Извлекаемый ядерный антиген - Extractable nuclear antigen

Извлекаемые ядерные антигены (ENA) более 100 различных растворимых цитоплазматических и ядерных антигены. Они известны как «извлекаемые», потому что их можно удалить из ядра клеток с использованием физиологического раствора и представляют шесть основных белков: Ro, La, Sm, RNP, Scl-70, Jo1. Большинство ENA являются частью сплайсосомы или же нуклеосомы комплексы и являются разновидностью малый ядерный рибонуклеопротеин (snRNPS). Расположение в ядре и ассоциация со сплайсосомами или нуклеосомами приводит к тому, что эти ENA связаны с дополнительной РНК и белками, такими как полимеразы. Это качество ENA часто затрудняет очистку и количественную оценку их наличия для клинического использования.[1]

Клинические применения

An панель извлекаемых ядерных антигенов, или панель ENA, проверяет наличие в крови аутоантител, которые реагируют с белками в ядре клетки. Обычно делается в качестве наблюдения за положительными антинуклеарными антителами (АНА ), и у одного проявляются симптомы аутоиммунное заболевание. ANA проверяет наличие или отсутствие аутоантител, в то время как панель ENA оценивает, какие белки в ядре клетки распознают аутоантитела. Панель ENA помогает диагностировать, различать и отслеживать прогрессирование аутоиммунных заболеваний и выполняется с помощью простого анализа крови. Хотя уровни аутоантител могут колебаться в течение всей жизни, как только вы разовьете аутоантитела, они будут у вас всегда. Аутоантитела к этим антигенам связаны с определенными заболеваниями соединительной ткани. Действительно, в 84,3% положительных образцов анти-ENA также были обнаружены реагенты ANA.[1] Использование тестов на аутоантитела против ENA может служить дополнительной проверкой аутоиммунного расстройства, поскольку одного положительного теста на ANA недостаточно для диагностики. Фактически, низкие уровни ANA могут быть обнаружены у здоровых пациентов. Применение тестирования на анти-ENA варьируется от исключения групп пациентов из определенных групп, заболеваний соединительной ткани, до мониторинга активности заболевания. По сути, это позволяет клиницистам исключить конкретные аутоиммунные нарушения, если конкретное аутоантитело отсутствует, и позволяет клиницистам отслеживать прогрессирование заболевания, если уровни этих аутоантител увеличиваются или уменьшаются. Чтобы подтвердить наличие анти-ENA, в настоящее время рекомендуется использовать два или более метода для подтверждения анти-ENA, чтобы избежать ложных срабатываний. Диагноз аутоиммунный заболевания соединительной ткани (CTD) осуществляется путем анализа клинических симптомов и признаков, а также путем идентификации аутоантител, направленных против ядерных антигенов. В документе 2002 года также делается попытка сравнить диагностические тесты, используемые в иммунологических лабораториях для измерения анти-ENA, и способы улучшения этого тестирования и отчетности. Двойная иммунодиффузия (DID) и контриммуноэлектрофорез (CIEP), две формы гелевые техники, используются для получения информации о клинической значимости и роли этих антител у пациентов с CTD.[2]

Методы

На гелевой основе

С момента открытия ENA они использовались в качестве диагностического инструмента при заболеваниях соединительной ткани. Два широко используемых гелевых метода были использованы для выявления анти-ENA и их связи с заболеванием на ранних этапах работы, двойная иммунодиффузия (DID). [1] и противоиммуноэлектрофорез (CIEP). Оба эти метода требуют осаждения антигенов для получения достоверных результатов. В зависимости от исследуемой anit-ENA один метод может использоваться вместо другого. Например, антиген Scl-70 заряжен менее отрицательно, что может привести к тому, что антиген перемещается в том же направлении, что и антитело. Это привело бы к тому, что комплекс антитело-антиген не преципитировал; приводит к недействительным результатам.[3] Кроме того, некоторые антитела против SS-B, обычно идентифицируемые в Синдром Шегрена не могут быть обнаружены этим методом. Однако этот метод экономически целесообразен и специфичен для подтверждения диагноза. При просмотре данных этих гелевых методик следует учитывать две чувствительности: чувствительность анализа и чувствительность к заболеванию. Чувствительность анализа - это способность распознавать присутствие антитела, а чувствительность к заболеванию - это способность распознавать частоту появления антител при заболевании. Из-за ограничений чувствительности к заболеванию гелевых методов были изучены другие методы, чтобы повысить чувствительность анализа без снижения чувствительности к заболеванию. Например, у пациентов с Системная красная волчанка (SLE), только 8-40% обнаруживают антитела к SM при использовании анализов на основе геля. Было показано, что CIEP более чувствителен, чем DID.[4]

