Геликаза - Helicase

Структура Кишечная палочка геликаза RuvA
ДНК-геликаза
Идентификаторы
Номер ЕС3.6.4.12
Базы данных
IntEnzПросмотр IntEnz
БРЕНДАBRENDA запись
ExPASyПросмотр NiceZyme
КЕГГЗапись в KEGG
MetaCycметаболический путь
ПРИАМпрофиль
PDB структурыRCSB PDB PDBe PDBsum
РНК-геликаза
Идентификаторы
Номер ЕС3.6.4.13
Базы данных
IntEnzПросмотр IntEnz
БРЕНДАBRENDA запись
ExPASyПросмотр NiceZyme
КЕГГЗапись в KEGG
MetaCycметаболический путь
ПРИАМпрофиль
PDB структурыRCSB PDB PDBe PDBsum

Геликасы являются классом ферменты жизненно важно для всех организмы. Их основная функция - распаковывать организм гены. Они есть моторные белки этот ход направленно вдоль нуклеиновая кислота фосфодиэфирный остов, разделяя два отожженный цепи нуклеиновых кислот, такие как ДНК и РНК (следовательно спиральный + -ase ), используя энергию от АТФ гидролиз. Существует множество геликаз, представляющих большое разнообразие процессов, в которых необходимо катализировать разделение цепей. Примерно 1% эукариотических генов кодируют геликазы.[1] В человеческий геном кодирует 95 неизбыточных геликаз: 64 РНК-геликазы и 31 ДНК-геликазы.[2] Многие клеточные процессы, такие как Репликация ДНК, транскрипция, перевод, рекомбинация, Ремонт ДНК, и биогенез рибосом включают разделение цепей нуклеиновой кислоты, что требует использования геликаз.

Функция

Геликазы часто используются для разделения нитей ДНК двойная спираль или самоотжиг РНК молекула, использующая энергию от АТФ гидролиз, процесс, характеризующийся разрушением водородные связи между отожженные нуклеотидные основания. Они также служат для удаления белков, связанных с нуклеиновыми кислотами, и катализируют гомологичные Рекомбинация ДНК.[3] Метаболические процессы РНК, такие как трансляция, транскрипция, биогенез рибосом, Сплайсинг РНК, Транспорт РНК, Редактирование РНК, и деградации РНК способствуют геликазы.[3] Геликазы постепенно перемещаются по одной нуклеиновая кислота прядь дуплекса с направленность и процессивность специфичны для каждого конкретного фермента.

Геликазы принимают разные структуры и олигомеризация состояния. В то время как DnaB -как геликасы раскручиваются ДНК как кольцо гексамеры, другие ферменты проявляют активность как мономеры или же димеры. Исследования показали, что геликазы могут действовать пассивно, ожидая некаталитического раскручивания, а затем перемещаться между смещенными цепями,[4] или может играть активную роль в катализе разделения цепей с использованием энергии, генерируемой при гидролизе АТФ.[5] В последнем случае геликаза действует аналогично активному двигателю, раскручиваясь и перемещаясь вдоль своего субстрата как прямой результат ее АТФазной активности.[6] Геликазы могут обрабатываться намного быстрее in vivo чем in vitro из-за присутствия дополнительных белков, которые способствуют дестабилизации вилочного соединения.[6]

Барьер активации геликазной активности

Действие геликазы в репликации ДНК

Действие ферментной геликазы, такой как раскручивающиеся нуклеиновые кислоты, достигается за счет снижения активационного барьера () каждого конкретного действия.[7] Барьер активации является результатом различных факторов и может быть определен с помощью следующего уравнения, где

= количество развернутых пар оснований (бит / с),

= свободная энергия образования пары оснований,

= уменьшение свободной энергии за счет геликазы, и

= уменьшение свободной энергии из-за сил расстегивания.[7]

Факторы, которые влияют на высоту активационного барьера, включают: специфическую последовательность нуклеиновой кислоты вовлеченной молекулы, количество задействованных пар оснований, натяжение репликационной вилки и силы дестабилизации.[7]

Активные и пассивные геликасы

Размер активационного барьера, преодолеваемого геликазой, способствует ее классификации как активной или пассивной геликазе. В пассивных геликазах существует значительный активационный барьер (определяемый как , куда является Постоянная Больцмана и - температура системы).[7] Из-за этого значительного активационного барьера на его раскручивание в значительной степени влияет последовательность нуклеиновых кислот в молекуле, которая должна раскручиваться, и присутствие дестабилизирующих сил, действующих на репликационную вилку.[7] Определенные комбинации нуклеиновых кислот уменьшают скорость раскрутки (т. Е. гуанин и цитозин ), а различные дестабилизирующие силы могут увеличить скорость разматывания.[7] В пассивных системах скорость разматывания () меньше, чем скорость транслокации () (транслокация по однонитевой нуклеиновой кислоте, ssNA).[7] Другой способ рассмотреть пассивную геликазу - это ее зависимость от временного распутывания пар оснований в репликационной вилке для определения скорости ее раскручивания.[7]

В активных геликазах , где в системе отсутствует значительный барьер, поскольку геликаза способна дестабилизировать нуклеиновые кислоты, раскручивая двойную спираль с постоянной скоростью, независимо от последовательности нуклеиновой кислоты.[7] В активных геликазах примерно равно .[7] Другой способ увидеть активную геликазу - это ее способность напрямую дестабилизировать репликационную вилку, способствуя раскручиванию.[7]

Активные геликазы демонстрируют сходное поведение при воздействии на двухцепочечные нуклеиновые кислоты, дцНК или оцНК в отношении скоростей раскручивания и скоростей транслокации, причем в обеих системах и примерно равны.

Эти две категории геликаз можно также смоделировать как механизмы. В таких моделях пассивные геликазы концептуализируются как броуновские трещотки, управляемые тепловыми флуктуациями и последующими анизотропными градиентами по решетке ДНК. Активные геликасы, напротив, концептуализированы как шаговые двигатели - также известные как электродвигатели с силовым ходом - для продвижения используются либо конформационный «дюймовой червяк», либо ручной «шагающий» механизм.[8] В зависимости от организма такое продвижение по спирали может происходить при скорости вращения в диапазоне 5000 [9] до 10 000 [10] R.P.M.

