Химера (генетика) - Chimera (genetics)

Эта статья о генетическом химеризме. Для хрящевой рыбы см. Химера. Для мифологического зверя см. Химера (мифология).
Двухцветная роза химера

А генетический химеризм или химера (/ kaɪˈmɪərə / ky-MEER-ə или / kɪˈmɪərə / kə-MEER-ə, также химера (Chimæra)) представляет собой единый организм, состоящий из клеток с более чем одним отдельным генотип. У животных это означает особь, полученную от двух или более зиготы, который может включать владение клетки крови разных группы крови, тонкие вариации формы (фенотип ) и, если зиготы были разных полов, то даже обладание как женскими, так и мужскими половые органы[1] (это лишь одно из многих явлений, которые могут привести к интерсексуальность ). Химеры животных получаются путем слияния нескольких оплодотворенных яиц. Однако у химер растений разные типы тканей могут происходить из одного и того же зигота, и разница часто возникает из-за мутация во время обычных деление клеток. Обычно генетический химеризм не виден при случайном осмотре; однако это было обнаружено в ходе доказательства отцовства.[2]

Другой способ, которым химеризм может возникнуть у животных, - это орган трансплантация, дающая отдельные ткани, которые развились из другого генома. Например, трансплантация Костный мозг часто определяет последующий группа крови.

Животные

Химера животных - это одиночный организм который состоит из двух или более разных популяций генетически разных клетки возникшие из разных зиготы участвует в половое размножение. Если разные клетки вышли из одной зиготы, организм называется мозаика. Химеры образуются по крайней мере из четырех родительских клеток (двух оплодотворенных яиц или слитых вместе ранних эмбрионов). Каждая популяция клеток сохраняет свой характер, и в результате организм представляет собой смесь тканей. Задокументированы случаи химеризма человека.[1]

Это состояние либо передается по наследству, либо приобретается в результате вливания аллогенный гемопоэтические клетки в течение трансплантация или переливание. У неидентичных близнецов химеризм возникает через кровеносные сосуды. анастомозы. Вероятность того, что потомство станет химерой, увеличивается, если оно создано через экстракорпоральное оплодотворение.[3] Химеры часто могут размножаться, но плодовитость и тип потомства зависят от того, какая линия клеток дала начало яичникам или семенникам; разная степень интерсекс различия могут возникнуть, если один набор клеток является генетически женским, а другой - мужским.

Тетрагаметический химеризм

Тетрагаметический химеризм - это форма врожденного химеризма. Это состояние возникает в результате оплодотворения двух отдельных яйцеклеток двумя сперматозоидами с последующим их агрегацией. бластоциста или стадии зиготы. Это приводит к развитию организма со смешанными клеточными линиями. Другими словами, химера образуется в результате слияния двух неидентичные близнецы (подобное слияние предположительно происходит с однояйцевыми близнецами, но, поскольку их генотипы существенно не различаются, полученная особь не будет считаться химерой). Таким образом, они могут быть мужчинами, женщинами или иметь смешанные интерсексуальные характеристики.[4][5][6][7][8][3][9]

По мере развития организм может приобретать органы которые имеют разные наборы хромосомы. Например, химера может иметь печень состоит из клеток с одним набором хромосом и имеет почка состоит из клеток со вторым набором хромосом. Это произошло у людей и одно время считалось чрезвычайно редким, хотя более свежие данные свидетельствуют о том, что это не так.[1][10]

Это особенно верно для мартышка. Недавние исследования показывают, что большинство мартышек - химеры, разделяющие ДНК со своими двойняшек.[11] 95% разнояйцовых близнецов мартышек обмениваются кровью через хорионический слияния, делая их кроветворный химеры.[12][13]

Большинство химер проживут жизнь, не осознавая, что они химеры. Разница в фенотипах может быть незначительной (например, иметь большой палец автостопщика и прямой большой палец, глаза немного разного цвета, разный рост волос на противоположных сторонах тела и т. д.) или полностью не обнаруживается. Химеры могут также проявлять в определенном спектре УФ-света характерные отметины на спине, напоминающие стрелки, указывающие вниз от плеч до поясницы; это одно из проявлений неравномерности пигмента, которое называется Линии Блашко.[14]

Больных можно идентифицировать по двум популяциям эритроцитов или, если зиготы имеют противоположный пол, неоднозначные гениталии и интерсекс по отдельности или в комбинации; у таких людей иногда также есть пятнистая кожа, волосы или пигментация глаз (гетерохромия ). Если бластоцисты противоположного пола, гениталии обоих полов могут образовываться: либо яичник и яичко, или в сочетании ovotestes, при одной редкой форме интерсекса, заболевании, ранее известном как истинный гермафродитизм.[нужна цитата ]

Обратите внимание, что частота этого состояния не указывают на истинное преобладание химеризма. Большинство химер, состоящих как из мужских, так и из женских клеток, вероятно, не имеют состояния интерсексуальности, как можно было бы ожидать, если бы две популяции клеток были равномерно смешаны по всему телу. Часто большая часть или все клетки одного типа состоят из одной линии клеток, то есть кровь может состоять преимущественно из одной линии клеток и внутренних органов другой линии клеток. Гениталии производят гормоны, отвечающие за другие половые признаки.

Природные химеры почти никогда не обнаруживаются, если только они не проявляют аномалий, таких как мужские / женские или гермафродитные характеристики или неравномерная пигментация кожи. Наиболее заметны некоторые самцы. черепаховые кошки и ситцевые кошки (хотя у большинства самцов черепаховых панцирей есть дополнительная Х-хромосома, отвечающая за окраску) или животных с неоднозначными половыми органами.[нужна цитата ]

Существование химеризма проблематично для ДНК-тестирование, факт, имеющий значение для семейного и уголовного права. В Лидия Фэйрчайлд Дело, например, было передано в суд после того, как анализ ДНК показал, что ее дети не могут быть ее детьми. Против нее были предъявлены обвинения в мошенничестве, и ее опека над детьми была оспорена. Обвинение против нее было снято, когда стало ясно, что Лидия была химерой, и совпадающая ДНК была обнаружена в ее ткани шейки матки.[нужна цитата ] Другой случай был с Карен Киган, которую также подозревали (изначально) в том, что она не является биологической матерью своих детей, после того, как тесты ДНК ее взрослых сыновей для трансплантации почки, в которой она нуждалась, казалось, показали, что она не их мать.[1][15]

