H&E пятно - H&E stain

Сетчатка (часть глаз ) окрашены гематоксилин и эозин ядра клеток окрашены в сине-фиолетовый цвет, а внеклеточный материал - в розовый.

Окраска гематоксилином и эозином или окраска гематоксилином и эозином (часто сокращенно: H&E пятно или ОН пятно) является одной из основных тканей пятна используется в гистология.[1][2][3] Это наиболее широко используемое пятно в медицинский диагноз[1] и часто Золотой стандарт.[4] Например, когда патолог смотрит на биопсия подозреваемого рак, то гистологический срез может быть окрашен H&E.

H&E представляет собой комбинацию двух гистологических красителей: гематоксилин и эозин. Гематоксилин окрашивает клетку ядра синий, а эозин окрашивает внеклеточный матрикс и цитоплазма розовый, с другими структурами, принимающими разные оттенки, оттенки и комбинации этих цветов.[5][6] Пятно показывает общее расположение и распределение клеток и дает общее представление о структуре образца ткани.[7]Следовательно, патолог может легко различить ядерную и цитоплазматическую части клетки.

Эта комбинация красителей была впервые представлена ​​в 1876 году А. Виссовским.[8][7]

Использует

Процедура окрашивания H&E является основным окрашиванием в гистологии.[3][7][2][5] отчасти потому, что это можно сделать быстро,[7] стоит недорого и окрашивает ткани таким образом, что значительное количество микроскопическая анатомия[9][10] раскрывается,[7][5][4] и может использоваться для диагностики широкого спектра гистопатологический условия.[8] Результаты окрашивания H&E не сильно зависят от химического вещества, используемого для исправить ткань или незначительные несоответствия в лабораторном протоколе,[11] и эти факторы способствуют его рутинному использованию в гистологии.[7]

Окрашивание H&E не всегда обеспечивает достаточный контраст, чтобы различить все ткани, клеточные структуры или распределение химических веществ.[9] и в этих случаях используются более специфические пятна и методы.[10][7]

Способ применения

Основные статьи: Гистология § Подготовка образцов, и Гематоксилин
Стойку слайдов удаляют из ванны с пятном гематоксилина.

Есть много способов приготовления растворов (рецептур) гематоксилина, используемых в процедуре H&E,[11][12][6] кроме того, есть много лабораторные протоколы для изготовления слайдов, окрашенных H&E,[9] некоторые из них могут быть специфичными для определенной лаборатории.[7] Хотя стандартной процедуры нет,[11][9] результаты условно согласуются с тем, что ядра клеток окрашены в синий цвет, а цитоплазма и внеклеточный матрикс окрашены в розовый цвет.[7] Гистологические лаборатории также могут скорректировать количество или тип окрашивания для конкретного патолога.[7]

После сбора тканей (часто биопсия ) и фиксированные, они обычно обезвоживаются и погружаются в расплавленный парафиновая свеча, получившийся блок устанавливается на микротом и нарезать тонкими ломтиками.[6] Срезы прикрепляют к предметным стеклам микроскопа, после чего воск удаляют растворителем, а срезы ткани, прикрепленные к предметным стеклам, повторно гидратируются и готовы к окрашиванию.[6] Кроме того, пятно H&E является наиболее часто используемым пятном в Хирургия Мооса в котором ткани обычно заморожены, разрезаны на криостат (микротом, который разрезает замороженные ткани), фиксируется спиртом, а затем окрашивается.[9]

Метод окрашивания H&E предполагает нанесение гематоксилин смешанный с металлической солью, или едкий, часто с последующим ополаскиванием слабым раствором кислоты, чтобы удалить лишнее окрашивание (дифференциация), с последующим воронение мягко говоря щелочной воды.[13][8][14] После применения гематоксилина ткань контрастный с эозином (чаще всего эозин Y ).[6][8][7]

Результаты

Гематоксилин в основном окрашивает ядра из клетки синий или темно-фиолетовый,[6][15][14] наряду с некоторыми другими тканями, такими как кератогиалин гранулы и кальцинированный материал. Эозин окрашивает цитоплазма и некоторые другие структуры, включая внеклеточный матрикс такие как коллаген[5][7][14] до пяти оттенков розового.[8] В эозинофильный (вещества, окрашенные эозином)[5] структуры обычно состоят из внутриклеточных или внеклеточных белки. В Тела Леви и Тела Мэллори являются примерами эозинофильных структур. Большинство из цитоплазма эозинофильный и становится розовым.[10][15] красные кровяные клетки окрашены в интенсивный красный цвет.

