Электрофорез в полиакриламидном геле - Википедия - Polyacrylamide gel electrophoresis

"PAGE" перенаправляется сюда. Об инициативе администрации Обамы см. Послы Президента по вопросам глобального предпринимательства. Для использования в других целях см. Страница.

Изображение SDS-PAGE. Молекулярные маркеры (лестница) находятся в левой полосе.

Электрофорез в полиакриламидном геле (СТРАНИЦА) - метод, широко используемый в биохимия, судебная химия, генетика, молекулярная биология и биотехнология отделить биологические макромолекулы, обычно белки или же нуклеиновые кислоты, согласно их электрофоретическая подвижность. Электрофоретическая подвижность зависит от длины, конформации и заряда молекулы. Полиакриламид гель-электрофорез - мощный инструмент, используемый для анализа образцов РНК. Когда полиакриламидный гель денатурируется после электрофореза, он предоставляет информацию о составе образца РНК.[1]

Гидратация из акрилонитрил приводит к формированию акриламид молекулы (C
3ЧАС
5НЕТ) к нитрилгидратаза.[2] Перед добавлением воды мономер акриламида находится в порошкообразном состоянии. Акриламид токсичен для нервной системы человека, поэтому при работе с ним необходимо соблюдать все меры безопасности. Акриламид растворим в воде и при добавлении воды полимеризуется, что приводит к образованию полиакриламида.[2] Полезно получать полиакриламидный гель путем гидратации акрилмида, поскольку размер пор можно регулировать. Повышенные концентрации акриламида приводят к уменьшению размера пор после полимеризации. Полиакриламидный гель с маленькими порами помогает лучше исследовать более мелкие молекулы, поскольку маленькие молекулы могут проникать в поры и перемещаться через гель, в то время как большие молекулы задерживаются в отверстиях пор.

Как и все формы гель-электрофорез, молекулы могут работать в своих родное государство, сохраняя структуру высших порядков молекул. Этот метод называется native-PAGE. В качестве альтернативы может быть добавлен химический денатурант для удаления этой структуры и превращения молекулы в неструктурированную молекулу, подвижность которой зависит только от ее длины (поскольку все комплексы белок-SDS имеют одинаковое соотношение массы к заряду). Эта процедура называется SDS-СТРАНИЦА. Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) - это метод разделения молекул на основе разницы в их молекулярной массе. При pH, при котором проводят гель-электрофорез, молекулы SDS заряжаются отрицательно и связываются с белками в заданном соотношении, примерно одна молекула SDS на каждые 2 аминокислоты.[3]:164–79 Таким образом, детергент обеспечивает всем белкам равномерное соотношение заряда к массе. Связываясь с белками, детергент разрушает их вторичную, третичную и / или четвертичную структуру, денатурируя их и превращая в отрицательно заряженные линейные полипептидные цепи. Под воздействием электрического поля в PAGE отрицательно заряженные полипептидные цепи перемещаются к аноду с различной подвижностью. Их подвижность или расстояние, пройденное молекулами, обратно пропорционально логарифму их молекулярной массы.[4] Сравнивая относительное отношение расстояния, пройденного каждым белком, к длине геля (Rf), можно сделать выводы об относительной молекулярной массе белков, где длина геля определяется расстоянием, пройденным небольшой молекулой. как следящий краситель.[5]

Для нуклеиновых кислот мочевина является наиболее часто используемым денатурирующим средством. Для белков додецилсульфат натрия (SDS) - это анионный детергент, применяемый к образцам белков для покрытия белков, чтобы передать два отрицательных заряда (от каждой молекулы SDS) на каждые две аминокислоты денатурированного белка.[3]:161–3 2-меркаптоэтанол может также использоваться для разрыва дисульфидных связей, обнаруженных между белковыми комплексами, что способствует дальнейшей денатурации белка. В большинстве белков связывание SDS с полипептидными цепями обеспечивает равномерное распределение заряда на единицу массы, что приводит к фракционированию по приблизительному размеру во время электрофореза. Белки с большим гидрофобным содержанием - например, многие мембранные белки и те, которые взаимодействуют с поверхностно-активные вещества в их естественной среде - их сложнее точно лечить с помощью этого метода из-за большей вариабельности соотношения связанных SDS.[6] С процедурной точки зрения совместное использование как Native, так и SDS-PAGE может быть использовано для очистки и разделения различных субъединиц белка. Native-PAGE сохраняет олигомерную форму нетронутой, и на геле будет видна полоса, представляющая уровень активности. SDS-PAGE денатурирует и разделяет олигомерную форму на ее мономеры, показывая полосы, которые представляют их молекулярные массы. Эти полосы можно использовать для идентификации и оценки чистоты белка.[3]:161–3