История ДНК-геликаз

ДНК-геликазы были обнаружены в Кишечная палочка в 1976 г. Эта геликаза была описана как «фермент, раскручивающий ДНК», который, как «было обнаружено, денатурирует дуплексы ДНК в АТФ-зависимой реакции без заметного разложения».[11] Первая эукариотическая ДНК-геликаза была обнаружена в 1978 году в лилии.[12] С тех пор ДНК-геликазы были обнаружены и выделены у других бактерий, вирусов, дрожжей, мух и высших эукариот.[13] К настоящему времени выделено по меньшей мере 14 различных геликаз из одноклеточных организмов, 6 геликаз из бактериофагов, 12 из вирусов, 15 из дрожжей, 8 из растений, 11 из тимуса теленка и примерно 25 геликаз из клеток человека.[14] Ниже приводится история открытия геликазы:

  • 1976 - Открытие и изоляция Кишечная палочкаДНК-геликаза на основе[11]
  • 1978 - Открытие первых геликаз ДНК эукариот, выделенных из лилии.[12]
  • 1982 - «Белок гена Т4 41» - первая известная ДНК-геликаза бактериофага.[13]
  • 1985 - Первые геликазы ДНК млекопитающих, выделенные из тимуса теленка.[15]
  • 1986 - Антиген большой опухоли SV40, описанный как вирусная геликаза (1-й зарегистрированный вирусный белок, который, как было установлено, служит ДНК-геликазой)[16]
  • 1986 - АТФаза III, дрожжевой белок, определенная как ДНК-геликаза[17]
  • 1988 - Обнаружение семи консервативных аминокислотных доменов, которые являются мотивами геликазы.
  • 1989 - Обозначение ДНК-геликазы надсемейства I и надсемейства II[18]
  • 1989 - Идентификация семейства геликазы DEAD box[19]
  • 1990 - Выделение ДНК-геликазы человека[20]
  • 1992 - Выделение первой обнаруженной митохондриальной ДНК-геликазы (из головного мозга крупного рогатого скота)[21]
  • 1996 - Отчет об открытии первой очищенной геликазы ДНК хлоропластов из гороха[22]
  • 2002 - Выделение и характеристика первой биохимически активной ДНК-геликазы малярийного паразита - Плазмодий циномолги.[23]

Конструктивные особенности

Общая функция геликасов заключается в том, что они обладают определенной степенью аминокислота гомология последовательностей; все они обладают последовательность мотивов расположен в интерьере их первичная структура, участвует в АТФ связывание, АТФ гидролиз и перемещение по нуклеиновая кислота субстрат. Переменная часть аминокислота Последовательность связана с особенностями каждой геликазы.

Присутствие этих мотивов геликазы позволяет приписать предполагаемую активность геликазы данному белку, но не обязательно подтверждает ее как активную геликазу. Сохраненные мотивы тем не менее, поддерживают эволюционную гомологию между ферментами. На основе этих мотивов геликазы был выделен ряд суперсемейств геликаз.

Надсемейства

Геликазы классифицируются на 6 групп (суперсемейств) на основе их общих мотивов последовательностей.[24] Геликазы, не образующие кольцевой структуры, находятся в суперсемействах 1 и 2, а образующие кольца геликазы образуют часть суперсемейств с 3 по 6.[25] Геликазы также классифицируются как α или β в зависимости от того, работают ли они с одноцепочечными или двухцепочечными. ДНК; α-геликазы работают с одноцепочечными ДНК и β-геликазы работают с двухцепочечными ДНК. Их также классифицируют по полярности транслокаций. Если происходит транслокация 3’-5 ’, геликаза относится к типу A; если происходит транслокация 5’-3 ’, это тип B.[24]

  • Надсемейство 1 (SF1): Это суперсемейство можно подразделить на геликазы SF1A и SF1B.[24] В этой группе хеликазы могут иметь полярность транслокации либо 3’-5 ’(подсемейство SF1A), либо 5’-3’ (подсемейство SF1B).[24][26] Наиболее известными геликазами SF1A являются Rep и UvrD в грамотрицательный бактерий и геликазы PcrA из грамположительный бактерии.[24] Наиболее известными Helicases в группе SF1B являются геликазы RecD и Dda.[24] У них есть сердцевина сгиба в стиле RecA.[25]
  • Надсемейство 2 (SF2): Это самая большая группа геликаз, участвующих в различных клеточных процессах.[24][27] Они характеризуются наличием девяти консервативных мотивов: Q, I, Ia, Ib и II - VI.[27] В эту группу в основном входят DEAD-бокс-РНК-геликазы.[25] Некоторые другие геликазы, включенные в SF2, представляют собой RecQ-подобное семейство и Snf2-подобные ферменты.[24] Большинство геликаз SF2 относятся к типу A, за некоторыми исключениями, такими как семейство XPD.[24] У них есть сердцевина сгиба, подобная RecA.[25]
  • Надсемейство 3 (SF3): Суперсемейство 3 состоит из геликаз AAA +, кодируемых в основном небольшими ДНК-вирусами и некоторыми крупными нуклеоцитоплазматическими ДНК-вирусами.[28][29] У них 3’-5 ’направленность транслокации, что означает, что все они являются геликазами типа А.[24] Наиболее известной SF3-геликазой является геликаза E1 вируса папилломы.[24]
  • Надсемейство 4 (SF4): Все геликазы семейства SF4 имеют полярность типа B (5’-3 ’). У них есть складка RecA.[24] Наиболее изученной геликазой SF4 является gp4 из бактериофага Т7.[24]
  • Надсемейство 5 (SF5): Ро белки соответствуют группе SF5. У них есть складка RecA.[24]
  • Надсемейство 6 (SF6): Они содержат ядро ​​AAA +, которое не входит в классификацию SF3.[24] Некоторые белки в группе SF6: поддержание мини-хромосомы MCM, RuvB, RuvA и RuvC.[24]

Все геликазы входят в состав P-петли или Мотив Walker -составляющая семья.

