID 25075903.
- ^ а б «Объединенные библиотеки». Addgene.
- ^ Сюй С.Л., Руан М.З., Махаджан В.Б., Цанг Ш. (январь 2019 г.). «Системы вирусной доставки для CRISPR». Вирусы. 11 (1): 28. Дои:10.3390 / v11010028. ЧВК 6356701. PMID 30621179.
- ^ а б Lino CA, Harper JC, Carney JP, Timlin JA (ноябрь 2018 г.). «Доставка CRISPR: обзор проблем и подходов». Доставки лекарств. 25 (1): 1234–1257. Дои:10.1080/10717544.2018.1474964. ЧВК 6058482. PMID 29801422.
- ^ Ван Т., Вэй Дж.Дж., Сабатини Д.М., Ландер Э.С. (январь 2014 г.). «Генетический скрининг в клетках человека с использованием системы CRISPR-Cas9». Наука. 343 (6166): 80–4. Bibcode:2014Наука ... 343 ... 80 Вт. Дои:10.1126 / science.1246981. ЧВК 3972032. PMID 24336569.
- ^ Shalem O, Sanjana NE, Hartenian E, Shi X, Scott DA, Mikkelson T. и др. (Январь 2014). «Скрининг нокаута CRISPR-Cas9 в масштабе генома в клетках человека». Наука. 343 (6166): 84–87. Bibcode:2014Наука ... 343 ... 84S. Дои:10.1126 / science.1247005. ЧВК 4089965. PMID 24336571.
- ^ Яниз-Галенде Э., Хаджар Р.Дж. (январь 2014 г.). «Стволовые клетки и генная терапия для регенерации сердца». Сердечная регенерация и восстановление. Издательство Вудхед. С. 347–379. Дои:10.1533/9780857096708.4.347. ISBN 9780857096586.
- ^ Пауэлс К., Гийсберс Р., Тоелен Дж., Шамбах А., Уиллард-Галло К., Ферхеуст С. и др. (Декабрь 2009 г.). «Современные лентивирусные векторы для использования в исследованиях: оценка риска и рекомендации по биобезопасности». Современная генная терапия. 9 (6): 459–74. Дои:10.2174/156652309790031120. PMID 20021330.
- ^ а б Dull T, Zufferey R, Kelly M, Mandel RJ, Nguyen M, Trono D, Naldini L (ноябрь 1998 г.). «Лентивирусный вектор третьего поколения с системой условной упаковки». Журнал вирусологии. 72 (11): 8463–71. Дои:10.1128 / JVI.72.11.8463-8471.1998. ЧВК 110254. PMID 9765382.
- ^ а б c d е "Руководство пользователя системы Lenti-X CRISPR / Cas9" (PDF). Такара Био США.
- ^ Tiscornia G, Singer O, Verma IM (2006). «Производство и очистка лентивирусных векторов». Протоколы природы. 1 (1): 241–5. Дои:10.1038 / nprot.2006.37. PMID 17406239. S2CID 37763028.
- ^ а б c d е ж грамм час Агротис А, Кеттелер Р. (2015). «Новая эра в функциональной геномике с использованием CRISPR / Cas9 в матричном скрининге библиотек». Границы генетики. 6: 300. Дои:10.3389 / fgene.2015.00300. ЧВК 4585242. PMID 26442115.
- ^ Юнг А.Т., Чой Ю.Х., Ли А.Х., Хейл С., Понстингл Х., Пикард Д. и др. (Октябрь 2019 г.). «Сальмонеллезная инфекция». мБио. 10 (5). Дои:10,1128 / мБио.02169-19. ЧВК 6786873. PMID 31594818.
- ^ а б Харт Т., Чандрашекхар М., Ареггер М., Стейнхарт З., Браун К.Р., МакЛауд Дж. И др. (Декабрь 2015 г.). «Скрины CRISPR с высоким разрешением выявляют гены приспособленности и специфические для генотипа функции рака». Клетка. 163 (6): 1515–26. Дои:10.1016 / j.cell.2015.11.015. PMID 26627737.