Процедура

Базовые приготовления

Образцы могут быть любым материалом, содержащим белки или нуклеиновые кислоты. Они могут быть получены биологическим путем, например, из прокариотических или эукариотических клеток, тканей, вирусов, образцов окружающей среды или очищенных белков. В случае твердых тканей или клеток они часто сначала разрушаются механически с помощью блендер (для больших объемов образца), используя гомогенизатор (меньшие объемы), соникатор или используя циклический режим высокого давления и комбинацию биохимических и механических методов, включая различные типы фильтрации и центрифугирование - могут использоваться для разделения различных ячеек и органеллы перед электрофорезом. Синтетические биомолекулы, такие как олигонуклеотиды также могут использоваться в качестве аналитов.

Снижение типичного дисульфидная связь по DTT через два последовательных тиол-дисульфидный обмен реакции.

Образец для анализа при желании может быть смешан с химическим денатурантом, обычно SDS для белков или мочевины для нуклеиновых кислот. SDS - анионный моющее средство который денатурирует вторичные и не связанные дисульфидными связями третичные структуры и дополнительно накладывают отрицательный заряд на каждый белок пропорционально его массе. Мочевина разрывает водородные связи между пар оснований нуклеиновой кислоты, вызывая отжиг составляющих цепей. Нагревание образцов до температуры не менее 60 ° C дополнительно способствует денатурации.[7][8][9][10]

В дополнение к SDS белки необязательно могут быть кратковременно нагреты почти до кипения в присутствии восстанавливающего агента, такого как дитиотреитол (DTT) или же 2-меркаптоэтанол (бета-меркаптоэтанол / BME), который дополнительно денатурирует белки за счет уменьшения дисульфидных связей, таким образом преодолевая некоторые формы третичного сворачивания белка и разрушая структуру четвертичного белка (олигомерные субъединицы). Это известно как сокращение SDS-PAGE.

В раствор может быть добавлен следящий краситель. Обычно он имеет более высокую электрофоретическую подвижность, чем аналиты, что позволяет экспериментатору отслеживать продвижение раствора через гель во время электрофоретического анализа.

SDS-PAGE sample.png

Приготовление акриламидных гелей

Гели обычно состоят из акриламид, бисакриламид, необязательный денатурант (SDS или мочевина) и буфер с отрегулированным pH. Раствор можно дегазировать под вакуумом, чтобы предотвратить образование пузырьков воздуха во время полимеризации. В качестве альтернативы, бутанол может быть добавлен в растворяющий гель (для белков) после его заливки, поскольку бутанол удаляет пузырьки и делает поверхность гладкой.[11]Источник свободных радикалов и стабилизатор, например персульфат аммония и ТЕМЕД добавляются для инициирования полимеризации.[12] В результате реакции полимеризации образуется гель из-за добавления бисакриламид, которые могут образовывать поперечные связи между двумя молекулами акриламида. Отношение бисакриламида к акриламиду можно варьировать для специальных целей, но обычно составляет примерно 1 часть к 35. Концентрация акриламида в геле также может варьироваться, обычно в диапазоне от 5% до 25%. Гели с более низким процентным содержанием лучше подходят для разделения молекул с очень высокой молекулярной массой, в то время как для разделения более мелких белков требуется гораздо более высокое процентное содержание акриламида. Средний диаметр пор полиакриламидных гелей определяется общей концентрацией акриламидов (% T, где T = общая концентрация акриламида и бисакриламида) и концентрацией акриламида. сшивающий агент бисакриламид (% C с C = концентрация бисакриламида).[13] Размер пор уменьшается обратно до% T. Что касается% C, то концентрация 5% дает самые маленькие поры, так как влияние бисакриламида на размер пор имеет парабола -фигура с вершина в 5%.