Заболевания и геликазы

Мутации геликазы ATRX

В ATRX Ген кодирует АТФ-зависимую геликазу, ATRX (также известную как XH2 и XNP) из семейства подгруппы SNF2, которая, как считается, отвечает за такие функции, как ремоделирование хроматина, регуляция гена и метилирование ДНК.[30][31][32][33] Эти функции помогают предотвратить апоптоз, что приводит к регуляции размера коры, а также способствует выживанию гиппокампа и корковых структур, влияя на память и обучение.[30] Эта геликаза расположена на Х-хромосоме (Xq13.1-q21.1) в перицентромерном гетерохроматине и связывается с гетерохроматиновый белок 1.[30][32] Исследования показали, что ATRX играет роль в метилировании рДНК и важен для эмбрионального развития.[34] Мутации были обнаружены повсюду ATRX белок, причем более 90% из них расположены в доменах цинкового пальца и геликазы.[35] Мутации ATRX могут приводить к X-связанной альфа-талассемии - умственной отсталости (Синдром ATR-X ).[30]

Было обнаружено, что различные типы мутаций, обнаруженные в ATRX, связаны с ATR-X, включая наиболее часто встречающиеся одноосновные миссенс-мутации, а также бессмысленные мутации, мутации со сдвигом рамки считывания и делеционные мутации.[33] Характеристики ATR-X включают: микроцефалию, скелетные и лицевые аномалии, умственную отсталость, генитальные аномалии, судороги, ограниченное использование языка и ограниченные способности, а также альфа-талассемию.[30][36][37] Фенотип, наблюдаемый в ATR-X, предполагает, что мутация гена ATRX вызывает подавление экспрессии генов, таких как гены альфа-глобина.[37] До сих пор неизвестно, что вызывает проявление различных характеристик ATR-X у разных пациентов.[36]

Точечные мутации геликазы XPD

XPD (Фактор D Xeroderma pigmentosum, также известный как белок ERCC2) представляет собой 5'-3 ', суперсемейство II, АТФ-зависимую геликазу, содержащую кластерные домены железо-сера.[38][39] Было показано, что унаследованные точечные мутации в геликазе XPD связаны с нарушениями ускоренного старения, такими как Синдром Кокейна (CS) и трихотиодистрофия (TTD).[40] Синдром Кокейна и трихотиодистрофия являются нарушениями развития, включающими чувствительность к ультрафиолетовому излучению и преждевременное старение, а синдром Кокейна проявляет серьезную умственную отсталость с момента рождения.[40] Мутация геликазы XPD также причастна к пигментная ксеродермия (XP), заболевание, характеризующееся чувствительностью к ультрафиолетовому излучению и приводящее к увеличению в 1000 раз развития рака кожи.[40]

XPD - важный компонент TFIIH комплекс, фактор транскрипции и репарации в клетке.[40][41][42][43][44] В составе этого комплекса облегчает эксцизионная репарация нуклеотидов раскручивая ДНК.[40] TFIIH помогает восстанавливать поврежденную ДНК, например поврежденную солнцем.[40][41][42][43][44] Мутация геликазы XPD, которая помогает формировать этот комплекс и способствует его функции, вызывает чувствительность к солнечному свету, наблюдаемую при всех трех заболеваниях, а также повышенный риск рака, наблюдаемый при XP, и преждевременное старение, наблюдаемое при трихотиодистрофии и синдроме Кокейна.[40]

Мутации геликазы XPD, приводящие к трихотиодистрофии, обнаруживаются по всему белку в различных местах, участвующих в белок-белковых взаимодействиях.[40] Эта мутация приводит к нестабильному белку из-за его неспособности образовывать стабилизирующие взаимодействия с другими белками в точках мутаций.[40] Это, в свою очередь, дестабилизирует весь комплекс TFIIH, что приводит к нарушению механизмов транскрипции и репарации клетки.[40]

Было высказано предположение, что мутации геликазы XPD, ведущие к синдрому Кокейна, могут быть результатом мутаций внутри XPD, вызывающих жесткость белка и последующую неспособность переключиться с функций репарации на функции транскрипции из-за «блокировки» в режиме репарации.[40] Это могло заставить геликазу разрезать сегменты ДНК, предназначенные для транскрипции.[40] Хотя текущие данные указывают на дефект геликазы XPD, приводящий к потере гибкости белка в случаях синдрома Кокейна, до сих пор неясно, как эта структура белка приводит к симптомам, описанным при синдроме Кокейна.[40]

В xeroderma pigmentosa мутация геликазы XPD существует в месте связывания АТФ или ДНК.[40] Это приводит к появлению структурно функциональной геликазы, способной облегчить транскрипцию, однако она подавляет ее функцию по раскручиванию ДНК и репарации ДНК.[40] Отсутствие способности клетки восстанавливать мутации, например, вызванные солнечным повреждением, является причиной высокой частоты рака у пациентов с пигментной ксеродермией.

Мутации семейства RecQ

RecQ геликаза

RecQ геликасы (3'-5 ') принадлежат к группе геликаз суперсемейства II, которые помогают поддерживать стабильность генома и подавляют несоответствующую рекомбинацию.[45][46] Дефициты и / или мутации в геликазах семейства RecQ демонстрируют аберрантную генетическую рекомбинацию и / или репликацию ДНК, что приводит к хромосомной нестабильности и общему снижению способности к пролиферации.[45] Мутации в геликазах семейства RecQ BLM, RECQL4, и WRN, которые играют роль в регуляции гомологичной рекомбинации, как было показано, приводят к аутосомно-рецессивным заболеваниям. Синдром Блума (BS), Синдром Ротмунда-Томсона (RTS) и Синдром Вернера (WS) соответственно.[46][47]

Синдром Блума характеризуется предрасположенностью к раку с ранним началом, средний возраст заболевания составляет 24 года.[46][48] У пациентов с синдромом Блума наблюдается высокая частота реципрокного обмена между сестринскими хроматидами (SCE) и чрезмерное повреждение хромосом.[49] Есть данные, позволяющие предположить, что BLM играет роль в восстановлении нарушенной репликации ДНК в репликационных вилках.[49]

Синдром Вернера - это заболевание преждевременного старения с симптомами, включая раннее начало атеросклероза, остеопороза и других возрастных заболеваний, частую саркому и смерть, часто наступающую от инфаркта миокарда или рака в 4-6 десятилетии жизни.[46][50] Клетки пациентов с синдромом Вернера демонстрируют сокращенную продолжительность репродуктивной жизни из-за хромосомных разрывов и транслокаций, а также больших делеций хромосомных компонентов, вызывающих нестабильность генома.[50]

Синдром Ротмунда-Томсона, также известный как врожденная пойкилодермия, характеризуется преждевременным старением, кожными и скелетными аномалиями, сыпью, пойкилодермия, ювенильная катаракта и предрасположенность к онкологическим заболеваниям, таким как остеосаркома.[46][51] Хромосомные перестройки, вызывающие нестабильность генома, обнаруживаются в клетках пациентов с синдромом Ротмунда-Томсона.[51]

