Естественная клетка-убийца - Natural killer cell

Не путать с Природные Т-клетки-киллеры.
NK Cell
Natural killer cell.png
NK Cell, он похож на другой лимфоциты с которой он действует вместе и имеет общее происхождение.
Подробности
СистемаИммунная система
ФункцияЦитотоксический лимфоцит
Идентификаторы
MeSHD007694
FMA63147
Анатомические термины микроанатомии

Естественные клетки-киллеры, также известный как NK-клетки или же большие гранулярные лимфоциты (LGL), являются разновидностью цитотоксический лимфоцит важен для врожденная иммунная система. Роль NK-клеток аналогична роли цитотоксические Т-клетки у позвоночных адаптивный иммунный ответ. NK-клетки обеспечивают быстрый ответ на вирус -инфицированные клетки, действующие примерно через 3 дня после инфекционное заболевание и ответить на опухоль формирование. Обычно иммунные клетки обнаружить главный комплекс гистосовместимости (MHC) представлены на поверхности инфицированных клеток, вызывая цитокин высвобождение, вызывая гибель инфицированной клетки лизис или же апоптоз. Однако NK-клетки уникальны, поскольку они обладают способностью распознавать и убивать клетки, подвергшиеся стрессу, в отсутствие антитела и MHC, что способствует более быстрой иммунной реакции. Их назвали «естественными убийцами» из-за того, что они не нуждаются в активации для уничтожения клеток, у которых отсутствуют «собственные» маркеры MHC класс 1.[1] Эта роль особенно важна, потому что вредные клетки, у которых отсутствуют маркеры MHC I, не могут быть обнаружены и уничтожены другими иммунными клетками, такими как клетки Т-лимфоцитов.

NK-клетки можно идентифицировать по наличию CD56 и отсутствие CD3 (CD56+, CD3−).[2] NK-клетки (принадлежащие к группе врожденные лимфоидные клетки ) являются одним из трех видов клеток, отличных от обычных лимфоидный предшественник, два других B и Т-лимфоциты.[3] Известно, что NK-клетки дифференцируются и созревают в Костный мозг, лимфатический узел, селезенка, миндалины, и вилочковая железа, где они затем поступают в обращение.[4] NK-клетки отличаются от естественные Т-клетки-киллеры (NKT) фенотипически, по происхождению и по соответствующим эффекторным функциям; часто активность NKT-клеток способствует активности NK-клеток, секретируя интерферон гамма. В отличие от NKT-клеток, NK-клетки не экспрессируют Т-клеточные антигенные рецепторы (TCR) или Т-маркер панорамирования CD3 или поверхность иммуноглобулины (Ig) Рецепторы В-клеток, но обычно они выражают маркеры поверхности CD16 (FcγRIII) и CD57 у людей, NK1.1 или NK1.2 в C57BL / 6 мышей. В НКп46 В настоящее время маркер клеточной поверхности представляет собой еще один предпочтительный маркер NK-клеток, который экспрессируется у обоих людей, у нескольких линий мышей (включая BALB / c мыши ) и у трех распространенных видов обезьян.[5][6]

Помимо естественных клеток-киллеров, которые являются эффекторами врожденный иммунитет, как активирующие, так и ингибирующие рецепторы NK-клеток играют важную функциональную роль, включая самотолерантность и поддержание активности NK-клеток. NK-клетки также играют роль в адаптивный иммунный ответ:[7] многочисленные эксперименты продемонстрировали их способность легко приспосабливаться к ближайшему окружению и создавать антиген-специфические иммунологическая память, фундаментальный для ответа на вторичные инфекции с тем же антигеном.[8] Роль NK-клеток как во врожденном, так и в адаптивном иммунном ответе становится все более важной в исследованиях, использующих активность NK-клеток в качестве потенциального лечение рака.

Подмножества NK-клеток

NK-клетки можно классифицировать как CD56.яркий или CD56тусклый.[9][10][2] CD56яркий NK-клетки похожи на Т-хелперные клетки в оказании своего влияния путем высвобождения цитокины.[10] CD56яркий NK-клетки составляют большинство NK-клеток, обнаруженных в костном мозге, вторичной лимфоидной ткани, печени и коже.[2] CD56тусклый NK-клетки в основном находятся в периферическая кровь,[2] и характеризуются их способностью убивать клетки.[10] CD56тусклый NK-клетки всегда CD16 положительный (CD16 - ключевой медиатор антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC).[10] CD56яркий может переходить в CD56тусклый путем приобретения CD16.[2]

NK-клетки могут уничтожать инфицированные вирусом клетки посредством CD16-опосредованной ADCC.[11] Все коронавирус заболевание 2019 У пациентов (COVID-19) наблюдается истощение CD56яркий NK-клетки, но CD56тусклый истощается только у пациентов с тяжелой формой COVID-19.[11]