- ^ Слесарев А., Вишванатан Л., Тан Й., Боргшульте Т., Ахтиен К., Разафски Д. и др. (Март 2019 г.). "CRISPR / CAS9 нацеленный ЗАХВАТ геномных областей млекопитающих для характеристики с помощью NGS". Научные отчеты. 9 (1): 3587. Bibcode:2019НатСР ... 9.3587S. Дои:10.1038 / с41598-019-39667-4. ЧВК 6401131. PMID 30837529.
- ^ а б Ли В., Сюй Х, Сяо Т., Конг Л., Лав М.И., Чжан Ф. и др. (2014). «MAGeCK обеспечивает надежную идентификацию основных генов с помощью нокаут-экранов CRISPR / Cas9 в масштабе генома». Геномная биология. 15 (12): 554. Дои:10.1186 / s13059-014-0554-4. ЧВК 4290824. PMID 25476604.
- ^ а б c Ли В., Кёстер Дж., Сюй Х., Чен С.Х., Сяо Т., Лю Дж.С. и др. (Декабрь 2015 г.). «Контроль качества, моделирование и визуализация экранов CRISPR с помощью MAGeCK-VISPR». Геномная биология. 16: 281. Дои:10.1186 / s13059-015-0843-6. ЧВК 4699372. PMID 26673418.
- ^ Шарма С., Петсалаки Э. (март 2018 г.). «Применение подходов к скринингу на основе CRISPR-Cas9 для изучения клеточных сигнальных механизмов». Международный журнал молекулярных наук. 19 (4): 933. Дои:10.3390 / ijms19040933. ЧВК 5979383. PMID 29561791.
- ^ Tzelepis K, Koike-Yusa H, De Braekeleer E, Li Y, Metzakopian E, Dovey OM, et al. (Октябрь 2016 г.). «Экран отсева CRISPR определяет генетические уязвимости и терапевтические цели при остром миелоидном лейкозе». Отчеты по ячейкам. 17 (4): 1193–1205. Дои:10.1016 / j.celrep.2016.09.079. ЧВК 5081405. PMID 27760321.
- ^ Чен Л., Алекс Дж., Дхария Н.В., Росс Л., Инигуес А.Б., Конвей А.С. и др. (Январь 2018). «Экран CRISPR-Cas9 выявляет зависимость нейробластомы, усиленной MYCN, от EZH2». Журнал клинических исследований. 128 (1): 446–462. Дои:10.1172 / JCI90793. ЧВК 5749506. PMID 29202477.
- ^ Ван Т., Бирсой К., Хьюз Н.В., Крупчак К.М., Пост Y, Вей Дж.Дж. и др. (Ноябрь 2015 г.). «Идентификация и характеристика основных генов в геноме человека». Наука. 350 (6264): 1096–101. Bibcode:2015Sci ... 350.1096W. Дои:10.1126 / science.aac7041. ЧВК 4662922. PMID 26472758.
- ^ Лири М., Хирбот С., Лапинска К., Саркар С. (декабрь 2018 г.). «Сенсибилизация устойчивых к лекарствам раковых клеток: вопрос комбинированной терапии». Рак. 10 (12): 483. Дои:10.3390 / раки10120483. ЧВК 6315347. PMID 30518036.
- ^ Ван Ц., Ван Г, Фэн Х, Пастух П., Чжан Дж., Тан М. и др. (Апрель 2019 г.). «Скрининг CRISPR по всему геному показывает синтетическую летальность дефицита RNASEH2 и ингибирование ATR». Онкоген. 38 (14): 2451–2463. Дои:10.1038 / с41388-018-0606-4. ЧВК 6450769. PMID 30532030.