Мейотическая рекомбинация

В течение мейоз Двухцепочечные разрывы ДНК и другие Повреждения ДНК в хроматида ремонтируются гомологичная рекомбинация используя либо сестринская хроматида или гомологичная несестринская хроматида в качестве матрицы. Этот ремонт может привести к кроссовер (CO) или, что чаще, рекомбинантный неперекрестный (NCO). В дрожжах Schizosaccharomyces pombe в FANCM -семейная ДНК-геликаза FmI1 направляет образование рекомбинации NCO во время мейоза.[52] В Геликаза RecQ-типа Rqh1 также управляет мейотической рекомбинацией NCO.[53] Эти геликасы благодаря своей способности расслабляться D-петля промежуточные продукты, способствуют рекомбинации NCO в процессе отжиг прядей, зависящий от синтеза.

На заводе Arabidopsis thaliana, Геликаза FANCM способствует NCO и препятствует образованию рекомбинантов CO.[54] Другая геликаза, RECQ4A / B, также независимо снижает CO. Было высказано предположение, что CO ограничены из-за долгосрочной стоимости рекомбинации CO, то есть разрушения благоприятных генетических комбинаций аллелей, созданных прошлым естественный отбор.[54]

РНК-геликазы

Геликаза DEAD-box РНК человека
А
На этом изображении представлены различные промоторные последовательности и дополнительные домены, которые способствуют раскручиванию РНК (локальное разделение цепей). Области, выделенные красным, представляют собой домены связывания АТФ, а области, отмеченные желтым цветом, - домены взаимодействия РНК. Также присутствуют специфические последовательности, называемые DEAD-бокс-белками, которые помогают катализировать реакции, в которых не требуется прямой гидролиз АТФ, если он связывается с доменами цепи.

РНК-геликазы необходимы для большинства процессов метаболизма РНК, таких как рибосома биогенез, сплайсинг пре-мРНК и перевод инициация. Они также играют важную роль в обнаружении вирусных РНК.[55] РНК-геликазы участвуют в обеспечении противовирусного иммунного ответа, поскольку они могут идентифицировать чужеродные РНК у позвоночных. Около 80% всех вирусов являются РНК-вирусами и содержат собственные РНК-геликазы.[56] Дефектные РНК-геликазы связывают с раком, инфекционными заболеваниями и нейродегенеративными расстройствами.[55] Некоторые неврологические расстройства, связанные с дефектными РНК-геликазами: боковой амиотрофический склероз, спинальная мышечная атрофия, спиноцеребеллярная атаксия типа 2, болезнь Альцгеймера, и синдром смертельной врожденной контрактуры.[56]

РНК-геликазы и ДНК-геликазы можно найти вместе во всех суперсемействах геликаз, за ​​исключением SF6.[57][58] Все эукариотические РНК-геликазы, которые были идентифицированы на сегодняшний день, не образуют кольца и являются частью SF1 и SF2. С другой стороны, кольцевые РНК-геликазы были обнаружены у бактерий и вирусов.[55] Однако не все РНК-геликазы проявляют геликазную активность, определяемую ферментативной функцией, то есть белки семейства Swi / Snf. Хотя эти белки несут типичные мотивы геликазы, гидролизуют АТФ зависимым от нуклеиновых кислот образом и построены вокруг ядра геликазы, в общем, никакой раскручивающей активности не наблюдается.[59]

РНК-геликазы, которые действительно проявляют раскручивающую активность, характеризуются по крайней мере двумя различными механизмами: каноническим раскручиванием дуплекса и локальным разделением цепи. Каноническая дуплексная раскрутка - это ступенчатое направленное разделение дуплексной цепи, как описано выше, для раскручивания ДНК. Однако локальное разделение цепей происходит в процессе, при котором фермент геликаза загружается в любом месте дуплекса. Обычно этому способствует одноцепочечный участок РНК, а загрузка фермента сопровождается связыванием АТФ.[60] Как только геликаза и АТФ связываются, происходит локальное разделение цепи, которое требует связывания АТФ, но не фактического процесса гидролиза АТФ.[61] Дуплекс, представленный меньшим количеством пар оснований, затем диссоциирует без дополнительной помощи со стороны фермента. Этот режим разматывания используется Геликалы DEAD / DEAH box.[62]

База данных РНК-геликазы[63] в настоящее время доступен в Интернете, который содержит исчерпывающий список РНК-геликаз с такой информацией, как последовательность, структура, биохимические и клеточные функции.[55]

Диагностические инструменты для измерения геликазы

Измерение и мониторинг активности геликазы

Для измерения активности геликазы используются различные методы. in vitro. Эти методы варьируются от качественных (анализы, которые обычно приводят к результатам, не включающим значений или измерений) до количественных (анализы с числовыми результатами, которые можно использовать в статистическом и числовом анализе). В 1982–1983 годах был разработан первый прямой биохимический анализ для измерения активности геликазы.[13][64] Этот метод получил название «анализ смещения цепи».

  • Анализ смещения нити включает радиоактивная маркировка дуплексов ДНК. После обработки геликазой одноцепочечная ДНК визуально обнаруживается как отдельная от двухцепочечной ДНК неденатурирующими методами. СТРАНИЧНЫЙ электрофорез. После обнаружения одноцепочечной ДНК количество радиоактивной метки, которая находится на одноцепочечной ДНК, определяется количественно, чтобы получить числовое значение для количества раскручивания двухцепочечной ДНК.
Анализ смещения цепи приемлем для качественного анализа, его неспособность отображать результаты для более чем одной временной точки, его затраты времени и его зависимость от радиоактивных соединений для маркировки обусловили необходимость разработки диагностических средств, которые могут отслеживать активность геликазы в реальном времени. .