Тетрагаметное состояние имеет важные последствия для органа или стволовая клетка трансплантация. Химеры обычно имеют иммунологическая толерантность к обеим клеточным линиям.[нужна цитата ]

Микрохимеризм

Основная статья: Микрохимеризм

Микрохимеризм - это наличие небольшого числа клеток, которые генетически отличаются от клеток индивидуума-хозяина. Большинство людей рождаются с несколькими клетками, генетически идентичными клеткам их матери, и доля этих клеток уменьшается у здоровых людей с возрастом. У людей, которые сохраняют большее количество клеток, генетически идентичных клеткам их матери, наблюдаются более высокие показатели некоторых аутоиммунных заболеваний, предположительно потому, что иммунная система отвечает за разрушение этих клеток, а общий иммунный дефект препятствует этому, а также вызывает аутоиммунные проблемы. .Более высокий уровень аутоиммунных заболеваний из-за наличия материнских клеток является причиной того, почему в исследовании 2010 года 40-летнего мужчины со склеродермоподобным заболеванием (аутоиммунное ревматическое заболевание) в его кровотоке были обнаружены женские клетки. via FISH (флуоресцентная гибридизация in situ) считалось происхождением от матери. Тем не менее, его форма микрохимеризма была обнаружена из-за исчезнувшего близнеца, и неизвестно, может ли микрохимеризм исчезнувшего близнеца предрасполагать людей к аутоиммунным заболеваниям.[16] У матерей также часто есть несколько клеток, генетически идентичных клеткам их детей, а у некоторых людей также есть некоторые клетки, генетически идентичные клеткам их братьев и сестер (только братьев и сестер по матери, поскольку эти клетки передаются им, потому что их мать сохранила их).[нужна цитата ]

Симбиотический химеризм у удильщиков

Химеризм возникает естественным образом у взрослых Цератиоид удильщик и фактически является естественной и важной частью их жизненного цикла. Когда самец достигает зрелого возраста, он начинает поиск самки. Используя сильные обонятельный (или запах) рецепторов, самец ищет, пока не находит самку удильщика. Самец длиной менее дюйма вгрызается в ее кожу и высвобождает фермент, который переваривает кожу его рта и ее тела, сплавляя пару до уровня кровеносных сосудов. Хотя эта привязанность стала необходимой для выживания самца, она в конечном итоге поглотит его, поскольку оба удильщика сливаются в единое целое. гермафродитный физическое лицо. Иногда в этом процессе более одного самца присоединяются к одной самке как симбиот. В этом случае все они будут поглощены телом более крупной женщины-рыболова. После слияния с самкой самцы достигнут половой зрелости, развивая большие размеры. яички как их другие органы атрофия. Этот процесс обеспечивает постоянное поступление сперматозоидов, когда самка производит яйцеклетку, так что химерная рыба может иметь большее количество потомков.[17]

Химеризм зародышевой линии

Химеризм зародышевой линии возникает, когда половые клетки (например, сперма и яйцо клетки) организма генетически не идентичны его собственным. Недавно было обнаружено, что мартышки могут нести репродуктивные клетки своих (братских) братьев и сестер из-за слияния плаценты во время развития. (Мартышки почти всегда рожают разнояйцевых близнецов.)[11][18][19]

Искусственный химеризм

Искусственный химеризм попадает в категорию искусственных, в которых могут существовать химеры. Человек, подпадающий под эту классификацию, обладает двумя разными наборами генетические родословные: один был унаследован генетически во время формирования человеческого эмбриона, а другой был намеренно введен с помощью медицинской процедуры, известной как трансплантация.[20] Конкретные типы трансплантатов, которые могут вызвать это состояние, включают трансплантаты костного мозга и трансплантаты органов, поскольку организм реципиента по существу работает над постоянным включением в него новых стволовых клеток крови.

Примером искусственного химеризма у животных являются химеры перепел-цыпленок. Используя трансплантацию и абляция на стадии эмбриона цыпленка нервная трубка и клетки нервного гребня цыпленка были удалены и заменены такими же частями перепела.[21] После вылупления перепелиные перья были заметно видны вокруг области крыла, в то время как остальная часть тела цыпленка состояла из его собственных куриных клеток.

Люди

Химеризм был зарегистрирован у людей в нескольких случаях.

  • Голландский спринтер Фокче Диллема была исключена из сборной 1950 г. после того, как в июле 1950 г. отказалась пройти обязательный половой тест; более поздние исследования выявили Y-хромосому в клетках ее тела, и анализ показал, что она, вероятно, была мозаичной женщиной 46, XX / 46, XY.[22]
  • В 1953 г. сообщалось о человеческой химере в Британский медицинский журнал. У женщины была обнаружена кровь двух разных групп. Очевидно, это произошло из-за того, что в ее теле жили клетки ее брата-близнеца.[23] Исследование 1996 года показало, что такой химеризм группы крови не редкость.[24]
  • Другой отчет о человеческой химере был опубликован в 1998 году, когда у человека мужского пола были частично развиты женские органы из-за химеризма. Он был задуман экстракорпоральное оплодотворение.[3]
  • В 2002, Лидия Фэйрчайлд было отказано в государственной помощи в Штат Вашингтон когда появились доказательства ДНК, показывающие, что она не была матерью своих детей. Адвокат обвинения услышал о человеческой химере в Новой Англии, Карен Киган, и предложил такую ​​возможность защите, которая смогла показать, что Фэирчайлд тоже был химерой с двумя наборами ДНК, и что один из этих наборов могла быть матерью детей.[25]
  • В 2002 г. появилась статья в Медицинский журнал Новой Англии описывает женщину, у которой тетрагаметический химеризм был неожиданно выявлен после прохождения подготовки к трансплантации почки, которая потребовала от пациентки и ее ближайших родственников пройти тестирование на гистосовместимость, результат которого показал, что она не была биологической матерью двоих из трех своих детей.[26]
  • В 2009 году певица Тейлор Мул обнаружила, что то, что всегда считалось большой родинкой на ее туловище, на самом деле вызвано химеризмом.
  • Сообщалось, что в 2017 году была создана химера человек-свинья; также сообщалось, что химера содержит 0,001% человеческих клеток, а остальное - свиньи.[27][28][29]

