Преимплантационная генетическая диагностика - Preimplantation genetic diagnosis

Предимплантационная генетическая диагностика (PGD или же PIGD) это генетический профилирование эмбрионы до имплантация (как форма профилирование эмбриона ),^[1] а иногда даже ооциты до оплодотворение. ПГД рассматривается аналогично пренатальная диагностика. При использовании для проверки определенного генетическое заболевание, его главным преимуществом является то, что он позволяет избежать выборочного аборт, поскольку этот метод с большой вероятностью избавит ребенка от рассматриваемой болезни. Таким образом, ПГД является дополнением к вспомогательные репродуктивные технологии, и требует экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) для получения ооциты или же эмбрионы для оценки. Эмбрионы обычно получают с помощью биопсии бластомера или бластоцисты. Последний метод оказался менее вредным для эмбриона, поэтому рекомендуется проводить биопсию примерно на 5 или 6 день развития.^[2]

Первый в мире PGD был проведен Handyside,^[3] Контогианни и Уинстон в больнице Хаммерсмит в Лондоне. Эмбрионы женского пола были выборочно перенесены в пять пар с риском заражения. Х-сцепленное заболевание, в результате чего родились двое близнецов и одна одноплодная беременность.^[4]

Период, термин предимплантационный генетический скрининг (PGS) относится к набору методов проверки наличия у эмбрионов (полученных с помощью ЭКО / ИКСИ) аномального количества хромосом. Другими словами, он проверяет, является ли эмбрион анеуплоидом или нет. PGS также называют скринингом на анеуплоидию. PGS был переименован преимплантационная генетическая диагностика анеуплоидии (PGD-A) Международным обществом по преимплантационной генетической диагностике (PGDIS) в 2016 г.^[5]

PGD ​​позволяет изучать ДНК яиц или эмбрионов, чтобы выбрать те, которые несут определенные мутации для генетических заболеваний. Это полезно, когда в семье ранее были хромосомные или генетические нарушения, а также в контексте программ экстракорпорального оплодотворения.^[6]

Процедуры также можно назвать доимплантационное генетическое профилирование чтобы адаптироваться к тому факту, что они иногда используются на ооцитах или эмбрионах до имплантации по другим причинам, кроме диагностики или скрининга.^[7]

Процедуры, выполняемые на половые клетки перед оплодотворением могут вместо этого называться методами отбор ооцитов или же отбор спермы, хотя методы и цели частично совпадают с PGD.

История

В 1968 г. Роберт Эдвардс и Ричард Гарднер сообщили об успешном определении пола кролика бластоцисты.^[8] Лишь в 1980-х годах ЭКО у человека было полностью разработано, что совпало с прорывом высокочувствительных полимеразной цепной реакции (ПЦР) технология. Первые успешные испытания Хэндисайда, Контогианни и Уинстона состоялись в октябре 1989 года, а первые роды - в 1990 году.^[9] хотя предварительные эксперименты были опубликованы несколькими годами ранее.^[10][11] В этих первых случаях ПЦР использовалась для определения пола пациентов, несущих Х-связанный болезни.

Первые клинические случаи

Елена Контогианни изучала докторскую степень в больнице Хаммерсмит по одноклеточной ПЦР для определения пола, которую она сделала путем амплификации повторяющейся области Y-хромосомы.^[12] Именно такой подход она использовала при первых в мире случаях ПГД.^[4]

Эмбрионы женского пола были выборочно перенесены в пять пар с риском Х-сцепленного заболевания, что привело к двух близнецам и одной одноплодной беременности. Поскольку область Y-хромосомы, которую амплифицировал Kontogianni, содержала много повторов, это было более эффективно, чем попытка амплификации уникальной области. Полоса на геле для ПЦР указывала на то, что эмбрион был мужским, а отсутствие полосы указывало на то, что эмбрион был женским. Однако неудача амплификации или безъядерный бластомер также привели к отсутствию полосы на геле для ПЦР. Чтобы снизить риск ошибочного диагноза, Контогианни продолжил коамплификацию последовательностей по X и Y (Kontogianni et al., 1991).^[13] В то время ничего не было известно о выпадении аллелей, загрязнении кумулюсными клетками или неудаче амплификации отдельных клеток. В течение 1980-х эмбрионы ЭКО человека переносились исключительно на второй день развития, поскольку используемая культуральная среда не позволяла надежно выращивать эмбрионы после этой стадии. Поскольку биопсия должен был быть выполнен на третий день, все первые диагнозы были поставлены в один день, а перенос эмбрионов - поздно на третий день. Сравнение переводов на второй и третий день показало, что это не повлияет отрицательно на показатели беременности. Беспокойство об аресте эмбрионов было настолько высоким, что некоторые переносы происходили в первые часы четвертого дня, так что эмбрионы были удалены из культивирования как можно скорее. В Хаммерсмите было много вечеров, когда перенос выполнялся в час ночи четвертого дня, а исследователи возвращались в лабораторию в 7 часов утра, чтобы начать рассмотрение следующего случая. Уинстон помог доставить большинство первых детей с ПГД.

ПГД становился все более популярным в 1990-х годах, когда его использовали для определения нескольких серьезных генетических нарушений, таких как серповидноклеточная анемия, Болезнь Тея – Сакса, Мышечная дистрофия Дюшенна, и бета-талассемия.^[14]

Общество

Как и все медицинские вмешательства, связанные с репродуктивной функцией человека, ПГД вызывает сильные, часто противоречивые мнения о социальной приемлемости, особенно из-за его евгенический подразумеваемое. В некоторых странах, например в Германии,^[15] ПГД разрешено только для предотвращения мертворожденные и генетические заболевания, в других странах PGD разрешена законом, но ее действие контролируется государством.^{[требуется разъяснение ]}

Показания и применение

ПГД используется в первую очередь для предотвращения генетических заболеваний путем отбора только тех эмбрионов, у которых нет известного генетического нарушения. ПГД также может использоваться для увеличения шансов на успешную беременность, чтобы соответствовать брату или сестре в Тип HLA чтобы быть донором, иметь меньшую предрасположенность к раку и выбор пола.^{[2][16][17][18]}

Моногенные нарушения

ПГД доступен для большого количества моногенные расстройства - то есть нарушения, вызванные только одним геном (аутосомно-рецессивный, аутосомно-доминантный или же Х-связанный ) - или хромосомных структурных аберраций (таких как сбалансированный перемещение ). ПГД помогает этим парам идентифицировать эмбрионы, несущие генетическое заболевание или хромосомную аномалию, тем самым предотвращая заболевание потомства. Наиболее часто диагностируемые аутосомно-рецессивные нарушения: кистозный фиброз, Бетаталассемия, серповидноклеточная анемия и спинальная мышечная атрофия тип 1. Наиболее частыми доминирующими заболеваниями являются: миотоническая дистрофия, болезнь Хантингтона и Болезнь Шарко – Мари – Зуба; а в случае заболеваний, связанных с Х-хромосомой, большая часть циклов проводится для синдром ломкой Х-хромосомы, гемофилия А и Мышечная дистрофия Дюшенна. Хотя это случается довольно редко, некоторые центры сообщают о ПГД при митохондриальный расстройства или два показания одновременно.

ПГД теперь также проводится при заболевании, которое называется наследственные множественные экзостозы (MHE / MO / HME).

Кроме того, есть бесплодные пары, которые имеют наследственное заболевание и выбирают ПГД, поскольку его можно легко комбинировать с их лечением ЭКО.

