Nucleofection - Nucleofection

Nucleofection является электропорация -основан трансфекция метод, позволяющий передавать нуклеиновые кислоты Такие как ДНК и РНК в клетки приложив определенное напряжение и реагенты. Нуклеофекция, также называемая нуклеофекторная технология, была изобретена биотехнологической компанией Amaxa. «Нуклеофектор» и «нуклеофекция» - это товарные знаки принадлежит Lonza Cologne AG, входящей в Lonza Group.

Приложения

Нуклеофекция - это метод переноса субстратов в клетки млекопитающих до сих пор считалось трудным или даже невозможным для трансфекции. Примерами таких субстратов являются нуклеиновые кислоты, такие как ДНК изолированного ген клонированный в плазмида, или же малая интерферирующая РНК (миРНК) для подавления экспрессии специфических эндогенный ген.

Первичные клетки, например стволовые клетки, особенно попадают в эту категорию, хотя многие другие Сотовые линии также трудно трансфицировать. Первичные клетки свежевыделены от ткани тела и, таким образом, клетки остаются неизменными, очень похожими на in vivo ситуации, и поэтому имеют особое значение для медицинские исследования целей. Напротив, клеточные линии часто культивировались десятилетиями и могут значительно отличаться от своего происхождения.

Механизм

На основе физического метода электропорация, нуклеофекция использует комбинацию электрических параметров, генерируемых устройством под названием Nucleofector, с реагентами, специфичными для клеточного типа. Субстрат переносится прямо в ядро клетки и цитоплазма. Напротив, другие широко используемые методы невирусной трансфекции полагаются на деление клеток для переноса ДНК в ядро. Таким образом, нуклеофекция дает возможность трансфицировать даже неделящиеся клетки, такие как нейрон и отдыхает кровяные клетки. До внедрения технологии Nucleofector, эффективная передача гена в первичные клетки были ограничены использованием вирусные векторы, которые обычно имеют недостатки, такие как риски для безопасности, недостаточная надежность и высокая стоимость. Доступные методы невирусного переноса генов не подходили для эффективной трансфекции первичных клеток. Невирусные методы доставки могут потребовать деления клетки для завершения трансфекции, поскольку ДНК входит в ядро ​​во время разрушения ядерная оболочка на деление клеток или определенной последовательностью локализации. Оптимальные условия нуклеофекции зависят от человека. тип ячейки, а не на трансфицируемом субстрате. Это означает, что идентичные условия используются для нуклеофекции ДНК, РНК, миРНК, shRNA, мРНК и пре-мРНК, БАК, пептиды, морфолино, PNA, или другие биологически активные молекулы.

Смотрите также

Рекомендации

  • Керима Маашо, Алина Марусина, Николь М. Рейнольдс, Джон Э. Колиган и Франсиско Боррего (январь 2004 г.). «Эффективный перенос генов в линию естественных киллеров человека, NKL, с использованием системы нуклеофекции амакса». Журнал иммунологических методов. 284 (1–2): 133–140. Дои:10.1016 / j.jim.2003.10.010. PMID  14736423.CS1 maint: использует параметр авторов (связь)
  • Паскаль Г. Леклер, Ализа Панджвани, Реджинальд Дочерти, Мартин Берри, Джон Пицзи и Дэвид А. Тонг (15 марта 2005 г.). «Эффективная доставка генов к взрослым нейронам с помощью модифицированной формы электропорации». Журнал методов неврологии. 142 (1): 137–143. Дои:10.1016 / j.jneumeth.2004.08.012. PMID  15652627.CS1 maint: использует параметр авторов (связь)
  • Микела Алуиджи, Мириам Фогли, Антонио Курти, Алессандро Исидори, Элиза Группиони, Клаудиа Чиодони, Марио П. Коломбо, Пьера Версура, Антония д’Эррико-Григиони, Элиза Ферри, Микеле Баккарани и Роберто М. Лемоли (февраль 2006 г.). «Нуклеофекция - это эффективный метод невирусной трансфекции мезенхимальных стволовых клеток, полученных из костного мозга человека». Стволовые клетки. 24 (2): 454–461. Дои:10.1634 / стволовые клетки.2005-0198. PMID  16099993.CS1 maint: использует параметр авторов (связь)