Автономно реплицирующаяся последовательность - Autonomously replicating sequence

An автономно реплицирующаяся последовательность (ARS) содержит начало репликации в дрожжи геном. Он содержит четыре области (A, B1, B2 и B3), названные в порядке их влияния на плазмида стабильность. A-домен является высококонсервативным, любая мутация отменяет функцию происхождения. Мутации в B1, B2 и B3 уменьшат, но не помешают функционированию источника.

Элемент A является высококонсервативным и состоит из консенсусной последовательности:

5'- Т / А Т Т Т А Й Р Т Т Т Т / А -3 '

(куда Y либо пиримидин и р либо пурин ). Когда этот элемент видоизменяется, ARS теряет всякую активность.

Как видно выше, ARS в значительной степени богаты A-T, что позволяет репликативным белкам легко нарушать H-связывание в этой области. Белковый комплекс ORC (комплекс распознавания происхождения ) связана в АРС на всем протяжении клеточный цикл, позволяя репликативным белкам получить доступ к ARS.

Мутационный анализ дрожжевых элементов ARS показал, что любая мутация в областях B1, B2 и B3 приводит к снижению функции элемента ARS. Мутация в области А приводит к полной потере функции.

Плавление ДНК происходит внутри домена B2, индуцированного присоединением фактора связывания 1 ARS к B3.A1, и домен B1 связывается с комплексом распознавания источника.

Чтобы идентифицировать эти последовательности,^[1] дрожжевые мутанты, неспособные синтезировать гистидин были трансформированы плазмидами, содержащими ген His и случайные фрагменты генома дрожжей. Если фрагмент генома содержал точку начала репликации, клетки могли расти в среде без гистидина. Эти последовательности были названы автономно реплицирующимися последовательностями, потому что они реплицировались и унаследовались потомством без интеграции в хозяина. хромосома.

Рекомендации