Шансы на беременность

Преимплантационное генетическое профилирование (PGP) было предложено в качестве метода определения качество эмбриона в экстракорпоральное оплодотворение, чтобы выбрать эмбрион, который имеет наибольшие шансы на успешную беременность. Однако, поскольку результаты PGP основаны на оценке отдельной клетки, PGP имеет присущие ограничения, поскольку тестируемая клетка может не соответствовать эмбриону из-за мозаика.^[19] Кроме того, исследование показало, что диагнозы биопсии одних и тех же эмбрионов в двух разных лабораториях совпадали только в 50% случаев.^[20]

Систематический обзор и метаанализ существующих рандомизированные контролируемые испытания пришли к выводу, что нет никаких доказательств положительного эффекта PGP, измеренного коэффициент рождаемости.^[19] Напротив, у женщин преклонного возраста матери PGP значительно снижает рождаемость.^[19] Технические недостатки, такие как инвазивность биопсии и хромосомный мозаицизм, являются основными факторами, лежащими в основе неэффективности PGP.^[19] Во всем мире зарегистрированы нормальные живорождения здоровых потомков после переноса эмбрионов, которые PGP считает анеуплоидными.^[21]

Альтернативные методы определения качество эмбриона для прогнозирования частоты наступления беременности включают микроскопию, а также профилирование РНК и белок выражение.

Соответствие HLA

Лейкоцитарный антиген человека (HLA) типирование эмбрионов, чтобы HLA ребенка соответствовала больному брату или сестре, что позволяет донорство стволовых клеток пуповинной крови.^[22][23] Ребенок в этом смысле "брат-спаситель "для ребенка-получателя. Тем временем типирование HLA стало важным показателем PGD в тех странах, где это разрешено законом.^[24] Соответствие HLA можно сочетать с диагностикой моногенных заболеваний, таких как Анемия Фанкони или же бета-талассемия в тех случаях, когда больной брат или сестра страдает этим заболеванием, или это может быть выполнено в исключительных случаях самостоятельно для таких случаев, как дети с лейкемия. Главный этический аргумент против - это возможная эксплуатация ребенка, хотя некоторые авторы утверждают, что Кантовский императив не нарушается, поскольку будущий ребенок-донор будет не только донором, но и любимым человеком в семье.

Предрасположенность к раку

Недавнее применение PGD - диагностика заболеваний с поздним началом и синдромов предрасположенности (рака). Поскольку пораженные люди остаются здоровыми до начала заболевания, часто в четвертом десятилетии жизни, ведутся споры о том, подходит ли ПГД в этих случаях. Следует учитывать высокую вероятность развития расстройства и возможность излечения. Например, при синдромах предрасположенности, таких как BRCA мутации которые предрасполагают человека к раку груди, результаты неясны. Хотя ПГД часто рассматривается как ранняя форма пренатальной диагностики, природа запросов на ПГД часто отличается от запросов на пренатальную диагностику, сделанных, когда мать уже беременна. Некоторые из общепринятых показаний к ПГД неприемлемы для пренатальной диагностики.

Половая проницательность

Преимплантационная генетическая диагностика предусматривает метод пренатальное определение пола даже до имплантации и поэтому может быть назван предимплантационное определение пола. Возможные применения преимплантационного определения пола включают:

• Дополнение к специфическому генному тестированию на моногенные расстройства, которое может быть очень полезно для генетических заболеваний, проявление которых связано с сексом, например, Х-сцепленные заболевания.
• Способность подготовиться к любым аспектам воспитания, зависящим от пола.
• Выбор пола. Опрос 2006 г.^[25] обнаружили, что 42% клиник, предлагающих ПГД, предоставили его для выбора пола по немедицинским причинам. Почти половина этих клиник выполняет это только для «семейного уравновешивания», когда пара с двумя или более детьми одного пола желает ребенка другого, но половина не ограничивает выбор пола семейным балансированием. В Индии эта практика использовалась для отбора только мужских эмбрионов, хотя эта практика является незаконной.^[26] Мнения о том, является ли выбор пола по немедицинским причинам этически приемлемым, сильно разнятся, о чем свидетельствует тот факт, что рабочая группа ESHRE не смогла сформулировать единую рекомендацию.

В случае семей с риском Х-сцепленные заболевания пациентам предоставляется единый тест PGD для определения пола. Выбор пола предлагает решение для беременных с Х-связанными заболеваниями. Отбор потомства женского эмбриона используется для предотвращения передачи Х-сцепленных менделевских рецессивных заболеваний. Такие Х-сцепленные менделевские заболевания включают: Мышечная дистрофия Дюшенна (DMD) и гемофилия A и B, которые редко наблюдаются у женщин, потому что потомство вряд ли унаследует две копии рецессивного аллеля. Поскольку для передачи болезни потомству женского пола требуются две копии мутантного аллеля Х, в худшем случае самки будут носителями болезни, но не обязательно могут иметь доминантный ген заболевания. С другой стороны, самцам требуется только одна копия мутантного аллеля X, чтобы заболевание возникло в фенотипе, и, следовательно, потомство мужского пола от матери-носителя имеет 50% -ную вероятность заболевания. Причины могут включать редкость состояния или то, что пораженные мужчины находятся в неблагоприятном репродуктивном отношении. Таким образом, ПГД в медицине используется для отбора потомства женского пола с целью предотвращения передачи Х-сцепленных менделевских рецессивных расстройств. Преимплантационная генетическая диагностика, применяемая для выбора пола, может использоваться для неменделирующих расстройств, которые значительно чаще встречаются у представителей одного пола. Перед началом процесса ПГД для предотвращения этих наследственных заболеваний выполняются три оценки. Чтобы подтвердить использование ПГД, выбор пола основан на серьезности унаследованного состояния, соотношении рисков для каждого пола или вариантах лечения заболевания.^{[нужна цитата ]}

Незначительные нарушения

Опрос 2006 года показывает, что ПГД иногда использовался для выбора эмбриона на предмет наличия определенного заболевания или инвалидности, например, глухоты, чтобы ребенок разделил эту характеристику с родителями.^[27]

Технические аспекты

ПГД - это форма генетической диагностики, которая проводится до имплантации. Это означает, что ооциты пациента следует оплодотворить. in vitro и эмбрионы, оставшиеся в культуре до установления диагноза. Также необходимо провести биопсию этих эмбрионов, чтобы получить материал для постановки диагноза. Сама диагностика может быть проведена с использованием нескольких методик в зависимости от характера исследуемого состояния. Как правило, методы на основе ПЦР используются для моногенных нарушений, а FISH - для хромосомных аномалий и для определения пола тех случаев, в которых протокол ПЦР недоступен для Х-сцепленного заболевания. Эти методы необходимо адаптировать для применения на бластомерах и тщательно протестировать на одноклеточных моделях перед клиническим применением. Наконец, после замены эмбриона излишки здоровых эмбрионов хорошего качества можно заморозить, разморозить и перенести обратно в следующем цикле.