Позже были разработаны другие методы, которые включали в себя некоторые, если не все, из следующего: высокопроизводительную механику, использование нерадиоактивной маркировки нуклеотидов, более быстрое время реакции / меньшее потребление времени, мониторинг активности геликазы в реальном времени (с использованием вместо этого кинетических измерений). анализа конечных точек / отдельных точек). Эти методологии включают в себя: «метод быстрого гашения потока, анализы на основе флуоресценции, анализы фильтрации, сцинтилляционный анализ близости, время решено флуоресцентный резонансный перенос энергии анализ, анализ, основанный на технологии флэш-планшетов, гомогенные анализы гашения флуоресценции с временным разрешением и анализы геликазы на основе электрохемилюминесценции ».[14] С использованием специализированных математических уравнений некоторые из этих анализов можно использовать для определения, сколько спаренных оснований нуклеотидов хеликаза может разрушить за гидролиз 1 молекулы АТФ.[65]

Также доступны коммерчески доступные диагностические наборы. Одним из таких наборов является диагностический тест Trupoint от ПеркинЭлмер, Inc. Этот анализ представляет собой анализ тушения флуоресценции с временным разрешением, в котором используется технология PerkinEmer «SignalClimb», основанная на двух метках, которые связываются в непосредственной близости друг от друга, но на противоположных цепях ДНК. Одна метка представляет собой флуоресцентный хелат лантаноида, который служит меткой, за которой следят с помощью адекватного 96/384-луночного ридера для планшетов. Другая метка - это молекула органического тушителя. В основе этого анализа лежит «гашение» или подавление сигнала хелата лантаноида органической молекулой гасителя, когда они находятся в непосредственной близости - как это было бы, когда дуплекс ДНК находится в нативном состоянии. При активности геликазы на дуплексе метки тушителя и лантанида разделяются по мере разматывания ДНК. Эта потеря близости сводит на нет способность гасителей подавлять сигнал лантаноида, вызывая обнаруживаемое увеличение флуоресценции, которое является репрезентативным для количества размотанной ДНК и может использоваться в качестве количественного измерения активности геликазы. Выполнение и использование флуоресценции одиночных молекул. методы визуализации, с упором на методы, которые включают оптическое улавливание в сочетании с эпифлуоресцентной визуализацией, а также иммобилизацию поверхности в сочетании с визуализацией флуоресценции полного внутреннего отражения. В сочетании с микроканальными проточными кюветами и микрофлюидным контролем, позволяет визуализировать и отслеживать отдельные флуоресцентно меченые молекулы белка и ДНК, обеспечивая измерение раскручивания и транслокации ДНК с разрешением до одной молекулы.[66]

