Рибонуклеаза Т1 (EC3.1.27.3, гуанилорибонуклеаза, Рибонуклеаза Aspergillus oryzae, РНКаза N1, РНКаза N2, рибонуклеаза N3, рибонуклеаза U1, рибонуклеаза F1, рибонуклеаза Ch, рибонуклеаза PP1, рибонуклеаза SA, РНКаза F1, рибонуклеаза C2, биназа, РНКаза Sa, гуанил-специфическая РНКаза, РНКаза G, РНКаза Т1, рибонуклеаза гуаниненуклеотидо-2'-трансфераза (циклизующая), рибонуклеаза N3, рибонуклеаза N1) это грибковыйэндонуклеаза который расщепляет одноцепочечный РНК после гуанин остатки, т.е. на их 3'-конце; наиболее часто изучаемая форма этого фермент версия найдена в плесеньAspergillus oryzae. Благодаря своей специфичности к гуанину, РНКаза Т1 часто используется для переваривания денатурированных РНК до секвенирования. Подобно другим рибонуклеазам, таким как Barnase и РНКаза А, рибонуклеаза Т1 был популярен для изучения складок.[2]
Структурно рибонуклеаза Т1 представляет собой небольшой белок α + β (104 аминокислоты ) с четырехцепочечным антипараллельным бета-лист покрывая длинный альфа спираль (почти пять витков). РНКаза Т1 имеет две дисульфидные связи, Cys2-Cys10 и Cys6-Cys103, из которых последняя вносит больший вклад в стабильность его укладки;[3] полное восстановление обоих дисульфидов обычно разворачивает белок, хотя его укладку можно спасти с помощью высоких концентраций соли.[4]
РНКаза Т1 также есть четыре пролины, два из которых (Pro39 и Pro55) имеют СНГизомеры их X-Pro пептидные связи. Ненативные изомеры этих пролинов могут резко замедлять конформационное сворачивание,[5] сворачивание в характерном временном масштабе 7000 секунд (почти два часа) при 10 ° C и pH 5.[6]
^Пейс С. Н., Гримсли Г. Р., Томсон Дж. А., Барнетт Б. Дж. (1988). «Конформационная стабильность и активность рибонуклеазы Т1 с нулевой, одной и двумя неповрежденными дисульфидными связями ». Журнал биологической химии. 263 (24): 11820–11825. PMID2457027.
^Обатаке М., Такахаши С., Оои Т. (1979). «Конформационная стабильность рибонуклеазы Т1. II. Ренатурация, индуцированная солью ». Журнал биохимии. 86: 65–70.
^Майр Л.М., Одефей СО, Шутковский М., Шмид FX (1996). «Кинетический анализ разворачивания и рефолдинга рибонуклеазы Т1 методом двойного перемешивания с остановленным потоком ". Биохимия. 35 (17): 5550–5561. Дои:10.1021 / bi953035y. PMID8611546.