Получение эмбрионов

В настоящее время все эмбрионы PGD получены с помощью вспомогательные репродуктивные технологии, хотя использование природных циклов и in vivo Оплодотворение с последующим промыванием матки предпринималось в прошлом, и в настоящее время от него в основном отказались. Чтобы получить большую группу ооцитов, пациенты проходят контролируемую стимуляцию яичников (COH). COH проводится либо по протоколу агонистов с использованием аналогов гонадотропин-рилизинг-гормона (GnRH) для десенсибилизации гипофиза, в сочетании с менопаузальными гонадотропинами человека (hMG) или рекомбинантным фолликулостимулирующим гормоном (FSH), либо по протоколу антагонистов с использованием рекомбинантного FSH в сочетании с Антагонист ГнРГ в соответствии с клинической оценкой профиля пациента (возраст, индекс массы тела (ИМТ), эндокринные параметры). ХГЧ вводится, когда по крайней мере три фолликула более 17 мм^{[требуется проверка ]} средний диаметр виден при трансвагинальном ультразвуковом сканировании. Трансвагинальное извлечение ооцитов под контролем УЗИ запланировано через 36 часов после введения ХГЧ. Добавки лютеиновой фазы включают ежедневное интравагинальное введение 600 мкг натурального микронизированного прогестерона.

Ооциты тщательно отделяются от клеток кумулюса, поскольку эти клетки могут быть источником загрязнения во время ПГД, если используется технология на основе ПЦР. В большинстве заявленных циклов интрацитоплазматическая инъекция спермы (ИКСИ) используется вместо ЭКО. Основные причины - предотвратить заражение остаточной спермой, прилипшей к блестящей оболочке, и избежать неожиданного сбоя оплодотворения. Процедура ИКСИ проводится на зрелых ооцитах с метафазой-II, а оплодотворение оценивается через 16–18 часов. Развитие эмбриона дополнительно оценивается каждый день перед биопсией и до переноса в матку женщины. Во время стадии дробления оценка эмбриона выполняется ежедневно на основании количества, размера, формы клеток и скорости фрагментации бластомеров. На 4-й день эмбрионы оценивали в зависимости от степени их уплотнения, а бластоцисты оценивали в соответствии с качеством трофэктодермы и внутренней клеточной массы, а также степенью их разрастания.

Процедуры биопсии

Поскольку ПГД можно проводить на клетках на разных стадиях развития, процедуры биопсии соответственно различаются. Теоретически биопсию можно проводить на всех доимплантационных стадиях, но было предложено только три: на неоплодотворенных и оплодотворенных ооцитах (для полярных тельцов, PBs), на эмбрионах стадии дробления на третий день (для бластомеров) и на бластоцистах (для клеток трофэктодермы). ).

Процедура биопсии всегда включает два этапа: открытие zona pellucida и удаление ячейки (ов). Существуют разные подходы к обоим этапам, включая механический, химический и физический (кислотный раствор Тирода) и лазерную технологию для нарушения прозрачной оболочки, экструзии или аспирации для удаления ПБ и бластомеров, а также грыжи клеток трофэктодермы.

Биопсия полярного тела

А биопсия полярного тела это отбор проб из полярное тело, что представляет собой небольшой гаплоидный клетка, которая образуется одновременно как яйцеклетка в течение оогенез, но который, как правило, не может быть удобренный. По сравнению с биопсия бластоцисты, биопсия полярного тела потенциально может быть дешевле, иметь меньше вредных побочных эффектов и многое другое. чувствительный в обнаружении отклонений.^[28] Основное преимущество использования полярных телец в ПГД состоит в том, что они не нужны для успешного оплодотворения или нормального эмбрионального развития, что гарантирует отсутствие вредного воздействия на эмбрион. Одним из недостатков биопсии ПБ является то, что она предоставляет информацию только о материнском вкладе в эмбрион, поэтому случаи наследственных по материнской линии аутосомно-доминантных и Х-сцепленных расстройств, которые передаются исключительно от матери, могут быть диагностированы, а аутосомно-рецессивные расстройства - только быть диагностирован частично. Другой недостаток - повышенный риск диагностической ошибки, например, из-за деградации генетического материала или событий рекомбинации, которые приводят к гетерозиготным первым полярным тельцам.

Биопсия на стадии расщепления (биопсия бластомера)

Биопсия на стадии расщепления обычно выполняется утром третьего дня после оплодотворения, когда нормально развивающиеся эмбрионы достигают стадии из восьми клеток. Биопсия обычно проводится на эмбрионах с менее чем 50% безъядерных фрагментов и на 8-клеточной или более поздней стадии развития. В блестящей оболочке делается отверстие и одно или два бластомеры содержащие ядро, осторожно аспирируются или выдавливаются через отверстие. Основное преимущество биопсии на стадии расщепления перед анализом PB состоит в том, что можно изучить генетический вклад обоих родителей. С другой стороны, было обнаружено, что эмбрионы на стадии дробления имеют высокий уровень хромосомный мозаицизм, ставя под сомнение, будут ли результаты, полученные на одном или двух бластомерах, репрезентативными для остальной части эмбриона. По этой причине в некоторых программах используется комбинация биопсии ПБ и биопсии бластомера. Кроме того, биопсия на стадии расщепления, как и в случае биопсии PB, дает очень ограниченное количество ткани для диагностики, что требует развития одноклеточных ПЦР и РЫБЫ Хотя теоретически биопсия PB и биопсия бластоцисты менее вредны, чем биопсия на стадии расщепления, этот метод все еще остается распространенным. Он используется примерно в 94% циклов PGD, о которых сообщается Консорциуму ESHRE PGD. Основные причины заключаются в том, что он позволяет поставить более безопасный и полный диагноз, чем биопсия PB, и по-прежнему оставляет достаточно времени для завершения диагностики до того, как эмбрионы должны быть заменены в матке пациента, в отличие от биопсии бластоцисты. согласились, что оптимальный момент для биопсии находится на стадии восьми клеток. Он диагностически безопаснее, чем биопсия PB, и, в отличие от биопсии бластоцисты, позволяет диагностировать эмбрионы до 5 дня. На этой стадии клетки все еще тотипотентны, а эмбрионы еще не уплотняются. Хотя было показано, что до четверти человеческого эмбриона можно удалить без нарушения его развития, еще предстоит изучить, коррелирует ли биопсия одной или двух клеток со способностью эмбриона развиваться, имплантироваться и расти. в доношенную беременность.

Не все способы открытия zona pellucida имеют такой же процент успеха, потому что на благополучие эмбриона и / или бластомера может повлиять процедура, используемая для биопсии. Сверление зоны с кислотным раствором Тироде (ZD) сравнивали с частичной диссекцией зоны (PZD), чтобы определить, какой метод приведет к более успешным беременностям и окажет меньшее влияние на эмбрион и / или бластомер. ZD использует пищеварительный фермент, такой как проназа, что делает его химическим методом бурения. Химические вещества, используемые в ZD, могут повредить эмбрион. PZD использует стеклянную микроиглу для разрезания прозрачной оболочки, что делает этот метод механического рассечения, который обычно требует квалифицированных рук для выполнения процедуры. В исследовании, в котором участвовала 71 пара, ZD выполнялась в 26 циклах у 19 пар, а PZD - в 59 циклах у 52 пар. При анализе отдельных клеток частота успеха составила 87,5% в группе PZD и 85,4% в группе ZD. Возраст матери, количество извлеченных ооцитов, частота оплодотворения и другие переменные не различались между группами ZD и PZD. Было обнаружено, что PZD привел к значительно более высокому уровню беременности (40,7% против 15,4%), продолжающейся беременности (35,6% против 11,5%) и имплантации (18,1% против 5,7%), чем ZD. Это говорит о том, что использование механического метода PZD в биопсии бластомера для преимплантационной генетической диагностики может быть более эффективным, чем использование химического метода ZD. Успех PZD по сравнению с ZD можно объяснить тем, что химический агент в ZD оказывает вредное воздействие на эмбрион и / или бластомер. В настоящее время основным методом вскрытия прозрачной оболочки является лазерное сверление. Использование лазера - более легкий метод, чем использование механических или химических средств. Однако лазерное сверление может быть вредным для эмбриона, и его использование в лабораториях по экстракорпоральному оплодотворению очень дорого, особенно когда ПГД не является распространенным процессом в наше время. PZD может быть жизнеспособной альтернативой этим проблемам.^[29]