SDS-PAGE acrylamide stock.png

Гели обычно полимеризуются между двумя стеклянными пластинами в литейном устройстве для геля с гребенкой, вставленной вверху для создания лунок для образцов. После полимеризации геля гребешок можно снять, и гель готов для электрофореза.

SDS-PAGE Acrylamide gel.png

Электрофорез

В PAGE используются различные буферные системы в зависимости от природы образца и цели эксперимента. Буферы, используемые на аноде и катоде, могут быть одинаковыми или разными.[9][14][15]

SDS-PAGE Buffers.png
SDS-PAGE Electrophoresis.png

К гелю прикладывается электрическое поле, в результате чего отрицательно заряженные белки или нуклеиновые кислоты мигрируют через гель от отрицательного электрода (который является катодом, поскольку это электролитический, а не гальванический элемент) и к положительному электроду ( анод). В зависимости от своего размера каждая биомолекула по-разному движется через матрицу геля: небольшие молекулы легче проходят через поры в геле, а более крупные - сложнее. Гель обычно протекает в течение нескольких часов, хотя это зависит от напряжения, приложенного к гелю; миграция происходит быстрее при более высоких напряжениях, но эти результаты обычно менее точны, чем при более низких напряжениях. По прошествии установленного времени биомолекулы мигрировали на разные расстояния в зависимости от их размера. Более мелкие биомолекулы проходят дальше по гелю, а более крупные остаются ближе к месту происхождения. Таким образом, биомолекулы можно разделить примерно по размеру, который зависит в основном от молекулярной массы в денатурирующих условиях, но также зависит от конформации более высокого порядка в естественных условиях. Подвижность геля определяется как скорость миграции при градиенте напряжения 1 В / см и измеряется в см.2/ сек / В.[3]:161–3 Для аналитических целей относительная подвижность биомолекул, ржотношение расстояния, пройденного молекулой по гелю, к общему расстоянию движения следящего красителя в зависимости от молекулярной массы молекулы (или иногда логарифма MW, или, скорее, Mр, молекулярный радиус). Такие обычно линейные графики представляют стандартные маркеры или калибровочные кривые, которые широко используются для количественной оценки различных размеров биомолекул.[3]:161–3

Определенный гликопротеины однако, ведут себя аномально на гелях SDS. Кроме того, сообщается, что анализ более крупных белков в диапазоне от 250 000 до 600 000 Да является проблематичным из-за того, что такие полипептиды неправильно перемещаются в обычно используемых гелевых системах.[16]

Дальнейшая обработка

Два SDS-PAGE-геля после завершения цикла

После электрофореза гель может быть окрашен (для белков, чаще всего с Кумасси бриллиантовый синий Р-250 или авторадиография; для нуклеиновых кислот, этидиум бромид; или для любого, серебряное пятно ), позволяя визуализировать разделенные белки или обрабатывать их дальше (например, Вестерн-блоттинг ). После окрашивания биомолекулы разных видов проявляются в виде отдельных полос внутри геля. Обычно бегать маркеры размера молекулярной массы известной молекулярной массы на отдельной дорожке в геле для калибровки геля и определения приблизительного молекулярная масса неизвестных биомолекул путем сравнения пройденного расстояния относительно маркера.

Для белков SDS-PAGE обычно является первым выбором в качестве анализа чистоты из-за его надежности и простоты. Присутствие SDS и стадия денатурирования разделяют белки примерно по размеру, но может происходить аберрантная миграция некоторых белков. Различные белки также могут окрашиваться по-разному, что мешает количественной оценке путем окрашивания. PAGE можно также использовать в качестве препаративного метода очистки белков. Например, количественный препаративный электрофорез в нативном непрерывном полиакриламидном геле (QPNC-PAGE ) - это метод отделения родных металлопротеины в сложных биологических матрицах.