Гемагглютинация, ELISA, Вестерн-блоттинг

Три дополнительных метода, пассивная гемагглютинация, твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и вестерн-блоттинг (WB), могут использоваться для идентификации ENA и связывания их с конкретными заболеваниями. Пассивный гемагглютинация был популярен в конце 1970-х годов, но с их использованием было проведено очень мало исследований, и они ограничивались антителами против Sm и рибонуклеарного белка (RNP).[4] Иммуноферментный анализ (ELISA) стал наиболее широко используемым методом тестирования на анти-ENA благодаря простоте выполнения, количественной оценке и большому объему вывода. Хотя этот метод имеет повышенную чувствительность анализа и эффективен для больших лабораторий, он имеет гораздо более низкую специфичность к заболеванию, чем альтернативные методы. Это связано с невозможностью должным образом изолировать ENA без больших затрат из-за их ассоциации с комплексами в ядре клетки. Еще одна проблема, связанная с методом ELISA, заключается в том, что у пациентов без СКВ были обнаружены антитела против Sm, что привело бы к чрезмерному исследованию, но могло быть связано с качеством используемого источника антигена.[4] Вестерн-блоттинг имеет главный недостаток в том, что антитела, нацеленные против конформационных эпитопов, не могут быть обнаружены. Вдобавок ко всему могут возникать ложноположительные результаты, а специфичность заболевания ниже, чем у других методов. Хотя каждый метод имеет свои преимущества и недостатки, ELISA имеет наименее серьезные недостатки, связанные с возможностью ложноположительных результатов (которые менее опасны, чем ложноотрицательные результаты), и дороговизна.[4]

Многие лаборатории используют комбинацию обоих этих методов для повышения эффективности без ущерба для специфичности. В настоящее время семинары Европейского консенсуса рекомендуют проводить скрининг на наличие положительных анти-ENA с помощью метода ELISA. За этим последует более конкретный тест, такой как CIEP, с образцами, которые определены как положительные.[5]

Шесть основных антигенов, используемых в иммунологических лабораториях для обнаружения: Ro, Ла, См, RNP, Scl-70 и Jo1,[6] которые проверены Двойная иммуно-диффузия Оухтерлони техники и подтверждено иммуноблоттинг. На антиядерное антитело тесты, эти антигены имеют пестрый узор.[7]

Терминология

Первоначально ENA относились к белкам, содержащимся в солевом экстракте ядра клеток.[8] С тех пор компоненты были идентифицированы более четко и фактически включают множество цитоплазматических молекул. Однако неправильное название осталось. Эти белки тесно связаны с различными молекулами РНК и поэтому называются Рибонуклеопротеины, но используемая для них номенклатура часто является источником путаницы, Sm, Ro и La были названы в честь первых двух букв фамилий пациентов, у которых они были впервые обнаружены. Два белка, связанные с Синдром Шегрена были независимо описаны как антигены A и B, но теперь известно, что они идентичны Ro и La соответственно. т.е. SS-A = Ro и SS-B = La.

Панельные тесты ENA (экстрагируемый ядерный антиген), тест на аутоантитела к белкам в ядре клетки. Термин «экстрагируемый» происходит от способности удалять аутоантитела из ядер с помощью физиологического раствора и обычных белков. Метод идентификации этих образцов является причиной того, что их также называют антителами к антигенам, экстрагированным физиологическим раствором.[8]

ENA

Anti-ENA - это группа антител, часто используемая для скрининга на смешанное заболевание соединительной ткани (MCTD), Синдром Шегрена и системная красная волчанка и обычно состоит из шести тестов:[9]

  • анти-Sm (для СКВ)
  • анти-RNP (для MCTD)
  • анти-Ла / анти-СС-Б (для Sjögren's)
  • анти-Ro / анти-SS-A (для Sjögren's)
  • anti-Scl70 (от склеродермии)
  • анти-Джо (от дерматомиозита)

Чувствительность и специфичность этих тестов зависит от типа используемого анализа и, следовательно, зависит от лаборатории. В следующей таблице показана чувствительность и специфичность антител ENA при обнаружении СКВ с помощью метода ELISA.

Антитело (проверено с помощью ELISA)Чувствительность (%) для СКВСпецифичность (%) для СКВ
Анти-Ро (SS-A)6180-93
Анти-Ла (СС-Б)27-3588-97
Анти-См34-4588-100
Анти-РНП39-6484-97
Ссылка для всех значений:[10]

Кроме того, тестирование ENA также использовалось для изучения заболеваний, связанных с пшеницей, таких как глютеновая болезнь. В исследовании, проведенном в 2018 году, был проведен скрининг пациентов с заболеваниями, связанными с пшеницей, на наличие 10 антител против ENA.