Биопсия бластоцисты

В попытке преодолеть трудности, связанные с одноклеточными методами, было предложено проводить биопсию эмбрионов на стадии бластоцисты, обеспечивая большее количество исходного материала для диагностики. Было показано, что если в одной пробирке с образцом присутствует более двух клеток, основные технические проблемы одноклеточной ПЦР или FISH практически исчезнут. С другой стороны, как и в случае биопсии на стадии дробления, хромосомные различия между внутренней клеточной массой и трофэктодермой (ТЕ) могут снизить точность диагностики, хотя этот мозаицизм, как сообщается, ниже, чем на стадии дробления. эмбрионы.

Биопсия TE показала себя успешной на животных моделях, таких как кролики,^[30] мышей^[31] и приматы.^[32] Эти исследования показывают, что удаление некоторых ТЕ-клеток не вредит дальнейшему развитию in vivo развитие эмбриона.

Биопсия человека на стадии бластоцисты для PGD выполняется путем проделывания отверстия в ZP на третий день in vitro культура. Это позволяет развивающемуся TE выступать после бластуляции, облегчая биопсию. На пятый день после оплодотворения примерно пять клеток вырезают из ТЕ с помощью стеклянной иглы или лазерной энергии, оставляя эмбрион в значительной степени неповрежденным и без потери внутренней клеточной массы. После постановки диагноза эмбрионы можно заменить в течение того же цикла или заморозить и перенести в следующем цикле.

У этого подхода есть два недостатка из-за стадии, на которой он выполняется. Во-первых, только примерно половина доимплантационных эмбрионов достигает стадии бластоцисты. Это может ограничить количество бластоцист, доступных для биопсии, что в некоторых случаях ограничит успех PGD. Мак-Артур и сотрудники^[33] сообщают, что в 21% начатых циклов ПГД не было эмбриона, подходящего для биопсии ТЕ. Эта цифра примерно в четыре раза выше, чем среднее значение, представленное консорциумом ESHRE PGD, где преобладающими методами, о которых сообщают, являются PB и биопсия на стадии расщепления. С другой стороны, отсрочка биопсии до этой поздней стадии развития ограничивает время выполнения генетической диагностики, затрудняя повторный цикл ПЦР или повторную гибридизацию зондов FISH до того, как эмбрионы должны быть возвращены пациенту.

Отбор образцов кумулюсных клеток

Выборка кучевые клетки может выполняться в дополнение к отбору образцов полярных телец или клеток эмбриона. Из-за молекулярного взаимодействия между клетками кумулюса и ооцитом, профилирование экспрессии генов кумулюсных клеток могут быть выполнены для оценки качества ооцитов и эффективности гиперстимуляция яичников протокол, и может косвенно предсказать анеуплоидия, развитие эмбриона и исходы беременности.^[34]

Неинвазивные преимплантационные методы генетического скрининга (NIPGS)

Традиционная биопсия эмбриона может быть инвазивной и дорогостоящей. Поэтому исследователи постоянно стремятся найти менее инвазивные методы доимплантационного генетического тестирования. Исследования новых неинвазивных методов преимплантационного генетического скрининга (NIPGS), таких как бластоцель Жидкие и отработанные среды эмбрионов недавно были опубликованы в качестве альтернативы традиционным методам ^[35]

Преимплантационное генетическое скрининговое тестирование с использованием жидкости Blastocoel (BF)В ходе нормального процесса ЭКО правильная практика витрификации эмбрионов увеличивает шансы на здоровую беременность. В процессе остекловывания образовавшаяся струя обезвоживается, и она вместе с полостью бластоцеля разрушается для процесса замораживания. Есть много методов, которые использовались для облегчения коллапса, включая лазерный импульс, многократное микропипетирование, прокол микроиглами или микроснимание. ^[36] Обычно эта жидкость выбрасывается, однако при доимплантационном генетическом тестировании BL эта жидкость сохраняется, а затем проверяется на ДНК. Считается, что эта ДНК происходит от клеток, прошедших апоптоз, обнаруженных в развивающемся эмбрионе. ^[37]

Преимплантационное генетическое тестирование с использованием кондиционированной среды для культуры бластоцист (BCCM)Другой метод менее инвазивного доимплантационного генетического тестирования включает тестирование культуральной среды, в которой развился эмбрион. Было отмечено, что эмбрион высвобождает фрагменты ДНК из клеток, которые погибли в течение инкубационного периода. Обладая этими знаниями, ученые пришли к выводу, что они могут выделить эту ДНК и использовать ее для преимплантационного генетического тестирования. ^[38]

Преимущества и последствия менее инвазивного преимплантационного генетического тестированияХотя существуют противоречивые данные о том, вредны ли более традиционные методы доимплантационного генетического тестирования для эмбриона, существуют более новые методы для менее инвазивных и столь же эффективных методов тестирования. С этой целью мы обратились к доимплантационному генетическому тестированию с использованием жидкости бластоцелей и отработанной среды эмбриона. Одна из проблем этих альтернатив - минимальное количество ДНК, с которой можно работать. Другой очень важный вопрос - точна ли эта технология. Обе эти проблемы недавно были рассмотрены Кузнецовым.Кузнецов решил использовать оба метода, объединив количество ДНК, полученное с помощью обоих методов. Затем, как только ДНК была выделена, ее использовали для преимплантационного генетического тестирования. Результаты показали, что при использовании обоих методов Blastocyst Fluid и Embryo Spent Media в комбинации они показали степень сердечности для всей копии хромосомы 87,5% по сравнению с трофэктодермой, 96,4% по сравнению со всей Blastocyst (золотой стандарт). Кроме того, после амплификации с использованием этого нового метода они смогли произвести 25,0-54,0 нг / мкл ДНК на образец. Традиционными методами, такими как трофэктодерма, они собирали от 10 до 44 нг / мкл. ^[39]

Методы генетического анализа

Флуоресцентная гибридизация in situ (РЫБА) и Полимеразной цепной реакции (ПЦР) - две широко используемые технологии первого поколения в ПГД. ПЦР обычно используется для диагностики моногенных заболеваний, а FISH - для обнаружения хромосомных аномалий (например, анеуплоидия скрининг или хромосомные транслокации). За последние несколько лет различные достижения в тестировании PGD позволили улучшить полноту и точность доступных результатов в зависимости от используемой технологии.^[40][41] Недавно был разработан метод, позволяющий фиксировать метафазные пластинки от одиночных бластомеров. Этот метод в сочетании с FISH, m-FISH может дать более надежные результаты, поскольку анализ проводится на целых метафазных пластинах.^[42]

Помимо FISH и ПЦР, секвенирование генома одной клетки проходит апробацию как метод преимплантационной генетической диагностики.^[43] Это характеризует полный ДНК последовательность геном эмбриона.