Химические ингредиенты и их роль

Полиакриламидный гель (ПАГ) была известна как потенциальная среда для встраивания для срезов тканей еще в 1964 году, и две независимые группы использовали PAG в электрофорезе в 1959 году.[17][18] Он обладает несколькими электрофоретически желательными свойствами, которые делают его универсальным средством. Это синтетический, термостойкий, прозрачный, прочный, химически относительно инертный гель, который может быть приготовлен с широким диапазоном средних размеров пор.[19] Размер пор геля и воспроизводимость размера пор геля определяются тремя факторами: общим количеством присутствующего акриламида (% T) (T = общая концентрация мономера акриламида и бисакриламида), количеством сшивающего агента (% C ) (C = концентрация бисакриламида) и время полимеризации акриламида (см. QPNC-PAGE). Размер пор уменьшается с увеличением% T; при сшивании 5% С дает наименьший размер пор. Любое увеличение или уменьшение% C от 5% увеличивает размер пор, поскольку размер пор по отношению к% C является параболической функцией с вершиной как 5% C. По-видимому, это происходит из-за неоднородного связывания полимерных нитей внутри геля. Этот гелевый материал также может выдерживать высокие Напряжение градиентов, поддается различным процедурам окрашивания и обесцвечивания и может быть переработан для извлечения разделенных фракций или высушен для авторадиография и постоянная запись.

Составные части

Полиакриламидные гели состоят из геля для укладки и разделяющего геля. Укладывающиеся гели имеют более высокую пористость по сравнению с разделяющим гелем и позволяют белкам перемещаться в концентрированной области. Кроме того, штабелируемые гели обычно имеют pH 6,8, поскольку нейтральные молекулы глицина обеспечивают более быструю подвижность белков. Разделительные гели имеют pH 8,8, где анионный глицин замедляет подвижность белков. Разделительные гели позволяют разделить белки и имеют относительно более низкую пористость. Здесь белки разделены на основе размера (в SDS-PAGE) и размера / заряда (Native PAGE).[20]

Химическая буфер стабилизирует значение pH до желаемого значения в самом геле и в буфере для электрофореза. Выбор буфера также влияет на электрофоретическую подвижность буфера. противоионы и тем самым расслоение геля. Буфер также должен быть инертным, не модифицировать и не реагировать с большинством белков. В зависимости от области применения в качестве катодного и анодного буферов могут использоваться, соответственно, разные буферы. В одном геле можно использовать несколько значений pH, например, в DISC-электрофорезе. Общие буферы в PAGE включают Трис, Бис-Трис, или имидазол.

Противоион балансировать собственный заряд буферного иона, а также влиять на напряженность электрического поля во время электрофореза. В катодных буферах SDS-PAGE часто избегают высокозаряженных и подвижных ионов, но они могут быть включены в сам гель, где он мигрирует впереди белка. В таких приложениях, как DISC SDS-PAGE, значения pH в геле могут изменяться, чтобы изменить средний заряд противоионов во время анализа, чтобы улучшить разрешение. Популярные противоионы: глицин и трицин. Глицин использовался в качестве источника замыкающего иона или медленного иона, поскольку его pKa составляет 9,69, а подвижность глицината такова, что эффективная подвижность может быть установлена ​​на значение ниже, чем у самых медленных известных белков сети. отрицательный заряд в диапазоне pH. Минимальный pH в этом диапазоне составляет приблизительно 8,0.

Акриламид (C
3ЧАС
5НЕТ; мВт: 71,08) при растворении в воде медленно, самопроизвольно автоматическиполимеризация акриламида, соединяя молекулы вместе головой к хвосту с образованием длинных одноцепочечных полимеров. Наличие свободный радикал -генерирующая система значительно ускоряет полимеризацию. Такая реакция известна как винил аддитивная полимеризация. Раствор этих полимерных цепей становится вязким, но не образует гель, потому что цепи просто скользят друг по другу. Образование геля требует соединения различных цепей вместе. Акриламид канцерогенный,[21] а нейротоксин, и репродуктивный токсин.[22] Также важно хранить акриламид в прохладном темном и сухом месте, чтобы уменьшить автополимеризацию и гидролиз.