Рецепторы NK-клеток

Лиганд HLA для KIR

Рецепторы NK-клеток также можно дифференцировать в зависимости от функции. Естественный цитотоксичность рецепторы непосредственно вызывают апоптоз (гибель клетки) после связывания с Fas лиганд которые прямо указывают на инфицирование клетки. Независимые от MHC рецепторы (описанные выше) используют альтернативный путь для индукции апоптоза в инфицированных клетках. Активация естественных клеток-киллеров определяется балансом ингибирующей и активирующей стимуляции рецепторов. Например, если передача сигналов ингибиторного рецептора более выражена, то активность NK-клеток будет подавляться; аналогично, если активирующий сигнал является доминирующим, то в результате произойдет активация NK-клеток.[12]

Белковая структура NKG2D

Типы рецепторов NK-клеток (как с ингибирующими, так и с некоторыми активирующими элементами) различаются по структуре, и следует привести несколько примеров:

Белковая структура NKp44

Активирующие рецепторы

  • Ly49(гомодимеры), относительно древние, С-тип лектин рецепторы семейства, мультигенные присутствуют у мышей, в то время как у людей есть только один псевдогенный Ly49, рецептор классических (полиморфных) MHC I молекулы.
  • NCR (рецепторы естественной цитотоксичности), тип трансмембранных белков типа 1 суперсемейства иммуноглобулинов, при стимуляции опосредуют уничтожение NK и высвобождение IFNγ. Они связывают вирусные лиганды, такие как гемагглютинины и гемагглютинин нейраминидазы, некоторые бактериальные лиганды и клеточные лиганды, связанные с ростом опухоли, такие как PCNA.
  • CD16 (FcγIIIA ) играет роль в антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность; в частности, они связывают Иммуноглобулин G.

Тормозящие рецепторы

  • Иммуноглобулиноподобные рецепторы киллерных клеток (KIR) принадлежат к мультигенному семейству недавних развился Ig-подобные рецепторы внеклеточного домена; они присутствуют у нечеловеческих приматов и являются основными рецепторами как классических MHC I (HLA-A, HLA-B, HLA-C ) и неклассический Маму-Г (HLA-G ) у приматов. Некоторые KIR специфичны для определенных подтипов HLA. Большинство KIR являются тормозящими и доминирующими. Обычные клетки экспрессируют MHC класса 1, поэтому распознаются рецепторами KIR, и уничтожение NK-клеток ингибируется.[4]
  • CD94 / NKG2 (гетеродимеры), рецептор семейства лектинов С-типа, консервативен как у грызунов, так и у приматов и определяет неклассические (также неполиморфные) молекулы MHC I, такие как HLA-E. Экспрессия HLA-E на поверхности клетки зависит от присутствия эпитопа неамерного пептида, происходящего из сигнальной последовательности классических молекул MHC класса I, которая генерируется последовательным действием сигнальная пептидная пептидаза и протеасома. Хотя и косвенный, это способ исследовать уровни классических (полиморфных) молекул HLA.
  • ILT или же LIR (иммуноглобулиноподобный рецептор) - недавно открытые члены семейства рецепторов Ig.
  • Ly49 (гомодимеры) имеют как активирующие, так и ингибирующие изоформы. Они очень полиморфны на популяционном уровне; хотя они структурно не связаны с KIRs, они являются функциональными гомологами KIRs у мышей, включая паттерн экспрессии. Ly49 являются рецепторами для классических (полиморфных) молекул MHC I.

Функция

Апоптоз клеток, опосредованный цитолитическими гранулами

NK-клетки цитотоксический; маленький гранулы в их цитоплазма содержат белки, такие как перфорин и протеазы известный как гранзимы. При высвобождении в непосредственной близости от клетки, предназначенной для уничтожения, перфорин образует поры в клеточная мембрана клетки-мишени, создавая водный канал, через который могут проникать гранзимы и связанные с ними молекулы, вызывая либо апоптоз или осмотический лизис клеток. Различие между апоптозом и клеточным лизис важно в иммунология: лизирование инфицированной вирусом клетки потенциально может высвободить вирионы, тогда как апоптоз приводит к уничтожению вируса внутри. α-дефенсины, антимикробные молекулы, также секретируются NK-клетками и непосредственно убивают бактерии, разрушая их клеточные стенки аналогично тому, как это происходит в нейтрофилы.[4]

Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC)

