Вложенная полимеразная цепная реакция - Nested polymerase chain reaction

Схема, иллюстрирующая метод вложенной ПЦР.

Вложенная полимеразная цепная реакция (Вложенная ПЦР) является модификацией полимеразной цепной реакции предназначен для уменьшения неспецифического связывания в продуктах из-за амплификации неожиданных сайтов связывания праймеров.[1]

Полимеразной цепной реакции

Полимеразной цепной реакции сам по себе - процесс, используемый для усиления ДНК образцы с помощью температурно-опосредованного ДНК-полимераза. Продукты можно использовать для последовательность действий или анализ, и этот процесс является ключевой частью многих генетика исследовательских лабораторий, а также Дактилоскопия ДНК за криминалистика и другие генетические случаи человека. Обычная ПЦР требует грунтовки комплементарен концам целевой ДНК. Количество продукта ПЦР увеличивается с количеством температурных циклов, которым подвергается реакция. Часто встречающаяся проблема - связывание праймеров с неправильными участками ДНК, приводящее к неожиданным продуктам. Эта проблема становится более вероятной при увеличении количества циклов ПЦР.

Грунтовки

Вложенная полимеразная цепная реакция включает два набора праймеров, используемых в двух последовательных прогонах полимеразной цепной реакции, второй набор предназначен для амплификации вторичной мишени в продукте первого прогона. Это позволяет амплифицировать небольшое количество прогонов в первом цикле, ограничивая неспецифические продукты. Второй набор вложенных праймеров должен амплифицировать только целевой продукт из первого раунда амплификации, а не неспецифический продукт. Это позволяет выполнять больше полных циклов при минимальном количестве неспецифических продуктов. Это полезно для редких шаблонов или ПЦР с высоким уровнем фона.

Процессы

Целевая ДНК подвергается первому запуску полимеразной цепной реакции с первым набором праймеров, показанных зеленым. Выбор альтернативных и подобных сайтов связывания праймеров дает выбор продуктов, только один из которых содержит заданную последовательность.

Продукт из первой реакции подвергается второму прогону со вторым набором праймеров, показанным красным. Очень маловероятно, что какой-либо из нежелательных продуктов ПЦР содержит сайты связывания для обоих новых праймеров, что гарантирует, что продукт второй ПЦР имеет небольшое загрязнение нежелательными продуктами димеров праймеров, шпилек и альтернативных последовательностей-мишеней праймеров.

Рекомендации

  1. ^ Элизабет ван Пелт-Веркуил; Алекс ван Белкум; Джон П. Хейс (14 марта 2008 г.). Принципы и технические аспекты амплификации ПЦР. Springer Science & Business Media. С. 190–. ISBN  978-1-4020-6241-4.