Бисакриламид (N,N′ -Метиленбисакриламид ) (C
7ЧАС
10N
2О
2; mW: 154,17) является наиболее часто используемым сшивающим агентом для полиакриламидных гелей. Химически это можно представить как две молекулы акриламида, соединенные головой к голове своими нереактивными концами. Бисакриламид может сшивать две полиакриламидные цепи друг с другом, в результате чего получается гель.

Додецилсульфат натрия (SDS) (C
12ЧАС
25NaO
4S; mW: 288,38) (используется только в денатурирующих белковых гелях) является сильным детергентным агентом, используемым для денатурирования нативных белков в индивидуальные полипептиды. Эта денатурация, которая называется реконструктивной денатурацией, достигается не за счет полной линеаризации белка, а за счет конформационного изменения комбинации случайной спирали и вторичных структур α-спирали.[6] Когда белковая смесь нагревается до 100 ° C в присутствии SDS, моющее средство оборачивается вокруг основы полипептида. Он связывается с полипептидами при постоянном весовом соотношении 1,4 г SDS / г полипептида. В этом процессе внутренние заряды полипептидов становятся незначительными по сравнению с отрицательными зарядами, вносимыми SDS. Таким образом, полипептиды после обработки становятся стержневидными структурами, обладающими однородной плотностью заряда, то есть таким же чистым отрицательным зарядом на единицу веса. Электрофоретическая подвижность этих белков является линейной функцией логарифмы их молекулярных масс. Без SDS разные белки с одинаковой молекулярной массой мигрировали бы по-разному из-за различий в соотношении массы и заряда, поскольку каждый белок имеет изоэлектрическая точка и молекулярный вес, свойственный его первичная структура. Это известно как родная страница. Добавление SDS решает эту проблему, поскольку он связывается с белком и разворачивает его, обеспечивая почти однородный отрицательный заряд по длине полипептида.

Мочевина (CO (NH
2)
2; мВт: 60,06) является хаотропный агент что увеличивает энтропия системы путем вмешательства во внутримолекулярные взаимодействия, опосредованные не-ковалентный силы, такие как водородные связи и силы Ван дер Ваальса. Структура макромолекул зависит от суммарного воздействия этих сил, поэтому следует, что увеличение хаотропных растворенных веществ денатурирует макромолекулы,

Персульфат аммония (APS) (N
2ЧАС
8S
2О
8; mW: 228,2) является источником свободных радикалов и часто используется в качестве инициатора гелеобразования. Альтернативный источник свободных радикалов - рибофлавин, который генерировал свободные радикалы в фотохимический реакция.

ТЕМЕД (N, N, N′, N′ -Тетраметилэтилендиамин) (C
6ЧАС
16N
2; mW: 116,21) стабилизирует свободные радикалы и улучшает полимеризацию. Скорость полимеризации и свойства образующегося геля зависят от концентрации свободных радикалов. Увеличение количества свободных радикалов приводит к уменьшению средней длины полимерной цепи, увеличению мутности геля и снижению эластичности геля. Уменьшение количества показывает обратный эффект. Нижайший каталитический следует использовать концентрации, позволяющие полимеризоваться за разумный период времени. APS и TEMED обычно используются примерно в эквимолярных концентрациях в диапазоне от 1 до 10 мМ.

Химия для обработки и визуализации

СТРАНИЦА из ротавирус белки, окрашенные кумасси синим

Следующие химические вещества и процедуры используются для обработки геля и визуализированных в нем образцов белка.

Следящий краситель; поскольку белки и нуклеиновые кислоты в основном бесцветны, их прохождение через гель во время электрофореза нелегко проследить. Поэтому анионные красители с известной электрофоретической подвижностью обычно включают в буфер для образцов для ПААГ. Очень распространенный следящий краситель Бромфеноловый синий (BPB, 3 ', 3 ", 5', 5" тетрабромфенолсульфонфталеин). Этот краситель окрашен в щелочной и нейтральный pH и представляет собой небольшую отрицательно заряженную молекулу, которая движется к анод. Будучи высокомобильной молекулой, он опережает большинство белков. Когда он достигает анодный По окончании электрофореза электрофорез среды прекращают. Он может слабо связываться с некоторыми белками и придавать синий цвет. Другие распространенные отслеживающие красители: ксилол цианол, обладающий меньшей подвижностью, и Оранжевый G, обладающий большей мобильностью.