Способ действия

Несмотря на то что гематин, окисленный форма гематоксилина,[5][16][14] является активным красителем (в сочетании с протравой), пятно все еще называют гематоксилин.[8][13] Гематоксилин в сочетании с протравой (чаще всего алюминий квасцы ) часто считается "похожим"[10] базовый, положительно заряженный или катионный пятно.[5] Эозин - это анионный (отрицательно заряженный) и кислотное пятно.[5][10] Окрашивание ядер гемалум (комбинация ионов алюминия и гематеина)[14] обычно происходит из-за связывания комплекса краситель-металл с ДНК, но ядерное окрашивание может быть получено после экстракции ДНК.[14] из срезов тканей. Механизм отличается от механизма окрашивания ядер основными (катионными) красителями, такими как тионин или толуидиновый синий.[10] Окрашивание основными красителями происходит только из менее кислых, чем гемалум растворов, и предотвращается путем предварительной химической или ферментативной экстракции нуклеиновых кислот. Имеются данные, указывающие на то, что координационные связи, подобные тем, которые связывают алюминий и гематеин вместе, связывают гемалум-комплекс с ДНК и карбоксильными группами белков в ядерном ядре. хроматин.

Структуры не обязательно должны быть кислотными или основными, чтобы их можно было назвать базофильными или эозинофильными; терминология основана на сродстве клеточных компонентов к красителям. Другие цвета, например желтый и коричневый, могут присутствовать в пробе; они вызваны внутренними пигментами, такими как меланин. Базальные пластинки нужно окрасить PAS пятно или несколько серебряные пятна, если они должны быть хорошо видны. Ретикулярные волокна также требуется морилка. Гидрофобные структуры также имеют тенденцию оставаться прозрачными; они обычно богаты жирами, например адипоциты, миелин вокруг нейрона аксоны, и аппарат Гольджи мембраны.

Примеры тканей, окрашенных H&E

  • Хрящ, ядра клеток (сине-фиолетовый), внеклеточный материал (розовый).

  • Протоковая карцинома in situ (DCIS) в ткани груди, ядрах клеток (сине-фиолетовый), внеклеточном материале (розовый).

  • Легочная ткань взято из эмфизема терпеливый. Ядра клеток (сине-пурпурный), красные кровяные тельца (ярко-красный), другие тела клеток и внеклеточный материал (розовый) и воздушные пространства (белый).

  • Мышечная ткань, ядра клеток (сине-фиолетовый), внеклеточный материал (розовый).

  • Базально-клеточная карцинома из кожа, ядра клеток (сине-фиолетовый), внеклеточный материал (розовый).