- ^ а б c d Hinze L, Pfirrmann M, Karim S, Degar J, McGuckin C, Vinjamur D, et al. (Апрель 2019 г.). «Синтетическая летальность активации пути Wnt и аспарагиназы при лекарственно-устойчивых острых лейкозах». Раковая клетка. 35 (4): 664–676.e7. Дои:10.1016 / j.ccell.2019.03.004. ЧВК 6541931. PMID 30991026.
- ^ а б Ли Б., Клохизей С.М., Чиа Б.С., Ван Б., Цуй А., Эйзенхаур Т. и др. (Январь 2020 г.). «Полногеномный CRISPR-скрининг выявляет факторы зависимости хозяина от вируса гриппа А». Nature Communications. 11 (1): 164. Bibcode:2020NatCo..11..164L. Дои:10.1038 / с41467-019-13965-х. ЧВК 6952391. PMID 31919360.
- ^ а б Марсо С.Д., Пушник А.С., Майзуб К., Оои Ю.С., Брюер С.М., Фукс Г. и др. (Июль 2016 г.). «Генетическое вскрытие факторов хозяина Flaviviridae с помощью CRISPR-скрининга в масштабе генома». Природа. 535 (7610): 159–63. Bibcode:2016Натура.535..159М. Дои:10.1038 / природа18631. ЧВК 4964798. PMID 27383987.
- ^ Бирсой К., Ван Т., Чен В.В., Фрейнкман Э., Абу-Ремайле М., Сабатини Д.М. (июль 2015 г.). «Существенная роль митохондриальной цепи переноса электронов в пролиферации клеток - обеспечение синтеза аспартата». Клетка. 162 (3): 540–51. Дои:10.1016 / j.cell.2015.07.016. ЧВК 4522279. PMID 26232224.
- ^ Койке-Юса Х, Ли Й, Тан Е.П., Веласко-Эррера М, Юса К. (март 2014 г.). «Полногеномный рецессивный генетический скрининг в клетках млекопитающих с лентивирусной библиотекой CRISPR-направляющей РНК». Природа Биотехнологии. 32 (3): 267–73. Дои:10.1038 / nbt.2800. PMID 24535568. S2CID 23071292.
- ^ Chen S, Sanjana NE, Zheng K, Shalem O, Lee K, Shi X и др. (Март 2015 г.). «Полногеномный CRISPR-скрининг на мышиной модели роста и метастазирования опухоли». Клетка. 160 (6): 1246–60. Дои:10.1016 / j.cell.2015.02.038. ЧВК 4380877. PMID 25748654.
- ^ Ши Дж., Ван Э, Милаццо Дж. П., Ван З., Кинни Дж. Б., Вакок С. Р. (июнь 2015 г.). «Открытие мишеней противораковых лекарств с помощью CRISPR-Cas9 скрининга белковых доменов». Природа Биотехнологии. 33 (6): 661–7. Дои:10.1038 / nbt.3235. ЧВК 4529991. PMID 25961408.
- ^ Ма Х, Данг И, Ву И, Джиа Дж, Аная Э, Чжан Дж и др. (Июль 2015 г.). «Скрининг на основе CRISPR определяет гены, необходимые для гибели клеток, вызванной вирусом Западного Нила». Отчеты по ячейкам. 12 (4): 673–83. Дои:10.1016 / j.celrep.2015.06.049. ЧВК 4559080. PMID 26190106.
- ^ Парнас О., Йованович М., Eisenhaure TM, Herbst RH, Dixit A, Ye CJ и др. (Июль 2015 г.). «Полногеномный CRISPR-скрининг первичных иммунных клеток с целью вскрытия регуляторных сетей». Клетка. 162 (3): 675–86. Дои:10.1016 / j.cell.2015.06.059. ЧВК 4522370. PMID 26189680.