Гермафродиты

  • Вокруг настоящих гермафродитов ведутся споры относительно гипотетического сценария, при котором человек мог бы самооплодотворяться. Если химера человека образована из мужской и женской зиготы, сливающейся в один эмбрион, давая индивидуальную функциональную ткань гонад обоих типов, такое самооплодотворение возможно. Действительно, известно, что это происходит в нечеловеческие виды, где распространены животные-гермафродиты. Однако у людей никогда не было зарегистрировано ни одного такого случая функционального самооплодотворения.[30]

Реципиенты костного мозга

  • Сообщалось о нескольких случаях необычных химерных явлений у реципиентов костного мозга.
    • В 2019 году кровь и семенная жидкость мужчины в Рино, штат Невада (перенесшего вазэктомия ), показал только генетический состав его донора костного мозга. В мазках с его губ, щеки и языка было обнаружено смешанное содержание ДНК.[31]
    • ДНК-содержание спермы в результате нападения в 2004 году соответствовало ДНК мужчины, который находился в тюрьме во время нападения, но был донором костного мозга для своего брата, который, как позже было установлено, совершил преступление.[31][32][33]
    • В 2008 году мужчина погиб в дорожно-транспортном происшествии, произошедшем в Сеуле, Южная Корея. Для его идентификации была проанализирована его ДНК. Результаты показали, что ДНК его крови, наряду с некоторыми из его органов, показала, что он был женщиной. Позже было установлено, что ему сделали пересадку костного мозга от дочери.[31]

Идентификация химеры

Химеризм настолько редок, что подтверждено всего 100 случаев заболевания людей.[34] Однако это может быть связано с тем, что люди могут не знать, что у них есть это состояние с самого начала. Обычно нет никаких признаков или симптомов химеризма, кроме нескольких физических симптомов, таких как гиперпигментация, гипопигментация, или обладать двумя глазами разного цвета. Однако эти признаки не обязательно означают, что человек является химерой, и их следует рассматривать только как возможные симптомы. Опять же, судебно-медицинское расследование или любопытство по поводу неудавшегося теста ДНК на материнство / отцовство обычно приводит к случайному обнаружению этого состояния. Путем простого прохождения теста ДНК, который обычно состоит из быстрого взятия мазка со щеки или анализа крови, открывается когда-то неизвестный второй геном, что позволяет идентифицировать этого человека как химеру.[35]

Исследование

Первыми известными химерами приматов являются близнецы макак-резусов, Року и Хекс, у каждого из которых по шесть геномов. Они были созданы путем смешивания ячеек из тотипотент четырехклеточные бластоцисты; хотя клетки никогда не сливались, они работали вместе, образуя органы. Было обнаружено, что один из этих приматов, Року, был сексуальной химерой; поскольку четыре процента клеток крови Року содержали две x-хромосомы.[12]

Важная веха в экспериментах с химерой произошла в 1984 году, когда химерный овца-коза был произведен путем объединения эмбрионы из козел и овец, и дожил до совершеннолетия.[36]

В августе 2003 г. исследователи из Шанхайский второй медицинский университет в Китае сообщили, что они успешно слили клетки кожи человека и кролик ova для создания первых химерных эмбрионов человека. Эмбрионам давали возможность развиваться в течение нескольких дней в лабораторных условиях, а затем уничтожали для сбора полученного стволовые клетки.[37] В 2007 году ученые из Университет Невады Школа медицины создала овцу, кровь которой содержала 15% клеток человека и 85% клеток барана.[38]

22 января 2019 г. Национальное общество консультантов по генетике опубликовала статью «Объяснение химеризма: как один человек может по незнанию иметь два набора ДНК», в которой говорится: «Тетрагаметический химеризм, при котором двойная беременность перерастает в одного ребенка, в настоящее время считается одной из более редких форм. Однако мы знаем, что от 20 до 30 процентов одноплодных беременностей изначально были двойными или многоплодными. Благодаря этой статистике вполне возможно, что тетрагаметический химеризм встречается чаще, чем предполагают текущие данные ».[39]

Губки

Химеризм был обнаружен у некоторых видов морских губок.[40] У одного человека были обнаружены четыре различных генотипа, и есть потенциал для еще большей генетической гетерогенности. Каждый генотип функционирует независимо с точки зрения воспроизводства, но различные генотипы внутри организма ведут себя как единый крупный особь с точки зрения экологических реакций, таких как рост.[40]

мышей

Химерная мышь со своим потомство, которые несут ген окраса шерсти агути; обратите внимание на розовый глаз

Химерные мыши являются важными животными в биологических исследованиях, поскольку они позволяют исследовать множество биологических вопросов у животного, которое имеет два различных генетических пула. Они включают понимание проблем, таких как тканеспецифические требования гена, клеточная линия и клеточный потенциал. Общие методы создания химерных мышей можно обобщить либо путем инъекции, либо путем агрегации эмбриональных клеток из разных источников. Первая химерная мышь была создана Беатрис Минц в 1960-х годах путем агрегации эмбрионов на восьмиклеточной стадии.[41] С другой стороны, инъекция была впервые предложена Ричардом Гарднером и Ральфом Бринстером, которые вводили клетки в бластоцисты для создания химерных мышей с зародышевыми линиями, полностью полученными из инъецированных эмбриональные стволовые клетки (ES клетки).[42] Химеры могут быть получены из эмбрионов мыши, которые еще не имплантированы в матку, а также из имплантированных эмбрионов. ES-клетки из внутренней клеточной массы имплантированной бластоцисты могут вносить вклад во все клеточные линии мыши, включая зародышевую линию. ES-клетки являются полезным инструментом в химерах, потому что в них можно мутировать гены с помощью гомологичная рекомбинация, что позволяет нацеливание на гены. С тех пор, как это открытие произошло в 1988 году, ES-клетки стали ключевым инструментом в создании конкретных химерных мышей.[43]

Основная биология

Способность создавать химеры мышей происходит от понимания раннего развития мышей. Между стадиями оплодотворения яйцеклетки и имплантации бластоцисты в матку разные части эмбриона мыши сохраняют способность давать начало множеству клеточных линий. Когда эмбрион достигает стадии бластоцисты, он состоит из нескольких частей, в основном из трофэктодерма, то внутренняя клеточная масса, а примитивная энтодерма. Каждая из этих частей бластоцисты дает начало различным частям эмбриона; внутренняя клеточная масса дает начало собственно эмбриону, тогда как трофэктодерма и примитивная энтодерма дают начало дополнительным эмбриональным структурам, которые поддерживают рост эмбриона.[44] Эмбрионы на стадии от двух до восьми клеток пригодны для создания химер, поскольку на этих стадиях развития клетки в эмбрионах еще не готовы дать начало какой-либо конкретной клеточной линии и могут дать начало внутренней клеточной массе или трофэктодерма. В случае, когда два диплоидных эмбриона восьмиклеточной стадии используются для создания химеры, химеризм может быть позже обнаружен в эпибласт, примитивный энтодерма, и трофэктодерма мыши бластоциста.[45][46]

