Отрицательное пятно - Negative stain

В микроскопия, отрицательное окрашивание это признанный метод, часто используемый в диагностической микроскопии, для контрастирования тонких образец с оптически непрозрачный жидкость. В этой технике фон окрашенный, оставляя фактический образец нетронутым и, следовательно, видимым. Это контрастирует с положительное окрашивание, в котором окрашен сам образец.

Светлопольная микроскопия

Основная статья: Светлопольная микроскопия

За светлопольная микроскопия негативное окрашивание обычно выполняется с использованием жидкости для черных чернил, такой как нигрозин и Тушь. Образец, например влажный бактериальный Культуру выкладывают на предметное стекло, смешивают с отрицательной окраской и дают высохнуть. При просмотре с микроскоп бактериальные клетки и, возможно, их споры, кажутся светлыми на темном фоне. Был разработан альтернативный метод с использованием обычного водостойкого маркера для удаления негативного пятна.[1]

Просвечивающая электронная микроскопия

Основная статья: Просвечивающая электронная микроскопия

В случае просвечивающая электронная микроскопия, непрозрачность электроны относится к атомный номер, т.е. число протонов. Некоторые подходящие негативные пятна включают: молибдат аммония, уранилацетат, уранилформиат, фосфорновольфрамовая кислота, четырехокись осмия, феррицианид осмия[2] и авроглюкотионат. Они были выбраны потому, что они сильно рассеивают электроны, а также хорошо адсорбируются на биологическом веществе. Структуры, которые могут быть окрашены отрицательно, намного меньше, чем те, которые изучаются с помощью светового микроскопа. Здесь метод используется для просмотра вирусы, бактерии, бактериальные жгутики, биологическая мембрана структуры и белки или белковые агрегаты, которые все имеют низкую способность рассеивать электроны. Некоторые красители, такие как четырехокись осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Являясь сильными окислителями, они образуют поперечные сшивки липидов, в основном, реагируя с ненасыщенными углерод-углеродными связями, и таким образом фиксируют биологические мембраны на месте в образцах тканей и одновременно окрашивают их.[3][4]

Выбор отрицательного пятна в электронная микроскопия может быть очень важным. Раннее исследование вирусов растений с использованием отрицательно окрашенных листьев больного растения показало только сферические вирусы с одним пятном и только палочковидные вирусы с другим. Подтвержденный вывод заключался в том, что это растение страдало от смешанной инфекции двумя отдельными вирусами. Отрицательное окрашивание как на уровне светового микроскопа, так и на уровне электронного микроскопа нельзя проводить с заразный микроорганизмов, если не соблюдаются строгие меры безопасности. Отрицательное окрашивание обычно является очень мягким методом подготовки и, следовательно, не снижает вероятность заражения оператора.

Другие приложения

Идентификация пластинчатый (ле), обратный-мицеллер (М) и обратный-шестиугольник Цилиндры H-II (H) липид фазы при отрицательном окрашивании.

Просвечивающая электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием также успешно применялась для изучения и идентификации водных липидных агрегатов, таких как пластинчатый липосомы (ле), перевернутая сферическая мицеллы (M) и перевернутый шестиугольник HII цилиндрические (H) фазы (см. Рисунок).[5]

Рекомендации

  1. ^ Woeste, S; Демчик, П. (1991). «Новая версия негативного пятна». Прикладная и экологическая микробиология. Американское общество микробиологии. 57 (6): 1858–1859. Дои:10.1128 / aem.57.6.1858-1859.1991. ISSN  0099-2240. ЧВК  183484. PMID  1714705.
  2. ^ Д. Чедвик (2002). Роль саркоплазматического ретикулума в гладких мышцах. Джон Уайли и сыновья. стр.259–264. ISBN  0-470-84479-5.
  3. ^ Боццола, Джон Дж .; Рассел, Лонни Д. (1999). «Подготовка образцов для просвечивающей электронной микроскопии». Электронная микроскопия: принципы и методы для биологов. Садбери, штат Массачусетс: Джонс и Бартлетт. С. 21–31. ISBN  978-0-7637-0192-5.
  4. ^ М. А. Хаят (2000). Принципы и методы электронной микроскопии: биологические приложения. Издательство Кембриджского университета. С. 45–61. ISBN  0-521-63287-0.
  5. ^ Яшрой, Р. С. (1990). «Ламеллярная дисперсия и фазовое разделение липидов хлоропластных мембран с помощью электронной микроскопии с отрицательным окрашиванием». Журнал биологических наук. ООО "Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа". 15 (2): 93–98. Дои:10.1007 / bf02703373. ISSN  0250-5991. S2CID  39712301.

внешняя ссылка

Библиотечные ресурсы о
Отрицательное окрашивание