РЫБЫ

РЫБЫ - это наиболее часто применяемый метод определения хромосомной конституции эмбриона. В отличие от кариотипирования, его можно использовать на интерфазных хромосомах, так что его можно использовать на PB, бластомерах и образцах TE. Клетки фиксируют на предметных стеклах микроскопа и гибридизуют с ДНК-зондами. Каждый из этих зондов специфичен для части хромосомы и помечен флуорохромом.

Двойной FISH считался эффективным методом определения пола доимплантационных эмбрионов человека и дополнительной способностью обнаруживать аномальное количество копий хромосом, что невозможно с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).^[44]

В настоящее время доступна большая панель зондов для разных сегментов всех хромосом, но ограниченное количество различных флуорохромов ограничивает количество сигналов, которые можно анализировать одновременно.

Тип и количество датчиков, используемых в образце, зависит от показаний. Для определения пола (используется, например, когда протокол ПЦР для данного заболевания, сцепленного с X, недоступен), зонды для X- и Y-хромосом применяются вместе с зондами для одной или нескольких аутосом в качестве внутреннего контроля FISH. Можно добавить больше зондов для проверки анеуплоидий, особенно тех, которые могут привести к жизнеспособной беременности (например, трисомии 21). Использование зондов для хромосом X, Y, 13, 14, 15, 16, 18, 21 и 22 потенциально может выявить 70% анеуплоидий, обнаруживаемых при спонтанных абортах.

Чтобы иметь возможность анализировать больше хромосом в одном образце, можно выполнить до трех последовательных раундов FISH. В случае хромосомных перестроек необходимо выбрать конкретные комбинации зондов, фланкирующие интересующую область. Считается, что метод FISH имеет частоту ошибок от 5 до 10%.

Основная проблема использования FISH для изучения хромосомной конституции эмбрионов - это повышенная частота мозаицизма, наблюдаемая на доимплантационной стадии у человека. Мета-анализ более 800 эмбрионов показал, что примерно 75% доимплантационных эмбрионов являются мозаичными, из которых примерно 60% представляют собой диплоидно-анеуплоидную мозаику и примерно 15% анеуплоидную мозаику.^[45] Ли и коллеги^[46] обнаружили, что 40% эмбрионов, диагностированных как анеуплоидные на 3-й день, на 6-й день оказались эуплоидной внутренней клеточной массой. Staessen и сотрудники обнаружили, что 17,5% эмбрионов, диагностированных как аномальные во время PGS, подверглись повторному анализу после PGD, было обнаружено, что они также содержат нормальные клетки, и 8,4% были признаны нормальными.^[47] Как следствие, возник вопрос, действительно ли одна или две клетки, изученные на эмбрионе, представляют собой полный эмбрион, и не выбрасываются ли жизнеспособные эмбрионы из-за ограничений метода.

ПЦР

Кэри Маллис задуманный ПЦР в 1985 году как in vitro упрощенное воспроизведение in vivo процесс Репликация ДНК. Воспользовавшись химическими свойствами ДНК и доступностью термостабильных ДНК-полимеразы, ПЦР позволяет обогащать образец ДНК определенной последовательностью. ПЦР дает возможность получить большое количество копий определенного участка генома, что делает возможным дальнейший анализ. Это высокочувствительная и специфическая технология, что делает ее пригодной для всех видов генетической диагностики, включая ПГД. В настоящее время существует множество различных вариантов самой ПЦР, а также различных методов апостериорного анализа продуктов ПЦР.

При использовании ПЦР в ПГД сталкиваешься с проблемой, которой нет в рутинном генетическом анализе: мизерными количествами доступной геномной ДНК. Поскольку ПГД выполняется на отдельных клетках, ПЦР должна быть адаптирована и доведена до ее физических пределов, а также должна использоваться минимально возможное количество матрицы: одна нить. Это подразумевает длительный процесс точной настройки условий ПЦР и восприимчивость ко всем проблемам обычной ПЦР, но с усилением на несколько степеней. Большое количество необходимых циклов ПЦР и ограниченное количество матрицы делают одноклеточную ПЦР очень чувствительной к загрязнению. Другой проблемой, характерной для одноклеточной ПЦР, является феномен выпадения аллеля (ADO). Он состоит из случайной неамплификации одного из аллелей, присутствующих в гетерозиготной выборке. ADO серьезно подрывает надежность PGD, поскольку гетерозиготный эмбрион может быть диагностирован как затронутый или незатронутый в зависимости от того, какой аллель не сможет амплифицироваться. Это особенно касается PGD для аутосомно-доминантных заболеваний, когда ADO затронутого аллеля может привести к переносу пораженного эмбриона.

Было разработано несколько анализов на основе ПЦР для различных заболеваний, таких как гены триплетных повторов, связанные с миотонической дистрофией, и хрупкий X в отдельных человеческих соматических клетках, гаметах и ​​эмбрионах.^[48]

Установление диагноза

Установить диагноз при ПГД не всегда просто. Критерии, используемые для выбора эмбрионов, подлежащих замене после результатов FISH или ПЦР, не одинаковы во всех центрах. В случае FISH в некоторых центрах заменяются только эмбрионы, которые признаны хромосомно нормальными (то есть показывающие два сигнала для гоносомы и проанализированные аутосомы) после анализа одного или двух бластомеров, а также при анализе двух бластомеров результаты должны быть согласованными. Другие центры утверждают, что эмбрионы, диагностированные как моносомные, могут быть перенесены, потому что ложная моносомия (т. Е. Потеря одного сигнала FISH в нормальной диплоидной клетке) является наиболее часто встречающимся ошибочным диагнозом. В этих случаях риск анеуплоидной беременности отсутствует, и нормальные диплоидные эмбрионы не теряются для переноса из-за ошибки FISH. Более того, было показано, что эмбрионы, диагностированные как моносомные на 3-й день (за исключением хромосом X и 21), никогда не развиваются до бластоцисты, что коррелирует с тем фактом, что эти моносомы никогда не наблюдаются при продолжающихся беременностях.

Диагностика и неправильный диагноз при ПГД с использованием ПЦР были математически смоделированы в работах Навиди и Арнхейма, а также Льюиса и сотрудников.^[49][50] Самый важный вывод этих публикаций - для эффективной и точной диагностики эмбриона необходимы два генотипа. Это может быть основано на связанном маркере и генотипах заболевания из одной клетки или на генотипах маркера / заболевания из двух клеток. Интересным аспектом, исследуемым в этих статьях, является подробное изучение всех возможных комбинаций аллелей, которые могут появиться в результатах ПЦР для конкретного эмбриона. Авторы указывают, что некоторые из генотипов, которые могут быть получены во время диагностики, могут не соответствовать ожидаемой модели связанных маркерных генотипов, но все же обеспечивают достаточную уверенность в том, что генотип эмбриона не затронут. Хотя эти модели обнадеживают, они основаны на теоретической модели, и, как правило, диагноз устанавливается на более консервативной основе, чтобы избежать возможности ошибочного диагноза. Когда во время анализа клетки появляются неожиданные аллели, в зависимости от наблюдаемого генотипа, считается, что либо была проанализирована аномальная клетка, либо произошло заражение, и что диагноз не может быть установлен. Случай, когда аномалия анализируемой клетки может быть четко идентифицирована, - это когда, используя мультиплексная ПЦР для связанных маркеров в выборке обнаруживаются только аллели одного из родителей. В этом случае клетка может рассматриваться как несущая моносомию по хромосоме, на которой расположены маркеры, или, возможно, как гаплоид. Появление единственного аллеля, указывающего на пораженный генотип, считается достаточным для диагностики эмбриона как пораженного, а эмбрионы, у которых был диагностирован полный незатронутый генотип, являются предпочтительными для замены. Хотя такая политика может привести к уменьшению числа незатронутых эмбрионов, пригодных для переноса, она считается более предпочтительной, чем возможность ошибочного диагноза.