Можно препарировать эмбрион на других стадиях, чтобы соответственно дать начало одной линии клеток от эмбриона выборочно, а не другой. Например, подмножества бластомеров можно использовать для получения химер с определенным клеточным происхождением от одного эмбриона. Внутренняя клеточная масса диплоидной бластоцисты, например, может использоваться для создания химеры с другой бластоцистой восьмиклеточного диплоидного эмбриона; клетки, взятые из внутренней клеточной массы, дадут начало примитивной энтодерме и эпибласту у химерной мыши.[47]Исходя из этого знания, ES клетка вклады в химеры были развиты. ES-клетки могут использоваться в комбинации с восьмиклеточными и двухклеточными эмбрионами для создания химер и исключительно для получения собственно эмбриона. Эмбрионы, которые будут использоваться в химерах, могут быть дополнительно генетически изменены, чтобы вносить конкретный вклад только в одну часть химеры. Примером является химера, построенная из ES-клеток и тетраплоидных эмбрионов, которые искусственно созданы путем электрослияния двух двухклеточных диплоидных эмбрионов. Тетраплоидный эмбрион будет давать начало только трофэктодерме и примитивной энтодерме в химере.[48][49]

Способы производства

Существует множество комбинаций, которые могут привести к созданию успешной мыши-химеры, и - в соответствии с целью эксперимента - можно выбрать подходящую комбинацию клетки и эмбриона; они обычно, но не ограничиваются ими, диплоидным зародышем и ES-клетками, диплоидным зародышем и диплоидным зародышем, ES-клеткой и тетраплоидным зародышем, диплоидным эмбрионом и тетраплоидным зародышем, ES-клетками и ES-клетками. Комбинация эмбриональных стволовых клеток и диплоидных эмбрионов - распространенный метод, используемый для создания химерных мышей, поскольку нацеливание на гены может осуществляться в эмбриональных стволовых клетках. Эти виды химер могут быть получены либо путем агрегации стволовых клеток и диплоидного эмбриона, либо путем инъекции стволовых клеток в диплоидный эмбрион. Если эмбриональные стволовые клетки должны использоваться для нацеливания гена с целью создания химеры, следующая процедура является общей: конструкция для гомологичной рекомбинации для целевого гена будет введена в культивируемые мышиные эмбриональные стволовые клетки от мыши-донора посредством электропорации; клетки, положительные по событию рекомбинации, будут иметь устойчивость к антибиотикам, обеспечиваемую вставной кассетой, используемой для нацеливания гена; и быть в состоянии получить положительный выбор.[50][51] Затем ES-клетки с правильным геном-мишенью вводят в диплоидную бластоцисту мыши-хозяина. Затем эти инъецированные бластоцисты имплантируются псевдобеременной самке суррогатной мыши, которая доводит эмбрионы до срока беременности и рождает мышь, зародышевая линия которой происходит из ES-клеток донорской мыши.[52] Эта же процедура может быть достигнута за счет агрегации ES-клеток и диплоидных эмбрионов, диплоидные эмбрионы культивируются в чашках для агрегации в лунках, где могут поместиться отдельные эмбрионы, в эти лунки добавляются ES-клетки, агрегаты культивируются до тех пор, пока не сформируется один эмбрион и не будет развиваться. на стадию бластоцисты, а затем может быть передан суррогатной мыши.[53]

Растения

Структура

Различие между секториальным, мериклинальным и периклинальным сажать химеры широко используются.[54][55]

Прививать химеры

Основная статья: Прививка-химера
Taxus мозаика

Они получены путем прививки генетически разных родителей, разных сорта или разные виды (которые могут принадлежать к разным родам). Ткани могут быть частично слиты вместе после прививка чтобы сформировать единый растущий организм, который сохраняет оба типа тканей в одном побеге.[56] Подобно тому, как составляющие виды, вероятно, будут отличаться широким спектром характеристик, так и поведение их периклинальный химеры очень разнообразны.[57] Первой такой известной химерой, вероятно, была Bizzaria, который является сплавом Флорентийский цитрон и кислый апельсин. Хорошо известными примерами трансплант-химеры являются Лабурноцитис 'Адамий', вызванный слиянием Laburnum и метла, и «Семейные» деревья, где к одному дереву привиты несколько сортов яблони или груши. Многие фруктовые деревья выращивают путем прививки туловища саженца на подвой.[58]

Хромосомные химеры

Это химеры, у которых слои отличаются своим хромосома конституция. Иногда химеры возникают в результате потери или приобретения отдельных хромосом или фрагментов хромосом из-за неправильное разделение.[59] Чаще всего цитохимеры имеют простой кратный нормальный набор хромосом в измененном слое. Существуют различные эффекты на размер клеток и характеристики роста.

Ядерные генетически-дифференциальные химеры

Эти химеры возникают в результате спонтанной или индуцированной мутации ядерного гена в доминантный или рецессивный аллель. Как правило, в листе, цветке, фрукте или других частях поражается только один символ.[нужна цитата ]

Пластидные генетически-дифференциальные химеры

Эти химеры возникают в результате спонтанной или индуцированной мутации пластидного гена с последующим разделением пластид на два типа во время вегетативного роста. В качестве альтернативы, после самоопыления или термодинамика нуклеиновых кислот, пластиды могут отделиться от смешанных яиц или смешанных зигот соответственно. Этот тип химеры распознается во время происхождения по образцу сортировки на листьях. После завершения сортировки периклинальные химеры отличаются от похожих на вид ядерно-генетически-дифференциальных химер по их неменделирующее наследование. К этому типу относятся большинство пестролистных химер.[нужна цитата ]

Все химеры, дифференцирующие пластидные гены и некоторые ядерные гены, влияют на цвет плазмид в листьях, и они сгруппированы вместе как хлорофилл химеры или, предпочтительно, химеры с пестрыми листьями. Для большинства разновидностей мутация связана с потерей хлоропласты в мутировавшей ткани, так что часть растительной ткани не имеет зеленого пигмента и фотосинтетический способность. Эта мутировавшая ткань не может выжить сама по себе, но она поддерживается за счет партнерства с нормальной фотосинтетической тканью. Иногда встречаются химеры со слоями, различающимися как ядерными, так и пластидными генами.[нужна цитата ]

Происхождение

Существует несколько причин, объясняющих появление химеры растений на стадии восстановления растений:

(1) Процесс съемки органогенез начинается с многоклеточного происхождения.[60]

(2) Эндогенная толерантность приводит к неэффективности слабых селективных агентов.