Погрузочные средства; большинство систем PAGE загружают сверху в лунки геля. Чтобы гарантировать, что образец опускается на дно геля, буфер для образца дополняется добавками, которые увеличивают плотность образца. Эти добавки должны быть неионными и инертными по отношению к белкам, чтобы не мешать электрофорезу. Общие добавки: глицерин и сахароза.

Кумасси бриллиантовый синий Р-250 (CBB) (C
45ЧАС
44N
3NaO
7S
2; мВт: 825,97) является наиболее популярным белковым красителем. Это анионный краситель, который неспецифически связывается с белками. Структура CBB преимущественно неполярная, и он обычно используется в метанольный раствор подкисленный уксусной кислотой. Белки в геле фиксируются уксусной кислотой и одновременно окрашиваются. Избыток красителя, включенного в гель, можно удалить, обесцвечивая тем же раствором без красителя. Белки обнаруживаются в виде синих полос на прозрачном фоне. Поскольку SDS также является анионным, он может мешать процессу окрашивания. Поэтому рекомендуется большой объем окрашивающего раствора, по крайней мере, в десять раз превышающий объем геля.

Этидиум бромид (EtBr) - популярный краситель нуклеиновых кислот. EtBr позволяет легко визуализировать ДНК или РНК на геле, поскольку EtBr флуоресцирует оранжевым цветом в УФ-свете.[23] Бромид этидия связывает цепи нуклеиновых кислот в процессе Интеркаляция.[3] Хотя бромистый этидий является популярным красителем, важно проявлять осторожность при использовании EtBr, так как это известный канцероген. По этой причине многие исследователи предпочитают использовать красители, такие как SYBR Green и SYBR Safe, которые являются более безопасной альтернативой EtBr.[24] EtBr используется, просто добавляя его в гелевую смесь. После того, как гель растек, его можно просмотреть с помощью системы фотодокументации.[3]

Окрашивание серебром используется, когда требуется более чувствительный метод обнаружения, так как при классическом окрашивании кумасси бриллиантовым синим обычно можно обнаружить полосу белка 50 нг, окрашивание серебром увеличивает чувствительность, как правило, в 10–100 раз. Это основано на химии фотографического развития. Белки фиксируют на геле с помощью разбавленного раствора метанола, затем инкубируют с кислым раствором нитрата серебра. Ионы серебра восстанавливаются до металлической формы формальдегидом при щелочном pH. Кислый раствор, например уксусная кислота, останавливает развитие.[25] Окрашивание серебром было введено Кереньи и Галлясом в качестве чувствительной процедуры для обнаружения следовых количеств белков в гели.[26] Метод был распространен на изучение других биологических макромолекулы которые были разделены на различные опоры.[27] Многие переменные могут влиять на цвет интенсивность и каждый белок имеет свои особенности окрашивания; чистая посуда, чистые реактивы и вода высшей степени чистоты - вот ключевые факторы успешного окрашивания.[28] Окрашивание серебром было разработано еще в 14 веке для окрашивания поверхности стекла. Он широко используется для этой цели с 16 века. Цвет ранних серебряных пятен варьировался от светло-желтого до оранжево-красного. Камилло Гольджи усовершенствовал окрашивание серебром для изучения нервная система. Метод Гольджи случайным образом окрашивает ограниченное количество клеток.[29]

Авторадиография, также используемая для обнаружения полос белка после гель-электрофореза, использует радиоактивные изотопы для маркировки белков, которые затем обнаруживаются с помощью рентгеновской пленки.[30]

Вестерн-блоттинг представляет собой процесс, с помощью которого белки, разделенные в акриламидном геле, электрофоретически переносятся на стабильную, управляемую мембрану, такую ​​как нитроцеллюлоза, нейлон, или же ПВДФ мембрана. Затем можно применять иммунохимические методы для визуализации перенесенных белков, а также точно идентифицировать относительное увеличение или уменьшение интересующего белка.