Определение полярности геликазы

Полярность геликазы, которую также называют «направленностью», определяется как направление (характеризуемое как 5 '→ 3' или 3 '→ 5') движения геликазы на однонитевой ДНК / РНК, вдоль которой она движется. Это определение полярности жизненно важно, например, в случаях. определение того, прикрепляется ли тестируемая геликаза к ведущей цепи ДНК или к отстающей цепи ДНК. Чтобы охарактеризовать эту особенность геликазы, частично дуплексная ДНК используется в качестве субстрата, который имеет центральную одноцепочечную область ДНК с разными длинами дуплексных областей ДНК (одна короткая область, которая проходит 5 '→ 3', и одна более длинная область, которая проходит через 3 '→ 5') по обе стороны от этой области.[67] Как только геликаза добавляется к этой центральной одноцепочечной области, полярность определяется характеристикой вновь образованной одноцепочечной ДНК.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ У И (2012). «Размотка и перемотка: двойные грани геликазы?». J нуклеиновые кислоты. 2012: 1–14. Дои:10.1155/2012/140601. ЧВК  3409536. PMID  22888405.
  2. ^ Уматэ П., Тутея Н., Тутея Р. (январь 2011 г.). «Полногеномный комплексный анализ геликаз человека». Коммуна Интегр Биол. 4 (1): 118–37. Дои:10.4161 / cib.13844. ЧВК  3073292. PMID  21509200.
  3. ^ а б Patel, S. S .; Донмез, я (2006). «Механизмы геликозов». Журнал биологической химии. 281 (27): 18265–18268. Дои:10.1074 / jbc.R600008200. ISSN  0021-9258. PMID  16670085.
  4. ^ Лионнет Т., Спиринг М.М., Бенкович С.Дж., Бенсимон Д., Крокетт V (2007). «Наблюдение в реальном времени за геликазой бактериофага T4 gp41 показывает механизм раскрутки». PNAS. 104 (50): 19790–19795. Bibcode:2007ПНАС..10419790Л. Дои:10.1073 / pnas.0709793104. ЧВК  2148377. PMID  18077411.
  5. ^ Джонсон Д.С., Бай Л., Смит Б.А., Патель С.С., Ван М.Д. (2007). «Исследования одиночных молекул показывают динамику раскручивания ДНК кольцевой геликазой t7». Клетка. 129 (7): 1299–309. Дои:10.1016 / j.cell.2007.04.038. ЧВК  2699903. PMID  17604719.
  6. ^ а б «Исследователи разгадывают тайну разделения цепей ДНК». 2007-07-03. Получено 2007-07-05.
  7. ^ а б c d е ж грамм час я j k Маносас М., Си XG, Бенсимон Д., Крокетт V (сентябрь 2010 г.). «Активные и пассивные механизмы геликазов». Нуклеиновые кислоты Res. 38 (16): 5518–26. Дои:10.1093 / nar / gkq273. ЧВК  2938219. PMID  20423906.
  8. ^ Wu, C.G. и Spies, M .: Обзор: Что такое Helicases? В: Шпионы, М. (Ред.): [1]. Springer Science + Business Media, Нью-Йорк, 2013 г.
  9. ^ "Биохимия Кевина Ахерна (BB 451/551) в Государственном университете Орегона". oregonstate.edu.
  10. ^ Библиотека трехмерной анимации; Репликация: [2] (Передовой)
  11. ^ а б Абдель-Монем М., Дюрвальд Х., Хоффманн-Берлинг Х. (июнь 1976 г.). «Ферментное раскручивание ДНК. 2. Разделение цепи АТФ-зависимым ферментом раскручивания ДНК». Евро. J. Biochem. 65 (2): 441–9. Дои:10.1111 / j.1432-1033.1976.tb10359.x. PMID  133023.
  12. ^ а б Хотта И., Стерн Х (май 1978 г.). «Белок, раскручивающий ДНК из мейотических клеток Lilium». Биохимия. 17 (10): 1872–80. Дои:10.1021 / bi00603a011. PMID  207302.
  13. ^ а б c Венкатесан М., Сильвер LL, Носсал Н.Г. (октябрь 1982 г.). «Белок гена 41 бактериофага Т4, необходимый для синтеза праймеров РНК, также является ДНК-геликазой». J. Biol. Chem. 257 (20): 12426–34. PMID  6288720.
  14. ^ а б Tuteja N, Tuteja R (май 2004 г.). «Прокариотические и эукариотические ДНК-геликазы. Основные молекулярные моторные белки для клеточного аппарата». Евро. J. Biochem. 271 (10): 1835–48. Дои:10.1111 / j.1432-1033.2004.04093.x. ЧВК  7164108. PMID  15128294.
  15. ^ Hubscher U, Stalder HP (1985). «ДНК-геликаза млекопитающих». Нуклеиновые кислоты Res. 13 (15): 5471–5483. Дои:10.1093 / nar / 13.15.5471. ЧВК  321884. PMID  3162158.
  16. ^ Шталь Х, Дрёге П., Книпперс Р. (август 1986 г.). «ДНК-геликазная активность антигена большой опухоли SV40». EMBO J. 5 (8): 1939–44. Дои:10.1002 / j.1460-2075.1986.tb04447.x. ЧВК  1167061. PMID  3019672.
  17. ^ Сугино А., Рю Б.Х., Сугино Т., Наумовски Л., Фридберг Е.С. (сентябрь 1986 г.). «Новая ДНК-зависимая АТФаза, которая стимулирует дрожжевую ДНК-полимеразу I и обладает ДНК-раскручивающей активностью». J. Biol. Chem. 261 (25): 11744–50. PMID  3017945.
  18. ^ Горбаленя Ǣ, Кунин Е.В., Донченко А.П., Блинов В.М. (июнь 1989 г.). «Два родственных суперсемейства предполагаемых геликаз, участвующих в репликации, рекомбинации, репарации и экспрессии геномов ДНК и РНК». Нуклеиновые кислоты Res. 17 (12): 4713–30. Дои:10.1093 / nar / 17.12.4713. ЧВК  318027. PMID  2546125.
  19. ^ Линдер П., Ласко П.Ф., Эшбернер М., Лерой П., Нильсон П.Дж., Ниши К., Шнейр Дж., Слонимски П.П. (1989) Рождение МЕРТВОЙ коробки. Nature (Лондон) 337, 121-122.
  20. ^ Tuteja N, Tuteja R, Rahman K, Kang LY, Falaschi A (декабрь 1990 г.). «ДНК-геликаза из клеток человека». Нуклеиновые кислоты Res. 18 (23): 6785–92. Дои:10.1093 / nar / 18.23.6785. ЧВК  332732. PMID  1702201.
  21. ^ Хеман Г.Л., Hauswirth WW (сентябрь 1992 г.). «ДНК-геликаза из митохондрий млекопитающих». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 89 (18): 8562–6. Bibcode:1992PNAS ... 89.8562H. Дои:10.1073 / пнас.89.18.8562. ЧВК  49960. PMID  1326759.
  22. ^ Tuteja N, Phan TN, Tewari KK (май 1996 г.). «Очистка и характеристика ДНК-геликазы из хлоропластов гороха, которая перемещается в направлении 3'-к-5 '». Евро. J. Biochem. 238 (1): 54–63. Дои:10.1111 / j.1432-1033.1996.0054q.x. PMID  8665952.
  23. ^ Тутея Р., Малхотра П., Сонг П., Тутежа Н., Чаухан В.С. (2002). «Выделение и характеристика гомолога eIF-4A из Plasmodium cynomolgi». Мол. Biochem. Паразитол. 124 (1–2): 79–83. Дои:10.1016 / S0166-6851 (02) 00205-0. PMID  12387853.