Преимплантационное генетическое гаплотипирование

Преимплантационное генетическое гаплотипирование (PGH) представляет собой методику PGD, при которой гаплотип из генетические маркеры которые имеют статистические ассоциации с целевым заболеванием, а не мутация вызывая болезнь.^[51]

После того, как была создана панель связанных генетических маркеров для конкретного заболевания, ее можно использовать для всех носителей этого заболевания.^[51] Напротив, поскольку даже моногенное заболевание может быть вызвано множеством различных мутаций в пораженном гене, обычные методы ПГД, основанные на обнаружении конкретной мутации, потребуют тестов, специфичных для мутации. Таким образом, PGH расширяет доступность PGD в тех случаях, когда тесты, специфичные для мутаций, недоступны.

PGH также имеет преимущество перед FISH в том, что FISH обычно не может дифференцировать эмбрионы, которые обладают сбалансированной формой хромосомная транслокация и те, которые несут гомологичные нормальные хромосомы. Эта неспособность может серьезно повлиять на поставленный диагноз. PGH может сделать различие, которое FISH часто не может. PGH делает это с помощью полиморфных маркеров, которые лучше подходят для распознавания транслокаций. Эти полиморфные маркеры способны различать эмбрионы, несущие нормальные, сбалансированные и несбалансированные транслокации. FISH также требует большей фиксации клеток для анализа, тогда как PGH требует только переноса клеток в пробирки для полимеразной цепной реакции. Перенос клеток является более простым методом и оставляет меньше места для ошибок анализа.^[52]

Перенос эмбрионов и криоконсервация избыточных эмбрионов

Перенос эмбрионов обычно выполняется на третий или пятый день после оплодотворения, время зависит от методов, используемых для ПГД, и стандартных процедур ЭКО центр, где это выполняется.

С введением в Европе политики переноса одного эмбриона, направленной на снижение частоты многоплодных беременностей после ВРТ, обычно в матке заменяется один эмбрион или ранняя бластоциста. Уровень ХГЧ в сыворотке крови определяется на 12 день. Если беременность установлена, на 7 неделе проводится ультразвуковое исследование для подтверждения наличия сердцебиения плода. Парам обычно рекомендуется пройти PND из-за, хотя и низкого, риска ошибочного диагноза.

Нет ничего необычного в том, что после ПГД имеется больше эмбрионов, пригодных для передачи обратно женщине, чем необходимо. Для пар, проходящих ПГД, эти эмбрионы очень ценны, поскольку текущий цикл пары может не привести к продолжающейся беременности. Криоконсервация эмбрионов а позднее размораживание и замена могут дать им второй шанс забеременеть без необходимости повторения громоздких и дорогостоящих процедур АРТ и ПГД.

Побочные эффекты для эмбриона

По словам Майкла Такера, доктора философии, научного директора и главного эмбриолога компании Georgia Reproductive Specialists в Атланте, PGD / PGS - это инвазивная процедура, требующая серьезного внимания.^[53] По словам Серены Х. Чен, доктора медицины, эндокринолога-репродуктолога из Нью-Джерси из отделения репродуктивной медицины IRMS в Сент-Варнава, один из рисков ПГД включает повреждение эмбриона во время процедуры биопсии (которая, в свою очередь, разрушает эмбрион в целом).^[53] Другой риск - криоконсервация, когда эмбрион хранится в замороженном состоянии, а затем размораживается для процедуры. Около 20% размороженных эмбрионов не выживают.^[54][55] Было проведено исследование, показывающее, что эмбрион после биопсии имеет меньшую выживаемость при криоконсервации.^[56] Другое исследование предполагает, что PGS с биопсией на стадии дробления приводит к значительно более низкому уровню живорождения у женщин пожилого возраста матери.^[57] Кроме того, другое исследование рекомендует осторожность и долгосрочное наблюдение, поскольку ПГД / ПГС увеличивает перинатальную смертность при многоплодной беременности.^[58]

В исследовании на мышиной модели ПГД связывали с различными долгосрочными рисками, включая увеличение веса и снижение памяти; протеомный анализ мозга взрослых мышей показал значительные различия между биопсийными и контрольными группами, многие из которых тесно связаны с нейродегенеративными расстройствами, такими как болезнь Альцгеймера и синдром Дауна.^[59]

Этические вопросы

ПГД подняло этические проблемы, хотя этот подход может снизить зависимость от удаления плода во время беременности. Технику можно использовать для пренатальное определение пола эмбриона, и, таким образом, потенциально может использоваться для отбора эмбрионов одного пола в пользу другого в контексте "балансировка семьи ". Возможно, в будущем появится возможность сделать другой выбор" социального отбора ", который вызовет социально-экономические проблемы. В матку женщины имплантируются только здоровые эмбрионы; затронутые эмбрионы либо выбрасываются, либо передаются в дар науке.^[60]

ПГД имеет потенциал для выявления генетических проблем, не связанных с медицинская необходимость, таких как ум и красота, и против отрицательных черт характера, таких как инвалидность. Медицинское сообщество расценило это как противоречивое и противоречивое предложение.^[61] Перспектива "дизайнерский ребенок "тесно связан с техникой ПГД, вызывая опасения, что увеличение частоты генетического скрининга приведет к переходу на современные евгеника движение.^[62] С другой стороны, принцип плодородие предлагается, что является предполагаемым моральный долг из родители в состоянии выбрать своих детей, чтобы отдать предпочтение тем, кто от них ожидает лучшей жизни.^[63] Аргументом в пользу этого принципа является то, что черты характера (такие как сочувствие, память и т. Д.) Являются «универсальными средствами» в смысле существования инструментальная ценность в реализации любых жизненных планов, которые могут возникнуть у ребенка.^[64] Вальтер Файт утверждал, что нет никакой внутренней моральной разницы между «созданием» и «выбором» жизни, таким образом, делая евгенику естественным следствием принятия принципа плодородия.^[65]

Инвалидность

В 2006 году три процента клиник ПГД в США сообщили о том, что выбрали эмбрион на предмет наличия инвалидности.^[66] Вовлеченные пары были обвинены в умышленном причинении вреда ребенку. Эта практика характерна для карликов, когда родители намеренно создают ребенка-карлика.^[66] При выборе брат-спаситель Чтобы обеспечить подходящую пересадку костного мозга для уже существующего больного ребенка, существуют проблемы, включая коммодификация и благополучие ребенка-донора.^[67]

Опираясь на результат одной клетки из многоклеточного эмбриона, PGD работает в предположении, что эта клетка является репрезентативной для остальной части эмбриона. Это может быть не так, поскольку частота мозаицизма часто относительно высока.^[68] Иногда ПГД может привести к ложноотрицательный результат, ведущий к принятию аномального эмбриона или ложный положительный результат результат, ведущий к отмене отбора нормального эмбриона.