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ Петров А., Ца А., Пуглиси Дж. Д. (2013). «Глава шестнадцатая - Анализ РНК с помощью аналитического электрофореза в полиакриламидном геле». В Lorsch J (ред.). Методы в энзимологии. 530. Академическая пресса. С. 301–313. Дои:10.1016 / B978-0-12-420037-1.00016-6. ISBN  9780124200371. PMID  24034328.
  2. ^ а б Редакторы Энциклопедии Британника (2017). «Полиакриламид». Британника Онлайн Академическое издание. Энциклопедия Британника, Inc.
  3. ^ а б c d е ж грамм Нинфа А.Дж., Баллоу Д.П., Бенор М. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии (2-е изд.). Хобокен, Нью-Джерси: John Wiley & Sons, Inc. ISBN  9780470087664. OCLC  420027217.
  4. ^ Киндт Т., Голдсби Р., Осборн Б. (2007). Кубы Иммунология. Нью-Йорк: W.H. Фримен и компания. п. 553. ISBN  9781429202114.
  5. ^ Кумар А., Авасти А. (2009). Биосепарационная инженерия. Нью-Дели: I.K. Международный издательский дом. п. 137. ISBN  9789380026084.
  6. ^ а б Rath A, Glibowicka M, Nadeau VG, et al. (2009). «Связывание с детергентом объясняет аномальную миграцию мембранных белков в SDS-PAGE». Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 106 (6): 1760–5. Bibcode:2009PNAS..106.1760R. Дои:10.1073 / pnas.0813167106. ЧВК  2644111. PMID  19181854.
  7. ^ Шапиро А.Л., Виньуэла Е., Майзель Дж. В. младший (1967). «Оценка молекулярной массы полипептидных цепей с помощью электрофореза в SDS-полиакриламидных гелях». Biochem. Биофиз. Res. Commun. 28 (5): 815–20. Дои:10.1016 / 0006-291X (67) 90391-9. PMID  4861258.
  8. ^ Вебер К., Осборн М. (1969). «Надежность определения молекулярной массы электрофорезом в додецилсульфат-полиакриламидном геле». J Biol Chem. 244 (16): 4406–12. PMID  5806584.
  9. ^ а б Laemmli UK (1970). «Расщепление структурных белков при сборке головки бактериофага Т4». Природа. 227 (5259): 680–5. Bibcode:1970Натура.227..680л. Дои:10.1038 / 227680a0. PMID  5432063.
  10. ^ Caprette DR. "SDS-PAGE". Экспериментальные биологические науки. Получено 27 сентября 2009.
  11. ^ "Что означает дегазация смеси акриламидного геля?". Протокол онлайн. 2006. Получено 28 сентября 2009.
  12. ^ "SDS-PAGE". Архивировано из оригинал 20 февраля 2014 г.. Получено 12 сентября 2009.
  13. ^ Рюхель Р., Стир Р., Эрбе Э. Ф. (1978). «Наблюдения с помощью просвечивающей электронной микроскопии замороженных полиакриламидных гелей». J. Chromatogr. А. 166 (2): 563–575. Дои:10.1016 / S0021-9673 (00) 95641-3.
  14. ^ Шеггер Х, фон Ягов Г. (1987). «Электрофорез в трицин-додецилсульфат-полиакриламидном геле для разделения белков в диапазоне от 1 до 100 кДа». Анальный. Biochem. 166 (2): 368–379. Дои:10.1016/0003-2697(87)90587-2. PMID  2449095.
  15. ^ Анкеры D (2007 г.). "SDS-PAGE". Andrews Lab. Архивировано из оригинал 2 июля 2017 г.. Получено 27 сентября 2009.
  16. ^ Quandt N, Stindl A, Keller U (1993). «Электрофорез в геле с додецилсульфатом и полиакриламидом натрия для оценки высокомолекулярных полипептидов с помощью г-на». Анальный. Biochem. 214 (2): 490–494. Дои:10.1006 / abio.1993.1527. PMID  8109738.
  17. ^ Дэвис Б.Дж., Орнштейн Л. (1959). «Новый метод электрофореза высокого разрешения». Поставляется в Обществе изучения крови при Нью-Йоркской медицинской академии..