  24. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м п о п Мартин Синглтон; Марк С. Диллингем; Дейл Б. Вигли (2007). «Структура и механизм геликаз и транслоказ нуклеиновых кислот». Ежегодный обзор биохимии. 76: 23–50. Дои:10.1146 / annurev.biochem.76.052305.115300. PMID  17506634.
  25. ^ а б c d Маргарет Э. Фэйрман-Уильямс; Ульф-Петер Гюнтер; Эчард Янковский (2010). «Геликасы SF1 и SF2: дела семейные». Текущее мнение в структурной биологии. 20 (3): 313–324. Дои:10.1016 / j.sbi.2010.03.011. ЧВК  2916977. PMID  20456941.
  26. ^ Стелтер М., Акаджауи С., МакСвини С., Тимминс Дж. (2013). «Структурное и механическое понимание разматывания ДНК Deinococcus radiodurans UvrD». PLOS One. 8 (10): e77364. Bibcode:2013PLoSO ... 877364S. Дои:10.1371 / journal.pone.0077364. ЧВК  3797037. PMID  24143224.
  27. ^ а б Паван Умате; Нарендра Тутеджа; Рену Тутеха (2011). «Полногеномный комплексный анализ геликаз человека». Коммуникативная и интегративная биология. 4 (1): 118–137. Дои:10.4161 / cib.13844. ЧВК  3073292. PMID  21509200.
  28. ^ Кунин Э.В., Аравинд Л., Айер Л.М. (2001). «Общее происхождение четырех различных семейств больших эукариотических ДНК-вирусов». Дж. Вирол. 75 (23): 11720–34. Дои:10.1128 / JVI.75.23.11720-11734.2001. ЧВК  114758. PMID  11689653.
  29. ^ Кунин Э.В., Аравинд Л., Лейпе Д.Д., Айер Л.М. (2004). «История эволюции и классификация ААА + АТФаз более высокого порядка». J. Struct. Биол. 146 (1–2): 11–31. Дои:10.1016 / j.jsb.2003.10.010. PMID  15037234.
  30. ^ а б c d е Роперс Х. Х., Хамель Британская Колумбия (январь 2005 г.). «Х-сцепленная умственная отсталость». Nat. Преподобный Жене. 6 (1): 46–57. Дои:10.1038 / nrg1501. PMID  15630421.
  31. ^ Гиббонс Р. Дж., Пикетс Д. Д., Виллард Л., Хиггс Д. Р. (март 1995 г.). «Мутации в предполагаемом глобальном регуляторе транскрипции вызывают Х-сцепленную умственную отсталость с синдромом альфа-талассемии ATR-X». Клетка. 80 (6): 837–45. Дои:10.1016/0092-8674(95)90287-2. PMID  7697714.CS1 maint: использует параметр авторов (связь)
  32. ^ а б Онлайн-база данных белков Nextprot. «ATRX-Транскрипционный регулятор ATRX»., Проверено 12 ноября 2012 г.
  33. ^ а б Пикетс DJ, Хиггс Д.Р., Бачу С., Блейк Д.И., Куоррелл О.В., Гиббонс Р.Дж. (декабрь 1996 г.). «ATRX кодирует новый член семейства белков SNF2: мутации указывают на общий механизм, лежащий в основе синдрома ATR-X». Гм. Мол. Genet. 5 (12): 1899–907. Дои:10.1093 / hmg / 5.12.1899. PMID  8968741.CS1 maint: использует параметр авторов (связь)
  34. ^ Гиббонс Р. (2006). «Альфа-талассемия - умственная отсталость, Х сцепленный». Орфанет Дж. Редкие Диск.. 1: 15. Дои:10.1186/1750-1172-1-15. ЧВК  1464382. PMID  16722615.
  35. ^ Пагон Р.А., Берд Т.Д., Долан С.Р., Стивенс К., Адам М.П., ​​Стивенсон Р.Э. (1993). «Синдром интеллектуальной инвалидности, связанный с альфа-талассемией X». PMID  20301622. Цитировать журнал требует | журнал = (помощь)
  36. ^ а б Гиббонс Р. (2006). «Альфа-талассемия - умственная отсталость, Х сцепленный». Орфанет Дж. Редкие Диск.. 1: 15. Дои:10.1186/1750-1172-1-15. ЧВК  1464382. PMID  16722615.
  37. ^ а б Гиббонс Р. Дж., Пикетс Д. Д., Виллард Л., Хиггс Д. Р. (март 1995 г.). «Мутации в предполагаемом глобальном регуляторе транскрипции вызывают Х-сцепленную умственную отсталость с альфа-талассемией (синдром ATR-X)». Клетка. 80 (6): 837–45. Дои:10.1016/0092-8674(95)90287-2. PMID  7697714.
  38. ^ Синглтон MR, Dillingham MS, Wigley DB (2007). «Структура и механизм геликаз и транслоказ нуклеиновых кислот». Анну. Преподобный Biochem. 76: 23–50. Дои:10.1146 / annurev.biochem.76.052305.115300. PMID  17506634.
  39. ^ Рудольф Дж., Руийон С., Шварц-Линек У., Уайт М.Ф. (январь 2010 г.). «Хеликаза XPD раскручивает пузырьковые структуры и не блокируется повреждениями ДНК, удаляемыми путем эксцизионной репарации нуклеотидов». Нуклеиновые кислоты Res. 38 (3): 931–41. Дои:10.1093 / нар / gkp1058. ЧВК  2817471. PMID  19933257.
  40. ^ а б c d е ж грамм час я j k л м п о Фан Л, Фусс Дж.О., Ченг QJ, Арвай А.С., Хаммель М., Робертс В.А., Купер П.К., Тайнер Дж. А. (май 2008 г.). «Структуры и активность геликазы XPD: понимание фенотипов рака и старения в результате мутаций XPD». Клетка. 133 (5): 789–800. Дои:10.1016 / j.cell.2008.04.030. ЧВК  3055247. PMID  18510924.
  41. ^ а б Лайне Дж. П., Моке В., Эгли Дж. М. (2006). Ферментативная активность TFIIH в транскрипции и эксцизионной репарации нуклеотидов. Meth. Энзимол. Методы в энзимологии. 408. С. 246–63. Дои:10.1016 / S0076-6879 (06) 08015-3. ISBN  9780121828134. PMID  16793373.
  42. ^ а б Тирод Ф., Буссо Д., Монета Ф., Эгли Дж. М. (январь 1999 г.). «Восстановление фактора транскрипции TFIIH: назначение функций трех ферментативных субъединиц, XPB, XPD и cdk7». Мол. Клетка. 3 (1): 87–95. Дои:10.1016 / S1097-2765 (00) 80177-X. PMID  10024882.CS1 maint: использует параметр авторов (связь)
  43. ^ а б Сун П., Байи В., Вебер С., Томпсон Л. Х., Пракаш Л., Пракаш С. (октябрь 1993 г.). «Ген группы D человека xeroderma pigmentosum кодирует ДНК-геликазу». Природа. 365 (6449): 852–5. Bibcode:1993Натура.365..852С. Дои:10.1038 / 365852a0. PMID  8413672.
  44. ^ а б Шеффер Л., Рой Р., Хумберт С., Монколлин В., Вермёлен В., Хоймейкерс Дж. Х., Шамбон П., Эгли Дж. М. (апрель 1993 г.). «Хеликаза репарации ДНК: компонент основного фактора транскрипции BTF2 (TFIIH)». Наука. 260 (5104): 58–63. Bibcode:1993Наука ... 260 ... 58С. Дои:10.1126 / science.8465201. PMID  8465201.
  45. ^ а б Ханада К., Hickson ID (сентябрь 2007 г.). «Молекулярная генетика нарушений геликазы RecQ». Клетка. Мол. Life Sci. 64 (17): 2306–22. Дои:10.1007 / s00018-007-7121-z. PMID  17571213.