использованная литература

  1. ^ а б Титфорд, М. (2005). «Долгая история гематоксилина». Биотехника и гистохимия. 80 (2): 73–80. Дои:10.1080/10520290500138372. PMID  16195172.
  2. ^ а б Смит C (2006). «Наш долг перед бревенчатым деревом: история гематоксилина». MLO Med Lab Obs. 38 (5): 18, 20–2. PMID  16761865.
  3. ^ а б Дапсон Р.В., Горобин Р.В. (2009). «Красители с точки зрения двадцать первого века». Биотехнология Histochem. 84 (4): 135–7. Дои:10.1080/10520290902908802. PMID  19384743.
  4. ^ а б Росай Дж (2007). «Почему микроскопия останется краеугольным камнем хирургической патологии». Lab Invest. 87 (5): 403–8. Дои:10.1038 / labinvest.3700551. PMID  17401434.
  5. ^ а б c d е ж г час Чан Дж. К. (2014). «Прекрасные цвета красителя гематоксилин-эозин в диагностической хирургической патологии». Int J Surg Pathol. 22 (1): 12–32. Дои:10.1177/1066896913517939. PMID  24406626.
  6. ^ а б c d е ж Стивенс, Алан (1982). «Гематоксилины». В Бэнкрофте, Джон; Стивенс, Алан (ред.). Теория и практика гистологических методов (2-е изд.). Longman Group Limited. п. 109.
  7. ^ а б c d е ж г час я j k л Виттекинд Д (2003). «Традиционное окрашивание для рутинной диагностики патологии, включая роль дубильной кислоты. 1. Значение и ограничения окрашивания гематоксилин-эозином». Биотехнология Histochem. 78 (5): 261–70. Дои:10.1080/10520290310001633725. PMID  14989644.
  8. ^ а б c d е ж Титфорд, Майкл (2009). «Прогресс в развитии микроскопических методов диагностики патологии». Журнал гистотехнологии. 32 (1): 9–19. Дои:10.1179 / his.2009.32.1.9. ISSN  0147-8885.
  9. ^ а б c d е Ларсон К., Хо ХХ, Анумолу П.Л., Чен TM (2011). «Окрашивание тканей гематоксилином и эозином в микрографической хирургии Мооса: обзор». Дерматол Сург. 37 (8): 1089–99. Дои:10.1111 / j.1524-4725.2011.02051.x. PMID  21635628.CS1 maint: несколько имен: список авторов (ссылка на сайт)
  10. ^ а б c d е ж Росс, Майкл Х .; Павлина, Войцех (2016). Гистология: текст и атлас: взаимосвязанная клеточная и молекулярная биология (7-е изд.). Wolters Kluwer. С. 984 с. ISBN  978-1451187427.
  11. ^ а б c Шульте EK (1991). «Стандартизация биологических красителей и красителей: подводные камни и возможности». Гистохимия. 95 (4): 319–28. PMID  1708749.
  12. ^ Ллевеллин Б.Д. (2009). «Окрашивание ядер гематоксилином квасцов». Биотехнология Histochem. 84 (4): 159–77. Дои:10.1080/10520290903052899. PMID  19579146.
  13. ^ а б Ортис-Идальго C, Пина-Овьедо S (2019). «Гематоксилин: дар Мезоамерики гистопатологии. Пало де Кампече (бревенчатое дерево), самое желанное сокровище пиратов и незаменимое пятно на тканях». Int J Surg Pathol. 27 (1): 4–14. Дои:10.1177/1066896918787652. PMID  30001639.
  14. ^ а б c d е ж Кирнан Дж. А. (2018). «Включает ли прогрессирующее окрашивание ядер гемалом (гематоксилином квасцов) ДНК, и какова природа комплекса краситель-хроматин?». Биотехнология Histochem. 93 (2): 133–148. Дои:10.1080/10520295.2017.1399466. PMID  29320873.
  15. ^ а б Leeson, Thomas S .; Лисон, К. Роланд (1981). Гистология (Четвертое изд.). Компания W. B. Saunders. п. 600. ISBN  978-0721657042.
  16. ^ Кар, Барт; Ловелл, Скотт; Субрамони, Ананд (1998). «Прогресс экстракции бревен». Хиральность. 10 (1–2): 66–77. Дои:10.1002 / chir.12.

дальнейшее чтение

  • Кирнан Дж. А. (2008) Гистологические и гистохимические методы: теория и практика. 4-е изд. Блоксхэм, Великобритания: Scion.
  • Lillie RD, Pizzolato P, Donaldson PT (1976) Окрашивание ядер растворимыми метахромными протравными красителями. Эффект от реакций блокировки химических концевых групп и искусственного введения кислотных групп в ткани. Гистохимия 49: 23–35.
  • Llewellyn BD (2009) Окрашивание ядер квасцами-гематоксилином. Биотехнология. Histochem. 84: 159–177.
  • Пухтлер Х., Мелоан С.Н., Уолдроп Ф.С. (1986) Применение современных химических концепций к окрашиванию металлическим гематеином и -бразилеином. Гистохимия 85: 353–364.

внешние ссылки

Протокол