  • SSA (Ro)
  • SSB (Ла)
  • RNP / Sm
  • Jo-1
  • См
  • Scl-70
  • Хроматин
  • Центромера
  • Гистон
  • РНК-полимераза III

73% пациентов с целиакией дали положительный результат на антигистоновые препараты и были наиболее распространенными, что обычно связано с Лекарственная красная волчанка. Это означает высокую вероятность аутоиммунного заболевания у пациентов с заболеваниями, связанными с пшеницей.[11]

Рекомендации

  1. ^ а б Банхук, Фернанда Вейанд; Пахим, Бруна Корреа; Хорхе, Алекс Сандро; Менолли, Рафаэль Андраде (30 сентября 2018 г.). «Взаимосвязь между антителами против экстрагируемых ядерных антигенов, антинуклеарных антител и аутоиммунных заболеваний в государственной больнице Бразилии». Аутоиммунные заболевания. 2018: 1–8. Дои:10.1155/2018/9856910. ЧВК  6186355. PMID  30364021.
  2. ^ Фан, Три Джанг; Вонг, Ричард С. В .; Адельштейн, Стивен (2002). «Аутоантитела к экстрагируемым ядерным антигенам: повышение значимости обнаружения и интерпретации». Клинико-диагностическая лаборатория иммунологии. 9 (1): 1–7. Дои:10.1128 / CDLI.9.1.1-7.2002. ЧВК  119916. PMID  11777822.
  3. ^ Bunn, C .; Кведер, Т. (1996). «Противоиммуноэлектрофорез и иммунодиффузия для обнаружения антител к растворимым клеточным антигенам». In van Venrooij, W. J .; Майни, Р. Н. (ред.). Руководство по биологическим маркерам болезней. Springer Нидерланды. С. 25–36. Дои:10.1007/978-94-011-1670-1_3. ISBN  978-94-011-1670-1.
  4. ^ а б c d Замок, RJ; Ансуорт, ди-джей (март 2001 г.). «Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам. Повлиял ли технологический сдвиг на клиническую интерпретацию?». Журнал клинической патологии. 54 (3): 187–90. Дои:10.1136 / jcp.54.3.187. ЧВК  1731369. PMID  11253128.
  5. ^ Yiannaki, E E; Tzioufas, A G; Бахманн, М; Хантуми, Дж; Цикарис, В; Sakarellos-Daitsiotis, M; Сакареллос, К; Мутсопулос, Н. М. (1998). «Значение синтетических аналогов линейных эпитопов La / SSB для обнаружения аутоантител к La / SSB; специфичность, чувствительность и сравнение методов». Клиническая и экспериментальная иммунология. 112 (1): 152–158. Дои:10.1046 / j.1365-2249.1998.00558.x. ЧВК  1904932. PMID  9566804.
  6. ^ Принц, HE; Хогрефе, WR (1998). «Оценка линейного иммуноблоттинга для обнаружения антител, распознающих экстрагируемые ядерные антигены». Журнал клинических лабораторных анализов. 12 (5): 320–4. Дои:10.1002 / (sici) 1098-2825 (1998) 12: 5 <320 :: aid-jcla13> 3.0.co; 2-x. ЧВК  6807698. PMID  9773966.
  7. ^ «Иммунопатология».
  8. ^ а б «Панель извлекаемых антител к ядерным антигенам (ENA)». Лабораторные тесты онлайн. 21 июня 2018 г. Архивировано с оригинал 20 декабря 2018 г.. Получено 10 апреля, 2019.
  9. ^ Лист продукта теста ENA (QUANTA Lite). inovadx.com. URL: http://www.inovadx.com/Products/di_pdfs/708555/628555rEnglish.pdf ENA[постоянная мертвая ссылка ]. Доступ: 5 ноября 2007 г.
  10. ^ Замок, R; Ансуорт, Д. (2001). «Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам. Повлиял ли технологический сдвиг на клиническую интерпретацию?». Журнал клинической патологии. 54 (3): 187–190. Дои:10.1136 / jcp.54.3.187. ЧВК  1731369. PMID  11253128.
  11. ^ Ян, Юаньюань; Кришна, Картик; Дешпанде, Паял; Ранганатан, Винодх; Джаяраман, Васантх; Ван, Тяньхао; Бэй, Канг; Кришнамурти, Хари (18 июня 2018 г.). «Высокая частота экстрагируемых ядерных аутоантител при заболеваниях, связанных с пшеницей». Биомаркеры. 13. Дои:10.1177/1177271918782893. ЧВК  6024268. PMID  29977112.

внешняя ссылка