Другой проблемный случай - это случаи желательного неразглашения результатов ПГД для некоторых генетических нарушений, которые могут еще не проявиться у родителей, например Болезнь Хантингтона. Он применяется, когда пациенты не хотят знать свой статус носительства, но хотят убедиться, что у них есть потомство, свободное от болезни. Эта процедура может поставить практиков в сомнительные этические ситуации, например когда нет здоровых, незатронутых эмбрионов, доступных для переноса, и должен быть выполнен фиктивный перенос, чтобы пациент не подозревал, что он / она является носителем. В ESHRE Рабочая группа по этике в настоящее время рекомендует вместо этого использовать тестирование исключения. Тестирование исключения основано на анализе сцепления с полиморфными маркерами, с помощью которого можно установить родительское и прародительское происхождение хромосом. Таким образом заменяются только эмбрионы, не содержащие хромосому, полученную от пострадавшего дедушки или бабушки, что позволяет избежать необходимости обнаружения самой мутации.^{[нужна цитата ]}

Интерсексуальные черты

ПГД допускает дискриминацию людей с интерсекс черты. Джорджиан Дэвис утверждает, что такая дискриминация не учитывает тот факт, что многие люди с интерсексуальными чертами вели полноценную и счастливую жизнь.^[69] Морган Карпентер выделяет появление нескольких интерсекс-вариаций в списке Управление оплодотворения человека и эмбриологии «серьезных» «генетических состояний», которые могут быть отменены в Великобритании, в том числе 5 дефицит альфа-редуктазы и синдром нечувствительности к андрогенам, черты, очевидные у элитных спортсменок и "первые в мире открытые мэр интерсекс ".^[70] Организация Intersex International Australia призвал австралийский Национальный совет здравоохранения и медицинских исследований запретить такое вмешательство, отметив «тесную взаимосвязь интерсекс-статуса, гендерной идентичности и сексуальной ориентации в социальном понимании пола и гендерных норм, а также в медицинской и медицинской социологической литературе».^[71]

В 2015 г. Совет Европы опубликовал тематический доклад по Права человека и интерсекс люди, отмечая:

Право интерсексуалов на жизнь может быть нарушено в результате дискриминационного «выбора пола» и «преимплантационной генетической диагностики, других форм тестирования и отбора по определенным характеристикам». Такие отмены отбора или избирательные аборты несовместимы с этическими нормами и стандартами прав человека из-за дискриминации интерсексуалов по признаку пола.^[72]

Спаситель братьев и сестер

ПГД в сочетании с сопоставлением HLA (человеческий лейкоцитарный антиген) позволяет парам выбирать эмбрионы, не затронутые генетическим заболеванием, в надежде на спасение существующего пораженного ребенка. «Родной брат-спаситель», вероятно, пожертвует спасительную ткань, совместимую с его / ее братом или сестрой.^[73] Некоторые специалисты по этике утверждают, что «братья и сестры-спасители», созданные в результате этой процедуры, будут рассматриваться как товары.^[73] Еще один аргумент против выбора «братьев и сестер-спасителей» состоит в том, что это приводит к появлению генетически модифицированных «дизайнерских младенцев».^[74] Этот аргумент вызывает дискуссию между моральным различием улучшения черт и предотвращения болезней.^[75] Наконец, противники «братьев и сестер-спасителей» озабочены благополучием ребенка, главным образом тем, что процедура нанесет эмоциональный и психологический вред ребенку.^[73]

В настоящее время в Соединенных Штатах не существует официальных правил или инструкций.^[76] Этические решения относительно этой процедуры остаются на усмотрение поставщиков медицинских услуг и их пациентов.^[76] Напротив, использование PGD в Великобритании регулируется Законом об оплодотворении человека и эмбриологии (HFEA), который требует от клиник, выполняющих эту технику, получить лицензию и следовать строгим критериям.^[76]

Религиозные возражения

Некоторые религиозные организации не одобряют эту процедуру. Римско-католическая церковь, например, считает, что это предполагает уничтожение человеческой жизни.^[77] и, кроме того, выступает против необходимого оплодотворения яиц in vitro, как противоречащего аристотелевским принципам природы.^{[нужна цитата ]} Еврейская ортодоксальная религия считает, что исправление генетики - это нормально, но она не поддерживает создание генетически модифицированного ребенка.^[60]

Психологический фактор

Проведенный метаанализ указывает на то, что исследования, проведенные в области ПГД, подчеркивают будущие исследования. Это связано с положительными результатами опроса, последующими послеродовыми исследованиями, не показавшими существенных различий между теми, кто использовал ПГД, и теми, кто забеременел естественным путем, а также этнографическими исследованиями, которые подтвердили, что те, у кого в прошлом был отрицательный опыт, обнаружили, что ПГД приносит облегчение. Во-первых, в исследовании отношения женщины с бесплодием, прерыванием беременности и повторными выкидышами в анамнезе сообщили о более позитивном отношении к предимплантационной генетической диагностике. Они были более склонны к проведению ПГД. Во-вторых, этнографическое исследование, проведенное в 2004 г., также как и в первом исследовании, показало аналогичные результаты. Пары, имевшие в анамнезе множественные выкидыши, бесплодие и заболевшего ребенка, считали, что преимплантационная генетическая диагностика является жизнеспособным вариантом. Они также почувствовали большее облегчение; «Те, кто использовал эту технологию, были действительно мотивированы не повторять потерю беременности».^[78] Таким образом, хотя некоторые из этих исследований ограничены из-за их ретроспективного характера и ограниченных выборок, результаты исследования указывают на общую удовлетворенность участников использованием ПГД. Однако авторы исследований указывают на то, что эти исследования подчеркивают необходимость будущих исследований, таких как создание перспективного дизайна с достоверной психологической шкалой, необходимой для оценки уровней стресса и настроения во время переноса и имплантации эмбриона.^[78]

Политика и законность

Канада

До внедрения Закон о вспомогательной репродукции человека (AHR) в 2004 году PGD не регулировалась в Канаде. Закон запрещает выбор пола в немедицинских целях.^[79]

В связи с сокращением национального бюджета на 2012 год AHR был отменен. Затем регулирование вспомогательной репродукции было делегировано каждой провинции.^[80] Это делегирование предоставляет провинциям большую свободу действий, чтобы делать то, что им заблагорассудится. В результате такие провинции, как Квебек, Альберта и Манитоба, включили почти полную стоимость ЭКО в счет государственного здравоохранения.^[81] Доктор Сантьяго Мунн, разработчик первого теста PGD для синдрома Дауна и основатель Reprogenetics, увидел в этих решениях провинции возможность для роста своей компании и открытия большего количества лабораторий репрогенетики по всей Канаде. Он отклонил все споры относительно младенцев из каталога и заявил, что у него нет проблем с идеальными младенцами.^[81]

Однако в Онтарио нет конкретных правил в отношении PGD. С 2011 года Министерство по делам детей и молодежи Онтарио выступает за развитие финансируемых государством образовательных программ по «безопасной фертильности», мониторинга эмбрионов и вспомогательных репродуктивных услуг для всех жителей Онтарио. Этот правительственный отчет показывает, что Онтарио не только имеет неопределенные правила в отношении услуг вспомогательной репродукции, таких как ЭКО и ПГД, но также не финансирует ни одну из этих услуг. Все существующие репродуктивные клиники являются частными и расположены только в Брамптоне, Маркхэме, Миссиссауге, Скарборо, Торонто, Лондоне и Оттаве.^[82] Напротив, в таких провинциях, как Альберта и Квебек, не только больше клиник, но и есть подробные законы, касающиеся вспомогательной репродуктивной медицины и государственного финансирования этих практик.