(3) Механизм самозащиты (перекрестная защита). Трансформированные клетки служат охранниками для защиты нетрансформированных.[61]

(4) Наблюдаемой характеристикой трансгенных клеток может быть временная экспрессия маркерного гена. Или это может быть связано с наличием клеток агробактерий.[нужна цитата ]

Обнаружение

Нетрансформированные клетки должны легко обнаруживаться и удаляться, чтобы избежать появления химер. Это связано с тем, что важно поддерживать стабильную способность трансгенных растений в разных поколениях. Репортерные гены, такие как GUS и Зеленый флуоресцентный белок[62] (GFP) используются в сочетании с селективными маркерами растений (гербициды, антитела и т. Д.). Однако экспрессия GUS зависит от стадии развития растения, и на GFP может влиять аутофлуоресценция зеленой ткани. Количественная ПЦР может быть альтернативным методом обнаружения химер.[63]

Вирусы

Озеро Бойлинг-Спрингс в Калифорнии - место, где в 2012 году был обнаружен первый природный химерный вирус.[64]

В 2012 году первый образец гибридного вируса РНК-ДНК был неожиданно обнаружен во время метагеномный изучение кислой экстремальной среды Boiling Springs Lake это в Национальный вулканический парк Лассен, Калифорния.[64][65] Вирус был назван BSL-RDHV (гибридный вирус РНК ДНК Кипящего озера).[66]

это геном связано с ДНК цирковирус, которые обычно заражают птиц и свиней, а РНК tombusvirus, поражающие растения. Исследование удивило ученых, потому что вирусы ДНК и РНК различаются, а способ образования химеры не был понят.[64][67] Также были обнаружены другие вирусные химеры, и эта группа известна как вирусы CHIV («химерные вирусы»).[68]

Этика и законодательство

Смотрите также: Биоэтика

Этика

В США и Западной Европе действуют строгие этические кодексы и правила, которые прямо запрещают определенные подгруппы экспериментов с использованием человеческих клеток, хотя нормативно-правовая база существенно различается.[69] В результате создания человеческих химер возникает вопрос: где теперь общество проводит черту человечества? Этот вопрос порождает серьезные правовые и моральные проблемы, а также вызывает споры. Шимпанзе, например, не имеют никакого юридического статуса, и их подавляют, если они представляют угрозу для людей. Если шимпанзе генетически изменен, чтобы стать более похожим на человека, это может стереть этическую грань между животным и человеком. Юридические дебаты станут следующим шагом в процессе определения того, следует ли предоставить определенные химеры законные права.[70] Наряду с проблемами, касающимися прав химер, люди выражали озабоченность по поводу того, умаляет ли создание человеческих химер достоинство человека.[71]

Законодательство

Закон о запрещении химер человека

11 июля 2005 года в Закон о запрете химер был внесен законопроект. Конгресс США сенатором Сэмюэл Браунбэк; однако он умер в Конгрессе где-то в следующем году. Законопроект был внесен на основе выводов о том, что наука продвинулась до такой степени, что человеческие и нечеловеческие виды могут быть объединены для создания новых форм жизни. Из-за этого возникают серьезные этические проблемы, поскольку это стирает грань между людьми и другими животными, и, согласно законопроекту, такое стирание границ является проявлением неуважения к человеческому достоинству. Последнее утверждение, выдвинутое в Законе о запрещении химер человека, заключалось в том, что количество зоонозных заболеваний растет. С учетом сказанного, создание химер человек-животное может позволить этим болезням достигнуть людей.[71]

22 августа 2016 года в Закон о запрете химер среди людей и животных 2016 года был внесен еще один законопроект. Палата представителей США. Он определяет химеру как:

  • человеческий эмбрион, в который была введена нечеловеческая клетка или клетки (или их составные части), чтобы сделать принадлежность эмбриона к виду Homo sapiens неопределенным;
  • химерный эмбрион человека / животного, полученный оплодотворением человеческой яйцеклетки спермой нечеловеческого происхождения;
  • химерный эмбрион человека / животного, полученный оплодотворением нечеловеческой яйцеклетки человеческой спермой;
  • эмбрион, полученный путем введения нечеловеческого ядра в человеческое яйцо;
  • эмбрион, полученный путем введения человеческого ядра в нечеловеческое яйцо;
  • эмбрион, содержащий по меньшей мере гаплоидные наборы хромосом как человеческой, так и нечеловеческой формы жизни;
  • нечеловеческая форма жизни, сконструированная таким образом, что человеческие гаметы развиваются в теле нечеловеческой формы жизни; или
  • нечеловеческая форма жизни, сконструированная таким образом, что она содержит человеческий мозг или мозг, полностью или преимущественно полученные из нервных тканей человека.

Законопроект запрещает попытки создать химеру человека и животного, перенос или попытку перенести человеческий эмбрион в нечеловеческое лоно, перенос или попытку перенести нечеловеческий эмбрион в человеческое лоно, а также транспортировку или получение с любой целью химера животных. Наказания за нарушение этого законопроекта включают штрафы и / или тюремное заключение на срок до 10 лет. Законопроект был передан в Подкомитет по преступности, терроризму, внутренней безопасности и расследованиям 11 октября 2016 года, но там умер.[72]