  46. ^ а б c d е Опреско П.Л., Ченг У.Х., Бор В.А. (апрель 2004 г.). «Соединение биохимии геликазы RecQ и болезни человека». J. Biol. Chem. 279 (18): 18099–102. Дои:10.1074 / jbc.R300034200. PMID  15023996.
  47. ^ Оуян К.Дж., Ву Л.Л., Эллис Н.А. (2008). «Гомологичная рекомбинация и поддержание целостности генома: рак и старение через призму геликаз RecQ человека». Мех. Старение Дев. 129 (7–8): 425–40. Дои:10.1016 / j.mad.2008.03.003. PMID  18430459.
  48. ^ Эллис Н.А., Гроден Дж., Йе Т.З., Штраген Дж., Леннон Д.Д., Чоччи С., Пройчева М., Герман Дж. (Ноябрь 1995 г.). «Продукт гена синдрома Блума гомологичен геликазам RecQ». Клетка. 83 (4): 655–66. Дои:10.1016/0092-8674(95)90105-1. PMID  7585968.
  49. ^ а б Селак Н., Бахрати Ч.З., Шевелев И., Дитши Т., ван Лун Б., Якоб А., Хюбшер У., Хохейзель Д.Д., Хиксон И.Д., Стаглир I (сентябрь 2008 г.). «Хеликаза синдрома Блума (BLM) физически и функционально взаимодействует с p12, наименьшей субъединицей дельта ДНК-полимеразы человека». Нуклеиновые кислоты Res. 36 (16): 5166–79. Дои:10.1093 / nar / gkn498. ЧВК  2532730. PMID  18682526.
  50. ^ а б Gray MD, Shen JC, Kamath-Loeb AS, Blank A, Sopher BL, Martin GM, Oshima J, Loeb LA (сентябрь 1997 г.). «Белок синдрома Вернера - это ДНК-геликаза». Nat. Genet. 17 (1): 100–3. Дои:10.1038 / ng0997-100. PMID  9288107.
  51. ^ а б Китао С., Шимамото А., Гото М., Миллер Р. В., Смитсон В. А., Линдор Н. М., Фуруичи Ю. (май 1999 г.). «Мутации в RECQL4 вызывают подмножество случаев синдрома Ротмунда-Томсона». Nat. Genet. 22 (1): 82–4. Дои:10.1038/8788. PMID  10319867.
  52. ^ Лоренц А., Осман Ф., Сан В., Нанди С., Штайнахер Р., Уитби М.С. (июнь 2012 г.). «Ортолог FANCM делящихся дрожжей управляет рекомбинацией без кроссовера во время мейоза». Наука. 336 (6088): 1585–8. Bibcode:2012Научный ... 336.1585L. Дои:10.1126 / science.1220111. ЧВК  3399777. PMID  22723423.
  53. ^ Лоренц А., Мехатс, Осман Ф., Уитби М.С. (декабрь 2014 г.). «Паралоги и медиаторы Rad51 / Dmc1 противостоят ДНК-геликазам, чтобы ограничить образование гибридной ДНК и способствовать кроссинговерам во время мейотической рекомбинации». Нуклеиновые кислоты Res. 42 (22): 13723–35. Дои:10.1093 / нар / gku1219. ЧВК  4267644. PMID  25414342.
  54. ^ а б Сегела-Арно М., Крисмани В., Ларшевек С., Мазель Дж., Фрогер Н., Шойнар С., Лемхемди А., Макайсн Н., Ван Леин Дж., Геверт К., Де Джагер Дж., Челышева Л., Мерсье Р. (апрель 2015 г.). «Множественные механизмы ограничивают мейотические кроссоверы: TOP3α и два гомолога BLM противодействуют кроссоверам параллельно с FANCM». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 112 (15): 4713–8. Bibcode:2015ПНАС..112.4713С. Дои:10.1073 / pnas.1423107112. ЧВК  4403193. PMID  25825745.
  55. ^ а б c d Янковский, А .; Guenther, U. -P .; Янковский, Э. (2010). «База данных РНК-геликазы». Исследования нуклеиновых кислот. 39 (Проблема с базой данных): D338 – D341. Дои:10.1093 / nar / gkq1002. ЧВК  3013637. PMID  21112871.
  56. ^ а б Steimer, L .; Клостермайер, Д. (2012). «РНК-геликазы при инфекциях и болезнях». РНК Биология. 9 (6): 751–771. Дои:10.4161 / rna.20090. PMID  22699555.
  57. ^ Янковский E, Fairman-Williams ME (2010). «Введение в РНК-геликазы: суперсемейства, семейства и основные темы». В Jankowsky E (ред.). РНК-геликазы (RSC Biomolecular Sciences). Кембридж, Англия: Королевское химическое общество. п. 5. ISBN  978-1-84755-914-2.
  58. ^ Ранджи, А .; Борис-Лори, К. (2010). «РНК-геликазы: новые роли в вирусной репликации и врожденном ответе хозяина». РНК Биология. 7 (6): 775–787. Дои:10.4161 / rna.7.6.14249. ЧВК  3073335. PMID  21173576.
  59. ^ Янковский Э. (январь 2011). «РНК-геликазы в действии: связывание и перестройка». Trends Biochem. Наука. 36 (1): 19–29. Дои:10.1016 / j.tibs.2010.07.008. ЧВК  3017212. PMID  20813532.
  60. ^ Ян К., Дель Кампо М., Ламбовиц А.М., Янковский Э. (октябрь 2007 г.). «Белки DEAD-бокса раскручивают дуплексы путем локального разделения цепей». Мол. Клетка. 28 (2): 253–63. Дои:10.1016 / j.molcel.2007.08.016. PMID  17964264.
  61. ^ Лю Ф., Патнэм А., Янковский Э. (декабрь 2008 г.). «Гидролиз АТФ необходим для рециклинга белка DEAD-бокса, но не для дуплексной размотки». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 105 (51): 20209–14. Bibcode:2008ПНАС..10520209Л. Дои:10.1073 / pnas.0811115106. ЧВК  2629341. PMID  19088201.
  62. ^ Ярмоскайте I, Рассел Р. (2011). «Белки DEAD-бокса как РНК-геликазы и шапероны». РНК Wiley Interdiscip Rev. 2 (1): 135–52. Дои:10.1002 / wrna.50. ЧВК  3032546. PMID  21297876.
  63. ^ "Индекс /". www.rnahelicase.org. Архивировано из оригинал на 2014-12-18. Получено 2012-12-07.
  64. ^ Matson SW, Tabor S, Richardson CC (ноябрь 1983 г.). «Белок гена 4 бактериофага Т7. Характеристика геликазной активности». J. Biol. Chem. 258 (22): 14017–24. PMID  6315716.
  65. ^ Сарлош К., Дьимеши М., Ковач М. (июнь 2012 г.). «Хеликаза RecQ перемещается по одноцепочечной ДНК с умеренной процессивностью и прочной механохимической связью». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 109 (25): 9804–9. Bibcode:2012PNAS..109.9804S. Дои:10.1073 / pnas.1114468109. ЧВК  3382518. PMID  22665805.
  66. ^ Паванкумар, Т. Л .; Exell, J. C .; Ковальчиковски, С. К. (1 января 2016 г.). Глава первая - Прямая флуоресцентная визуализация транслокации и разматывания отдельными ДНК-геликазами. Методы в энзимологии. 581. С. 1–32. Дои:10.1016 / bs.mie.2016.09.010. ISBN  9780128092675. ЧВК  5854184. PMID  27793277.
  67. ^ Боровец, Дж. (1996) Репликация ДНК в эукариотических клетках. Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк. 545–574

внешняя ссылка