Германия

До 2010 года использование PGD находилось в серой зоне с правовой точки зрения.^[83] В 2010 г. Федеральный суд Германии постановил, что PGD можно использовать в исключительных случаях.^[83] 7 июля 2011 г. Бундестаг принял закон, разрешающий PGD в определенных случаях. Процедура может использоваться только в том случае, если существует большая вероятность того, что родители передадут генетическое заболевание, или когда существует высокая генетическая вероятность мертворождения или выкидыша.^[15] 1 февраля 2013 г. Бундесрат утвердил правило, регулирующее практическое использование ПГД.^[83]

Венгрия

В Венгрии разрешена ПГД при тяжелых наследственных заболеваниях (когда генетический риск превышает 10%). Также общепринятым методом является преимплантационная генетическая диагностика анеуплоидии (ПГС / ПГД-А). В настоящее время это рекомендуется в случае множественных выкидышей и / или нескольких неудачных попыток ЭКО, и / или когда мать старше 35 лет.^[84] Несмотря на то, что это одобренный метод, PGD-A доступен только в одной клинике репродуктивной медицины в Венгрии.^[85]

Индия

В Индии Министерство здравоохранения и социального обеспечения семьи регулирует эту концепцию в соответствии с: Закон о методах диагностики до зачатия и беременности, 1994 г.. После 1994 года в Закон были внесены дополнительные изменения, и в него были внесены необходимые поправки, которые своевременно обновляются на официальном веб-сайте правительства Индии, посвященном этому делу.^[86] Использование PGD для определения пола / выбора ребенка запрещено в Индии.^[87][88]

Мексика

С 2006 года клиники в Мексике на законных основаниях предоставляли услуги ПГД.^[89]

Южная Африка

В Южной Африке, где право на репродуктивную свободу является конституционно защищенным правом, было предложено, чтобы государство могло ограничивать PGD только в той степени, в которой выбор родителей может нанести вред будущему ребенку, или в той степени, в которой выбор родителей усугубит социальные предрассудки.^[90]

Украина

Предимплантационная генетическая диагностика разрешена в Украина и с 1 ноября 2013 г. регулируется приказом Минздрава Украины «Об утверждении применения вспомогательных репродуктивных технологий в Украине» от 09.09.2013 № 787. [1].

объединенное Королевство

В Великобритании вспомогательные репродуктивные технологии регулируются Законом об оплодотворении и эмбриологии человека (HFE) от 2008 года. Однако Закон о HFE не затрагивает вопросы, связанные с PGD. Таким образом, Управление HFE (HFEA) было создано в 2003 году, чтобы действовать как национальное регулирующее агентство, которое выдает лицензии и контролирует клиники, предоставляющие PGD. HFEA разрешает использование PGD только в том случае, если соответствующая клиника имеет лицензию от HFEA, и устанавливает правила для этого лицензирования в своем Кодексе практики ([2] ). Каждая клиника и каждое заболевание требуют отдельного заявления, в котором HFEA проверяет пригодность предложенного генетического теста, а также навыки персонала и возможности клиники. Только после этого можно использовать ПГД для пациента.

HFEA строго запрещает выбор пола по социальным или культурным причинам, но позволяет избежать расстройств, связанных с полом. Они заявляют, что ПГД неприемлемо для «социальных или психологических характеристик, нормальных физических изменений или любых других состояний, не связанных с инвалидностью или серьезным заболеванием». Тем не менее, он доступен парам или отдельным лицам с семейным анамнезом серьезных генетических заболеваний.^[91] Тем не менее, HFEA считает, что интерсекс вариации как «серьезное генетическое заболевание», например Дефицит 5-альфа-редуктазы, черта, присущая некоторым элитным спортсменкам.^[92] Сторонники интерсекса утверждают, что такие решения основаны на социальных нормах пола, гендерных и культурных соображениях.^[93]

Соединенные Штаты

В Соединенных Штатах не существует единой системы регулирования вспомогательных репродуктивных технологий, включая генетическое тестирование. Практика и регулирование PGD чаще всего подпадает под действие законов штата или профессиональных инструкций, поскольку федеральное правительство не имеет прямой юрисдикции в отношении медицинской практики. На сегодняшний день ни один штат не ввел в действие законы, непосредственно относящиеся к PGD, поэтому исследователи и клиницисты вынуждены соблюдать правила, установленные профессиональными ассоциациями. В Центр по контролю и профилактике заболеваний (CDC) заявляет, что все клиники, предоставляющие ЭКО должны ежегодно сообщать федеральному правительству об успешной беременности, но сообщать об использовании ПГД и исходах не требуется. Профессиональные организации, такие как Американское общество репродуктивной медицины (ASRM) предоставили ограниченное руководство по этическому использованию PGD.^[94] В Американское общество репродуктивной медицины (ASRM) утверждает, что «ПГД следует рассматривать как устоявшуюся технику со специфическими и расширяющимися возможностями применения в стандартной клинической практике». Они также заявляют: «Хотя использование ПГД для предотвращения заболеваний, связанных с полом, является этичным, использование ПГД исключительно для выбора пола не рекомендуется».^[95]

Ссылки в популярной культуре

• PGD ​​занимает видное место в фильме 1997 года. Гаттака. Действие фильма происходит в мире недалекого будущего, где ПГД / ЭКО - наиболее распространенная форма воспроизведения. В фильме родители обычно используют ПГД для выбора желаемых качеств своих детей, таких как рост, цвет глаз и отсутствие даже самых незначительных генетических предрасположенностей к болезням. Этические последствия PGD исследуются на примере истории главного героя, который сталкивается с дискриминацией, потому что он был зачат без таких методов.
• PGD ​​упоминается в романе 2004 года. Хранитель моей сестры персонажами, поскольку главная героиня, Анна Фицджеральд, была создана с помощью PGD, чтобы быть генетическим совпадением для нее APL положительная сестра Кейт, чтобы она могла пожертвовать костный мозг при рождении, чтобы помочь Кейт бороться с APL. В книге также упоминается, что ее родители подверглись критике за поступок.

Информация на сайтах клиник

В исследовании 135 клиник ЭКО 88% имели веб-сайты, 70% упоминали ПГД, 27% последних были при университетах или больницах, а 63% были частными клиниками. Сайты, упоминающие ПГД, также упоминают использование и преимущества ПГД гораздо больше, чем связанные с ними риски. Из сайтов, упоминающих ПГД, 76% описали тестирование на наличие моногенных заболеваний, но только 35% упомянули риски пропуска целевых диагнозов и только 18% упомянули риски потери эмбриона. 14% назвали ПГД новым или спорным. Частные клиники с большей вероятностью, чем другие программы, перечисляли определенные риски ПГД, такие как, например, диагностическая ошибка, или отмечали, что ПГД было новым или спорным, справочными источниками информации о ПГД, предоставляли уровни точности генетического тестирования эмбрионов и предлагали выбор пола по социальным причинам .^[96]

Смотрите также

• Биоэтика
• Дизайнерская малышка
• Отображение QTL на основе семейства
• Сортировка спермы

Примечания и ссылки

внешняя ссылка

• Интервью с доктором Марком Хьюзом, пионером в области ПГД, о ПГД
• Преимплантационная генетическая диагностика и выбор пола - как это работает в Великобритании?
• Список заболеваний, проверенных в Великобритании по лицензии HFEA
• Скрининг эмбрионов на наличие болезней, Джо Палка @ NPR.org
• Религиозные взгляды на ПГД
• Изображения для преимплантационной генетической диагностики. Изображения биопсии полярного тела и бластомера. Нормальные и ненормальные изображения FISH.