Смотрите также

использованная литература

  1. ^ а б c d Нортон, Аарон; Оззи Зенер (2008). "Какая половина мамочка?: Тетрагаметический химеризм и транс-субъективность". Женские исследования ежеквартально. Осень / Зима (3–4): 106–127. Дои:10.1353 / wsq.0.0115. S2CID  55282978.
  2. ^ Фридман, Лорен. "Страннее, чем вымысел. История женщины, которая была ее близнецом". Получено 4 августа 2014.
  3. ^ а б c Штамм, Лиза; Джон К.С. Дин; Марк П. Р. Гамильтон; Дэвид Т. Бонтрон (1998). «Настоящая химера-гермафродит, полученная в результате слияния эмбрионов после экстракорпорального оплодотворения». Медицинский журнал Новой Англии. 338 (3): 166–169. Дои:10.1056 / NEJM199801153380305. PMID  9428825.
  4. ^ Schoenle, E .; Schmid, W .; Schinzel, A .; Mahler, M .; Риттер, М .; Шенкер, Т .; Metaxas, M .; Froesch, P .; Froesch, E. R. (1983-07-01). «46, XX / 46, XY химеризм у фенотипически нормального человека». Генетика человека. 64 (1): 86–89. Дои:10.1007 / BF00289485. ISSN  1432-1203. PMID  6575956. S2CID  25946104.
  5. ^ Binkhorst, Mathijs; де Леу, Николь; Оттен, Барто Дж. (Январь 2009 г.). «Здоровая химера-самка с кариотипом 46, XX / 46, XY». Журнал детской эндокринологии и метаболизма. 22 (1): 97–102. Дои:10.1515 / jpem.2009.22.1.97. ISSN  0334-018X. PMID  19344081. S2CID  6074854.
  6. ^ Gencík, A .; Genciková, A .; Хрубиско, М .; Mergancová, О. (1980). «Химеризм 46, XX / 46, XY у фенотипической самки». Генетика человека. 55 (3): 407–408. Дои:10.1007 / bf00290226. ISSN  0340-6717. PMID  7203474. S2CID  9117759.
  7. ^ Фараг, Т. I; Аль-Авади, С. А.; Типпет, П; эль-Сайед, М; Сундарешан, Т. С; Аль-Осман, С.А.; Эль-Бадрамани, Массачусетс (декабрь 1987 г.). "Односторонний истинный гермафродит с 46, XX / 46, XY дисперсионным химеризмом". Журнал медицинской генетики. 24 (12): 784–786. Дои:10.1136 / jmg.24.12.784. ISSN  0022-2593. ЧВК  1050410. PMID  3430558.
  8. ^ Shah, V. C .; Кришна Мурти, Д. С .; Рой, С .; Подрядчик, П. М .; Шах, А. В. (ноябрь 1982 г.). «Истинный гермафродит: 46, XX / 46, XY, клинические цитогенетические и гистопатологические исследования». Индийский журнал педиатрии. 49 (401): 885–890. Дои:10.1007 / bf02976984. ISSN  0019-5456. PMID  7182365. S2CID  41204037.
  9. ^ Hadjiathanasiou, C.G .; Brauner, R .; Lortat-Jacob, S .; Nivot, S .; Jaubert, F .; Fellous, M .; Nihoul-Fékété, C .; Раппапорт, Р. (ноябрь 1994 г.). «Истинный гермафродитизм: генетические варианты и клиническое ведение». Журнал педиатрии. 125 (5, п. 1): 738–744. Дои:10.1016 / с0022-3476 (94) 70067-2. ISSN  0022-3476. PMID  7965425.
  10. ^ Боклаге, C.E. Как создаются новые люди. Хакенсак, штат Нью-Джерси; Лондон: World Scientific Publishing Co. Pte. ООО; 2010 г.
  11. ^ а б Ross, C.N .; Дж. А. Френч; Г. Орти (2007). «Химеризм зародышевой линии и отцовская забота у мартышек (Callithrix kuhlii)». Труды Национальной академии наук. 104 (15): 6278–6282. Bibcode:2007ПНАС..104.6278Р. Дои:10.1073 / pnas.0607426104. ISSN  0027-8424. ЧВК  1851065. PMID  17389380.
  12. ^ а б Масахито Тачибана, Мишель Спарман и Шухрат Миталипов (Январь 2012 г.). "Генерация химерных макак-резусов". Ячейка. 148 (1–2): 285–95. Дои:10.1016 / j.cell.2011.12.007. ЧВК  3264685. PMID  22225614.
  13. ^ Генгозян, Н .; Батсон, Дж. С.; Эйде, П. (1964). «Гематологические и цитогенетические доказательства гемопоэтического химеризма у мартышек, Tamarinus Nigricollis». Цитогенетика. 10 (6): 384–393. Дои:10.1159/000129828. PMID  14267132.
  14. ^ Старр, Барри (30 ноября 2004 г.). «Понимание генетики: здоровье человека и геном». Спросите генетика. Медицинский факультет Стэнфордского университета. Архивировано из оригинал на 24.07.2011.
  15. ^ "Близнец внутри меня: необычные люди". Channel 5 TV, Великобритания. 9 марта 2006 г. Архивировано с оригинал 26 мая 2006 г.
  16. ^ Беллефон, Л .; Heiman, P .; Канаан, С .; Azzouz, D .; Rak, J .; Martin, M .; Roudier, J .; Roufosse, F .; Ламберт, К. (2010). «Клетки исчезнувшего близнеца как источник микрохимеризма 40 лет спустя». Химеризм. 1 (2): 56–60. Дои:10.4161 / хим.1.2.14294. ЧВК  3023624. PMID  21327048.
  17. ^ Ceratiidae
  18. ^ Циммер, Карл (27 марта 2007 г.). «В семье мартышек все действительно кажется относительным». Нью-Йорк Таймс. Получено 2010-04-01.
  19. ^ Хупер, Роуэн (26 марта 2007 г.). «Мартышки могут нести половые клетки своего брата или сестры». Новый ученый.
  20. ^ Ринкевич, Б. (июнь 2001 г.). «Природный химеризм человека: приобретенный характер или пережиток эволюции?». Иммунология человека. 62 (6): 651–657. Дои:10.1016 / s0198-8859 (01) 00249-x. ISSN  0198-8859. PMID  11390041.
  21. ^ «Кинотеатр« Биология развития », Le Douarin». sdbonline.org. Получено 2020-04-10.
  22. ^ Ballantyne, KN; Кайзер, М; Grootegoed, JA (2011). «Секс и гендерные вопросы в соревновательных видах спорта: расследование исторического случая приводит к новой точке зрения». Британский журнал спортивной медицины. 46 (8): 614–7. Дои:10.1136 / bjsm.2010.082552. ЧВК  3375582. PMID  21540190.