  18. ^ Раймонд С., Вайнтрауб Л. (1959). «Акриламидный гель как поддерживающая среда для зонного электрофореза». Наука. 130 (3377): 711. Bibcode:1959Научный ... 130..711R. Дои:10.1126 / science.130.3377.711. PMID  14436634.
  19. ^ Рюхель Р., Стир Р., Эрбе Э. Ф. (1978). «Наблюдения с помощью просвечивающей электронной микроскопии замороженных полиакриламидных гелей». J. Chromatogr. А. 166 (2): 563–75. Дои:10.1016 / S0021-9673 (00) 95641-3.
  20. ^ Duchesne LG, Lam JS, MacDonald LA и др. (1988). «Влияние pH и концентрации акриламида на разделение липополисахаридов в полиакриламидных гелях». Современная микробиология. 16 (4): 191–4. Дои:10.1007 / BF01568528.
  21. ^ Тареке Э., Ридберг П., Эрикссон С. и др. (2000). «Акриламид: кулинарный канцероген?». Chem. Res. Toxicol. 13 (6): 517–22. Дои:10.1021 / tx9901938. PMID  10858325.
  22. ^ ЛоПачин Р (2004). «Меняющийся взгляд на нейротоксичность акриламида». Нейротоксикология. 25 (4): 617–30. Дои:10.1016 / j.neuro.2004.01.004. PMID  15183015.
  23. ^ Сабнис Р.В. (2010). Справочник биологических красителей и красителей: синтез и промышленное применение. Хобокен, Нью-Джерси: Уайли-Блэквелл. ISBN  9780470407530. OCLC  647922579.
  24. ^ Певица В.Л., Лоулор Т.Э., Юэ С. (1999). «Сравнение мутагенности геля, окрашивающего нуклеиновую кислоту SYBR Green I, и мутагенности бромистого этидия в анализе обратной мутации сальмонелл / микросом млекопитающих (тест Эймса)». Мутат. Res. 439 (1): 37–47. Дои:10.1016 / с 1383-5718 (98) 00172-7. PMID  10029672.
  25. ^ Нинфа А.Дж., Баллоу Д.П. (2004). Фундаментальные лабораторные подходы в биохимии и биотехнологии. Хобокен, Нью-Джерси: Wiley & Sons. ISBN  9781891786006. OCLC  633862582.
  26. ^ Кереньи Л, Галляс Ф (1973). "Über Probleme der Quantitiven Auswertung der mit Physikalischer Entwicklung versilberten Agarelektrophoretogramme". Clin. Чим. Acta. 47 (3): 425–436. Дои:10.1016/0009-8981(73)90276-3. PMID  4744834.
  27. ^ Switzer RC 3rd, Merril CR, Shifrin S (1979). «Высокочувствительный серебряный краситель для обнаружения белков и пептидов в полиакриламидных гелях». Анальный. Biochem. 98 (1): 231–7. Дои:10.1016/0003-2697(79)90732-2. PMID  94518.
  28. ^ Hempelmann E, Schulze M, Götze O ​​(1984). «Свободные SH-группы важны для полихроматического окрашивания белков нитратом серебра». В Neuhof V (ред.). Электрофорез '84. Weinheim: Verlag Chemie. С. 328–30.
  29. ^ Грант G (2007). «Как Нобелевская премия по физиологии и медицине 1906 года была разделена между Гольджи и Кахалем». Мозг Res Rev. 55 (2): 490–8. Дои:10.1016 / j.brainresrev.2006.11.004. PMID  17306375.
  30. ^ Песня D, Ма S, Хор SP (2002). «Гель-электрофорез-авторадиографический анализ изображений концентрации радиоактивно меченого белкового лекарственного средства в сыворотке для фармакокинетических исследований». Журнал фармакологических и токсикологических методов. 47 (1): 59–66. Дои:10.1016 / с1056-8719 (02) 00203-4. PMID  12387940.
  31. ^ Minde DP (2012). «Определение биофизической стабильности белков в лизатах с помощью анализа быстрого протеолиза, FASTpp». PLOS One. 7 (10): e46147. Bibcode:2012PLoSO ... 746147M. Дои:10.1371 / journal.pone.0046147. ЧВК  3463568. PMID  23056252.

внешняя ссылка

Библиотечные ресурсы о
Электрофорез в полиакриламидном геле