Зараженные клетки обычно опсонизированный с антителами для обнаружения иммунными клетками. Антитела, которые связываются с антигенами, могут распознаваться FcγRIII (CD16 ) рецепторы экспрессируются на NK-клетках, что приводит к активации NK, высвобождению цитолитических гранул и, как следствие, клетке апоптоз. Это основной механизм убийства некоторых моноклональные антитела подобно ритуксимаб (Ритуксан), офатумумаб (Аззера), и другие. Вклад антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности в уничтожение опухолевых клеток можно измерить с помощью специального теста, который использует НК-92, бессмертная линия NK-подобных клеток, лицензированная для NantKwest, Inc.: ответ Ячейки НК-92 которые были трансфицированы с высоким сродством Рецептор Fc сравниваются с NK-92 «дикого типа», который не экспрессирует рецептор Fc.[13]

Цитокин-индуцированная активация NK и цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL)

Цитокины играют решающую роль в активации NK-клеток. Как это стресс молекулы, высвобождаемые клетками при вирусной инфекции, они служат сигналом NK-клетке о присутствии вирусные патогены в пораженном месте. Цитокины, участвующие в активации NK, включают: Ил-12, Ил-15, Ил-18, Ил-2, и CCL5. NK-клетки активируются в ответ на интерфероны или цитокины, происходящие из макрофагов. Они служат для сдерживания вирусных инфекций, в то время как адаптивный иммунный ответ генерирует антиген-специфические цитотоксические Т-клетки что может избавить от инфекции. NK-клетки работают, чтобы контролировать вирусные инфекции, секретируя IFNγ и TNFα. IFNγ активирует макрофаги для фагоцитоза и лизиса, а TNFα способствует прямому уничтожению опухолевых клеток NK. Оказалось, что пациенты с дефицитом NK-клеток очень восприимчивы к ранним фазам заражения вирусом герпеса.

Отсутствие гипотезы "я"

Принципиальная диаграмма, показывающая дополнительные действия цитотоксические Т-клетки и NK-клетки

Чтобы NK-клетки защищали организм от вирусы и другие патогены, они требуют механизмов, которые позволяют определить, инфицирована клетка или нет. Точные механизмы остаются предметом текущего исследования, но предполагается, что здесь задействовано распознавание состояния «измененного я». Чтобы контролировать свою цитотоксическую активность, NK-клетки обладают двумя типами поверхности. рецепторы: активирующие рецепторы и ингибирующие рецепторы, в том числе иммуноглобулин-подобные рецепторы киллерных клеток. Большинство этих рецепторов не являются уникальными для NK-клеток и могут присутствовать в некоторых Т-клетка подмножества, а также.

Тормозящие рецепторы распознают MHC класс I аллели, что могло бы объяснить, почему NK-клетки предпочтительно убивают клетки, которые обладают низким уровнем молекул MHC класса I. Этот режим взаимодействия NK-клеток-мишеней известен как «распознавание отсутствующего себя», термин, придуманный Клас Карре и коллеги в конце 90-х. Молекулы MHC класса I являются основным механизмом, с помощью которого клетки отображают вирусные или опухолевые антигены цитотоксическим Т-клеткам. Общая эволюционная адаптация к этому наблюдается как у внутриклеточных микробы и опухоли: хроническое подавление молекул MHC I, которое делает пораженные клетки невидимыми для Т-клеток, позволяя им уклоняться от опосредованного Т-клетками иммунитета. NK-клетки, по-видимому, эволюционировали как эволюционный ответ на эту адаптацию (потеря MHC устраняет действие CD4 / CD8, поэтому для выполнения этой функции появилась другая иммунная клетка).[14]

Наблюдение за опухолевыми клетками

Естественные клетки-киллеры часто лишены антиген-специфических рецепторов клеточной поверхности, поэтому являются частью врожденного иммунитета. т.е. способен немедленно реагировать без предварительного контакта с патогеном. Как у мышей, так и у людей можно увидеть, что NK играют роль в иммунном надзоре за опухолью, непосредственно индуцируя гибель опухолевых клеток (NK действуют как цитолитические эффекторные лимфоциты), даже в отсутствие молекул поверхностной адгезии и антигенных пептидов. Эта роль NK-клеток имеет решающее значение для иммунного успеха, особенно потому, что Т-клетки неспособны распознавать патогены в отсутствие поверхностных антигенов.[1] Обнаружение опухолевых клеток приводит к активации NK-клеток и последующей продукции и высвобождению цитокинов.