  23. ^ Bowley, C.C .; Энн М. Хатчисон; Джоан С. Томпсон; Рут Сэнгер (11 июля 1953 г.). "Химера группы крови человека". Британский медицинский журнал. 2 (4827): 81. Дои:10.1136 / bmj.2.4827.81. ЧВК  2028470. PMID  13051584.
  24. ^ Van Dijk, B.A .; Boomsma, D. I .; Де Ман, А. Дж. (1996). «Химеризм группы крови при многоплодии у людей не редкость». Американский журнал медицинской генетики. 61 (3): 264–8. CiteSeerX  10.1.1.149.9001. Дои:10.1002 / (SICI) 1096-8628 (19960122) 61: 3 <264 :: AID-AJMG11> 3.0.CO; 2-R. PMID  8741872.
  25. ^ "Она - ее собственный близнец". ABC News. 15 августа 2006 г. Архивировано с оригинал 28 октября 2013 г.. Получено 17 сентября, 2013.
  26. ^ Ю, Ненг; Крускалл, Марго С .; Юнис, Хуан Дж .; Knoll, Joan H.M .; Уль, Линн; Алоско, Шарон; Охаши, Марина; Клавихо, Ольга; Хусейн, Захид; Юнис, Эмилио Дж .; Юнис, Хорхе Дж. (2002-05-16). «Спорная Материнство ведущей к идентификации Tetragametic химеризма». Медицинский журнал Новой Англии. 346 (20): 1545–1552. Дои:10.1056 / NEJMoa013452. ISSN  0028-4793. PMID  12015394.
  27. ^ Галлахер, Джеймс (26 января 2017 г.). "Подробное описание эмбрионов химеры человека-свиньи". Новости BBC. Получено 2017-06-03.
  28. ^ «Гибрид человека и свиньи, созданный в лаборатории - вот факты». 2017-01-26. Получено 2017-06-03.
  29. ^ «Ученые создают гибрид человека и свиньи». Независимый. 26 января 2017 г.. Получено 2017-06-03.
  30. ^ Байрактар, Зеки (2018). «Возможная аутофертильность у истинных гермафродитов». Журнал материнско-фетальной и неонатальной медицины. 31 (4): 542–547. Дои:10.1080/14767058.2017.1291619. PMID  28282768. S2CID  22100505.
  31. ^ а б c Мерфи, Хизер (2019-12-09). «Человек, перенесший трансплантацию, через несколько месяцев узнает, что его ДНК изменилась на ДНК донора, находящегося за 5000 миль». Хранитель. Получено 12 декабря, 2019.
  32. ^ Мерфи, Эрин Э. (07.10.2015). "ДНК на краю: близнецы, химеризм и синтетическая ДНК". Ежедневный зверь.
  33. ^ Шлютер, Роджер (2018-02-01). «Пересадка костного мозга может дать вам новую ДНК». Вестник и обзор. Получено 2020-02-08.
  34. ^ «Химеризм: определение, симптомы, тестирование, диагностика и многое другое». Линия здоровья. Получено 2020-03-15.
  35. ^ «Национальное общество генетических консультантов: Блоги: Объяснение химеризма: как один человек может, не зная, иметь два набора ДНК». nsgc.org. Получено 2020-03-15.
  36. ^ "Это Гип". Время. 27 февраля 1984 г.. Получено 4 января 2012.
  37. ^ Мотт, Мэриэнн (25 января 2005 г.). "Споры вокруг гибридов человека и животных". National Geographic News.
  38. ^ «Иранский ученый создает овец с получеловеческими органами». Пресс ТВ. 27 марта 2007 г. Архивировано с оригинал 14 ноября 2007 г.
  39. ^ «Объяснение химеризма: как один человек может по незнанию иметь два набора ДНК». Национальное общество консультантов по генетике.
  40. ^ а б Бланкер, Андреа; Уриз, Мария-Дж. (2011-04-15). "'Жить вместе врозь »: скрытое генетическое разнообразие популяций губок». Молекулярная биология и эволюция. 28 (9): 2435–2438. Дои:10.1093 / molbev / msr096. ISSN  1537-1719. PMID  21498599.
  41. ^ Mintz, B .; Сильверс, В. К. (1967). "'Внутренняя иммунологическая толерантность у мышей-аллофенов ». Наука. 158 (3807): 1484–6. Bibcode:1967Научный ... 158.1484M. Дои:10.1126 / science.158.3807.1484. PMID  6058691. S2CID  23824274.
  42. ^ Робертсон, EJ (1986). «Линии плюрипотентных стволовых клеток как путь к зародышевой линии мыши». Тенденции Genet. 2: 9–13. Дои:10.1016/0168-9525(86)90161-7.
  43. ^ Doetschman, T .; Maeda, N .; Smithies, О. (1988). «Целенаправленная мутация гена Hp в эмбриональных стволовых клетках мыши». Proc. Natl. Акад. Наука. 85 (22): 8583–8587. Bibcode:1988PNAS ... 85.8583D. Дои:10.1073 / pnas.85.22.8583. ЧВК  282503. PMID  3186749.
  44. ^ Ральстон, А; Россант, Дж (2005). «Генетическая регуляция происхождения стволовых клеток в эмбрионе мыши». Clin Genet. 68 (2): 106–112. Дои:10.1111 / j.1399-0004.2005.00478.x. PMID  15996204.
  45. ^ Tam, P.L .; Россант, Дж. (2003). «Химеры эмбриона мыши: инструменты для изучения развития млекопитающих». Развитие. 130 (25): 6155–6163. Дои:10.1242 / dev.00893. PMID  14623817.
  46. ^ Россант, Дж. (1976). «Постимплантационное развитие бластомеров, выделенных из 4- и 8-клеточных яиц мышей». J. Embryol. Exp. Морфол. 36 (2): 283–290. PMID  1033982.
  47. ^ Pappaioannou, V .; Джонсон, Р. (1993). Джойнер, А. (ред.). «Производство химер и генетически определенного потомства из целевых ES-клеток». Нацеливание на гены: практический подход. IRL Нажмите на Oxford University Press: 107–146.
  48. ^ Кубяк, Дж; Тарковский, А. (1985). «Электросварение бластомеров мыши. Опыт». Cell Res. 157 (2): 561–566. Дои:10.1016/0014-4827(85)90143-0. PMID  3884349.
  49. ^ Nagy, A .; Россант, Дж. (1999). Джойнер, А. (ред.). «Производство химер агрегации Es-клеток». Нацеливание на гены: практический подход. IRL Нажмите на Oxford University Press: 107–205.