- ^ Шмид-Бургк Дж. Л., Чаухан Д., Шмидт Т., Эберт Т. С., Рейнхардт Дж., Эндл Э, Хорнунг В. (январь 2016 г.). «Скрининг CRISPR (кластеризованные с регулярными промежутками короткие палиндромные повторы) по всему геному определяет NEK7 как важный компонент активации инфламмасомы NLRP3». Журнал биологической химии. 291 (1): 103–9. Дои:10.1074 / jbc.C115.700492. ЧВК 4697147. PMID 26553871.
- ^ Куинн Т. «Преимущества и проблемы объединенных библиотек». Серия вебинаров. Такара Био США.
- ^ Fang Z, Weng C, Li H, Tao R, Mai W, Liu X и др. (Март 2019 г.). «Анализ неоднородности отдельных клеток и CRISPR-скрининг для определения ключевых генов заболеваний, специфичных для β-клеток». Отчеты по ячейкам. 26 (11): 3132–3144.e7. Дои:10.1016 / j.celrep.2019.02.043. ЧВК 6573026. PMID 30865899.
- ^ Ваннуччи Л., Лай М., Чиуппези Ф., Чекерини-Нелли Л., Пистелло М. (январь 2013 г.). «Вирусные векторы: взгляд назад и вперед на технологию переноса генов». Новая микробиология. 36 (1): 1–22. PMID 23435812.
- ^ а б Лагзил С, Готтлибе, Шломи Т (2020). "Следите за своими СМИ". Метаболизм природы. Дои:10.1038 / с42255-020-00299-у.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
- ^ а б Лагзил С., Ли В. Д., Шломи Т. (2019). «Вывод о зависимости рака от метаболических генов с помощью крупномасштабных генетических тестов». BMC Biol. 17 (1): 37. Дои:10.1186 / s12915-019-0654-4. ЧВК 6489231. PMID 31039782.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
- ^ Ванде Вурде Дж., Акерманн Т., Пфетцер Н., Самптон Д., Маккей Дж., Кална Дж.; и другие. (2019). «Повышение точности метаболизма моделей рака с помощью физиологической среды для культивирования клеток». Sci Adv. 5 (1): eaau7314. Дои:10.1126 / sciadv.aau7314. ЧВК 6314821. PMID 30613774.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
- ^ Кантор Дж. Р., Абу-Ремайле М., Канарек Н., Фрейнкман Е., Гао Х, Луиссен А.; и другие. (2017). «Физиологическая среда восстанавливает клеточный метаболизм и обнаруживает мочевую кислоту как эндогенный ингибитор UMP-синтазы». Клетка. 169 (2): 258-272.e17. Дои:10.1016 / j.cell.2017.03.023. ЧВК 5421364. PMID 28388410.CS1 maint: несколько имен: список авторов (связь)
- ^ Джайтин Д.А., Вайнер А., Йофе И., Лара-Астиасо Д., Керен-Шауль Н., Дэвид Е. и др. (Декабрь 2016 г.). «Рассечение иммунных цепей путем связывания CRISPR-Pooled Screens с одноклеточной RNA-Seq». Клетка. 167 (7): 1883–1896.e15. Дои:10.1016 / j.cell.2016.11.039. PMID 27984734.
- ^ Датлингер П., Рендейро А.Ф., Шмидл С., Краусгрубер Т., Тракслер П., Клугаммер Дж. И др. (Март 2017 г.). «Объединенный CRISPR-скрининг со считыванием одноклеточного транскриптома». Методы природы. 14 (3): 297–301. Дои:10.1038 / nmeth.4177. ЧВК 5334791. PMID 28099430.
- ^ Диксит А., Парнас О, Ли Б., Чен Дж., Фулько С.П., Джерби-Арнон Л. и др. (Декабрь 2016 г.). "Perturb-Seq: разделение молекулярных цепей с помощью масштабируемого профилирования одноклеточной РНК объединенных генетических скринингов". Клетка. 167 (7): 1853–1866.e17. Дои:10.1016 / j.cell.2016.11.038. ЧВК 5181115. PMID 27984732.