Выбираемый маркер - Selectable marker

А выбираемый маркер это ген введен в клетка, особенно бактерия или в ячейки в культура, который дает черту, подходящую для искусственный отбор. Они являются разновидностью репортерный ген используется в лаборатории микробиология, молекулярная биология, и генная инженерия чтобы указать на успех трансфекция или другая процедура, направленная на введение иностранного ДНК в камеру. Выбираемые маркеры часто устойчивость к антибиотикам гены (Маркер устойчивости к антибиотикам - это ген, который продуцирует белок, который придает клеткам, экспрессирующим этот белок, устойчивость к антибиотику.). Бактерии, которые были подвергнуты процедуре введения чужеродной ДНК, выращиваются на среде, содержащей антибиотик, а те бактериальные колонии которые могут расти, успешно освоены и выразил введенный генетический материал. Обычно гены, кодирующие устойчивость к антибиотикам, таким как ампициллин, хлорамфеникол, тетрациклин или канамицин и т. д. считаются полезными селектируемыми маркерами для Кишечная палочка.

Операнды метода

Нерекомбинанты отделяются от рекомбинантов; т.е. р-ДНК вводится в бактерии некоторые бактерии успешно трансформируются, некоторые остаются нетрансформированными. При выращивании на среде, содержащей ампициллин бактерии погибают из-за отсутствия устойчивости к ампициллину. Позже положение отмечается на нитроцеллюлозной бумаге и разделяется, чтобы переместить их в питательную среду для массового производства требуемого продукта. Альтернативой селектируемому маркеру является проверяемый маркер, который также может быть обозначен как репортерный ген, что позволяет исследователю различать желаемые и нежелательные клетки, например между синими и белыми колониями. Эти желаемые или нежелательные клетки представляют собой просто нетрансформированные клетки, которые не смогли принять ген во время эксперимента.

Положительный и отрицательный

Для молекулярно-биологических исследований могут использоваться различные типы маркеров на основе искомого выбора. К ним относятся:

  • Положительный или маркеры селекции представляют собой селективные маркеры, которые придают селективное преимущество организму-хозяину.[1] Примером может служить устойчивость к антибиотикам, которая позволяет организму-хозяину выжить при выборе антибиотика.
  • Отрицательный или контрселективные маркеры представляют собой селектируемые маркеры, которые устраняют или ингибируют рост организма-хозяина при селекции.[2] Примером может быть тимидинкиназа, что делает хост чувствительным к ганцикловир выбор.[нужна цитата ]
  • Положительный и отрицательный селектируемые маркеры могут служить как положительным, так и отрицательным маркером, давая преимущество хозяину при одном условии, но подавляя рост при других условиях. Примером может служить фермент, который может дополнять ауксотрофия (положительный отбор) и уметь превращать химическое вещество в токсичное соединение (отрицательный отбор).[нужна цитата ]

Общие примеры

Примеры выбираемых маркеров включают:

  • Бета-лактамаза что дает ампициллин устойчивость к бактериальным хозяевам.
  • Ген Neo из Tn5, придающий устойчивость к канамицин в бактериях и генетицин в эукариотических клетках[3]
  • Мутантный ген FabI (mFabI) ​​из Кишечная палочка геном, который придает триклозан сопротивление хозяину.[4]
  • URA3, оротидин-5 'фосфатдекарбоксилаза из дрожжей является положительным и отрицательным селективным маркером. Он необходим для биосинтеза урацила и может дополнять ura3 ауксотрофные по урацилу мутанты (положительный отбор). Фермент URA3 также преобразует 5-фтороротовая кислота (5FOA) в токсичное соединение 5-фторурацил, поэтому любые клетки, несущие URA3 ген будет убит в присутствии 5FOA (отрицательный отбор).[5]

Рекомендации

  1. ^ "положительный отбор". Scitable. Природа. Получено 29 сентября 2011.
  2. ^ «отрицательный отбор». Scitable. Природа. Получено 29 сентября 2011.
  3. ^ Callmigration.org: нацеливание на гены
  4. ^ Чан, Чуань-Вэй; Магнусон, Терри (20 февраля 2013 г.). «Новый маркер селекции для эффективного клонирования и рекомбинации ДНК в E. coli». PLOS ONE. 8 (2): e57075. Bibcode:2013PLoSO ... 857075J. Дои:10.1371 / journal.pone.0057075. ЧВК  3577784. PMID  23437314.
  5. ^ Boeke JD; LaCroute F; Финк Г.Р. (1984). «Положительный отбор по мутантам, лишенным активности оротидин-5'-фосфатдекарбоксилазы в дрожжах: устойчивость к 5-фтороротовой кислоте». Мол. Генерал Жене. 197 (2): 345–6. Дои:10.1007 / bf00330984. PMID  6394957. S2CID  28881589.