  50. ^ Ясин, М; Мойнахан, Мэн; Ричардсон, К. (1996). «Направленный трансгенез». PNAS. 93 (17): 8804–8808. Bibcode:1996PNAS ... 93.8804J. Дои:10.1073 / пнас.93.17.8804. ЧВК  38547. PMID  8799106.
  51. ^ Ледерманн, Б. (2000). «Эмбриональные стволовые клетки и нацеливание на гены». Экспериментальная физиология. 85 (6): 603–613. Дои:10.1017 / S0958067000021059. PMID  11187956.
  52. ^ Производство мышей Chimera путем инъекции бластоцисты, Wellcome Trust Sanger Institute, http://www.eucomm.org/docs/protocols/mouse_protocol_1_Sanger.pdf
  53. ^ Танака, М; Хаджантонакис, AK; Надь, А (2001). Агрегационные химеры. Объединение ES-клеток, диплоидных и тетраплоидных эмбрионов. Методы молекулярной биологии. 158. С. 135–54. Дои:10.1385/1-59259-220-1:135. ISBN  978-1-59259-220-3. PMID  11236654.
  54. ^ Кирк, Джон Томас Осмонд; Тилни-Бассетт, Ричард А. Э. (1978). Пластиды, их химия, структура, рост и наследование. (Ред. 2-е изд.). Elsevier / North Holland Biomedical Press. ISBN  9780444800220. Получено 9 февраля 2020.
  55. ^ ван Хартен, А. М. (1978). «Методы мутационной селекции и поведение облученных ботинок картофеля». Отчеты о сельскохозяйственных исследованиях. Вагенинген, Нидерланды: Центр сельскохозяйственных публикаций и документации (PUDOC) (873). ISBN  978-90-220-0667-2. Получено 9 февраля 2020.
  56. ^ Norris, R .; Смит, Р. Х. и Вон, К. К. (1983). «Растительные химеры, используемые для установления происхождения побегов de novo». Наука. 220 (4592): 75–76. Bibcode:1983Наука ... 220 ... 75Н. Дои:10.1126 / science.220.4592.75. PMID  17736164. S2CID  38143321.
  57. ^ Тилни-Бассетт, Ричард А. Э. (1991). Растение Химеры. Издательство Кембриджского университета. ISBN  978-0-521-42787-6. Получено 9 февраля 2020.
  58. ^ «Выращивание фруктов: прививка фруктовых деревьев в домашнем саду [фактологический бюллетень] | Расширение UNH». extension.unh.edu. Получено 2020-02-23.
  59. ^ Thompson, J.D .; Herre, E.A .; Хамрик, Дж. Л. и Стоун, Дж. Л. (1991). "Генетическая мозаика в душистых фиговых деревьях: значение для сохранения тропиков". Наука. 254 (5035): 1214–1216. Bibcode:1991Научный ... 254.1214Т. Дои:10.1126 / science.254.5035.1214. PMID  17776412. S2CID  40335585.
  60. ^ Чжу, X .; Чжао, М .; Ma, S .; Ge, Y .; Чжан, М., Чен, Л. (2007). «Индукция и происхождение придаточных побегов химер Brassica juncea и Brassica oleracea». Rep клетки растений. 26 (10): 1727–1732. Дои:10.1007 / s00299-007-0398-4. PMID  17622536. S2CID  23069396.
  61. ^ Park SH, Rose SC, Zapata C, Srivatanakul M (1998). «Перекрестная защита и селективные маркерные гены в трансформации растений». Клеточная биология и биология развития in vitro - растения. 34 (2): 117–121. Дои:10.1007 / BF02822775. S2CID  30883689.
  62. ^ Rakosy-Tican, E .; Aurori, C.M .; Dijkstra, C .; Thieme, R .; Aurori, A. и Davey, M.R. (2007). «Полезность репортерного гена gfp для мониторинга Agrobacterium-опосредованной трансформации дигаплоидных и тетраплоидных генотипов картофеля». Rep клетки растений. 26 (5): 661–671. Дои:10.1007 / s00299-006-0273-8. PMID  17165042. S2CID  30548375.
  63. ^ Faize, M .; Faize, L .; Бургос, Л. (2010). «Использование количественной ПЦР в реальном времени для обнаружения химер в трансгенных табаке и абрикосах и для мониторинга их диссоциации». BMC Biotechnology. 10 (1): 53. Дои:10.1186/1472-6750-10-53. ЧВК  2912785. PMID  20637070.
  64. ^ а б c Димер, Джеффри С., Кеннет М. (11 июня 2013 г.). «Новый вирусный геном, обнаруженный в экстремальных условиях, предполагает рекомбинацию между неродственными группами РНК и ДНК-вирусов». Биология Директ. Проверено 29 марта 2020 года.
  65. ^ Томпсон, Хелен (20 апреля 2012 г.). «Горячий источник дает гибридный геном: исследователи открывают природный химерный ДНК-РНК-вирус». Природа. Проверено 27 марта 2020 года.
  66. ^ Девор, Кейтлин (12 июля 2012 г.).«Ученые открывают гибридный вирус». Journal of Young Investigators ". Дата обращения 31 марта 2020.
  67. ^ BioMed Central Limited (18 апреля 2012 г.). «Может ли недавно открытый вирусный геном изменить то, что, как мы думали, мы знали об эволюции вируса?». ScienceDaily. Проверено 31 марта 2020 года.
  68. ^ Кунина, Евгений В., Должаб, Валериан В., Крупович, Март. (Май 2015 г.).«Происхождение и эволюция вирусов эукариот: максимальная модульность». Вирусология. п. 26. Проверено 31 марта, 2020.
  69. ^ Futehally, Ilmas, Beyond Biology, Стратегическая Форсайт-группа [1]
  70. ^ Брух, Куинтон (20 февраля 2014 г.). "Определение человечества: этика химерных животных и выращивания органов". Тройная спираль онлайн. Получено 21 мая 2015.
  71. ^ а б Браунбэк, Сэмюэл (2005-03-17). «S.659 - Закон 2005 года о запрещении химер человека (внесен в Сенат - IS)». Библиотека Конгресса THOMAS. Получено 20 мая 2015.
  72. ^ Смит, Кристофер Х. (11.10.2016). «Текст - H.R.6131 - 114-й Конгресс (2015-2016): Закон о запрещении химер человека и животных от 2016 года». congress.gov. Получено 2019-11-14.

дальнейшее чтение


внешние ссылки