Если опухолевые клетки не вызывают воспаления, они также будут считаться собственными и не будут вызывать ответ Т-клеток. Ряд цитокинов продуцируется NK, включая фактор некроза опухоли α (TNFα ), IFNγ, и интерлейкин (Ил-10 ). TNFα и IL-10 действуют как провоспалительные и иммунодепрессанты соответственно. Активация NK-клеток и последующее производство цитолитических эффекторных клеток влияет на макрофаги, дендритные клетки, и нейтрофилы, что впоследствии обеспечивает антиген-специфические Т- и В-клеточные ответы. Вместо того, чтобы действовать через антиген-специфические рецепторы, лизис опухолевых клеток NK-клетками опосредуется альтернативными рецепторами, включая NKG2D, NKp44, NKp46, NKp30 и DNAM.[12] NKG2D это дисульфид -связанный гомодимер который распознает ряд лигандов, включая ULBP и MICA, которые обычно экспрессируются на опухолевых клетках. Роль интерфейса дендритная клетка-NK-клетки в иммунобиологии была изучена и определена как критическая для понимания сложной иммунной системы.[нужна цитата ]

NK-клетки вместе с макрофаги и несколько других типов клеток, экспрессируют молекулу рецептора Fc (FcR) (FC-gamma-RIII = CD16), активирующую биохимическую рецептор что связывает Fc порция класса IgG антитела. Это позволяет NK-клеткам нацеливаться на клетки, против которых гуморальный ответ прошел через лизировать клетки благодаря антителозависимой цитотоксичности (ADCC). Этот ответ зависит от аффинности рецептора Fc, экспрессируемого на NK-клетках, который может иметь высокое, промежуточное и низкое сродство к части Fc антитела. Это сродство определяется аминокислотой в положении 158 белка, которым может быть фенилаланин (аллель F) или валин (аллель V). Лица с высокоаффинным FcRgammRIII (аллель 158 V / V) лучше реагируют на терапию антителами. Это было показано для пациентов с лимфомой, которые получали антитело Ритуксан. Пациенты с аллелем 158 V / V имели лучший противоопухолевый ответ. Только 15–25% населения экспрессирует аллель 158 V / V. Чтобы определить вклад моноклональных антител в ADCC, клетки NK-92 («чистая» линия NK-клеток) трансфицировали геном высокоаффинного FcR.

Очистка стареющих клеток

Естественные клетки-киллеры (NK-клетки) и макрофаги играют важную роль в разминировании стареющие клетки.[15] Естественные клетки-киллеры напрямую убивают стареющие клетки и производят цитокины которые активируют макрофаги, удаляющие стареющие клетки.[15]

Естественные клетки-киллеры могут использовать NKG2D рецепторы для обнаружения стареющих клеток и уничтожения этих клеток с помощью перфорин порообразующий цитолитический белок.[16] CD8 + цитотоксические Т-лимфоциты также используют рецепторы NKG2D для обнаружения стареющих клеток и способствуют уничтожению, подобно NK-клеткам.[16]

Адаптивные свойства NK-клеток - «память-подобные», «адаптивные» и NK-клетки памяти.

Основная статья: Адаптивные NK-клетки

Способность генерировать клетки памяти после первичной инфекции и последующей быстрой иммунной активации и ответа на последующие инфекции одним и тем же антигеном является фундаментальной для той роли, которую Т- и В-клетки играют в адаптивном иммунном ответе. В течение многих лет NK-клетки считались частью врожденной иммунной системы. Однако в последнее время появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что NK-клетки могут проявлять несколько свойств, которые обычно приписываются адаптивным иммунным клеткам (например, ответы Т-клеток), такие как динамическое расширение и сокращение подмножеств, увеличенная продолжительность жизни и форма иммунологической памяти, характеризующаяся более сильной ответ на вторичное заражение тем же антигеном.[17][18]На мышах большинство исследований проводилось с мышиным цитомегаловирусом (MCMV) и на моделях реакций гиперчувствительности к гаптену. В частности, в модели MCMV были обнаружены защитные функции памяти вызванных MCMV NK-клеток. [19]и прямое распознавание MCMV-лиганда m157 рецептором Ly49, как было показано, имеет решающее значение для генерации адаптивных ответов NK-клеток.[19] На людях большинство исследований было сосредоточено на расширении подмножества NK-клеток, несущих активирующий рецептор. NKG2C (KLRC2 ). Такие расширения наблюдались в первую очередь в ответ на цитомегаловирус человека (HCMV),[20] но также и при других инфекциях, включая Хантавирус, Вирус чикунгунья, ВИЧ, или вирусный гепатит. Однако независимо от того, вызывают ли эти вирусные инфекции распространение адаптивных NKG2C + NK-клеток или другие инфекции вызывают повторную активацию латентного HCMV (как предполагается для гепатита[21]), остается областью исследований. Примечательно, что недавние исследования показывают, что адаптивные NK-клетки может использовать активирующий рецептор NKG2C (KLRC2 ) для прямой привязки к цитомегаловирус человека -производные пептидные антигены и отвечают на распознавание пептидов активацией, размножением и дифференцировкой,[22] механизм реагирования на вирусные инфекции, который ранее был известен только Т-клетки из адаптивная иммунная система.

Функция NK-клеток при беременности

Поскольку в большинстве случаев беременность происходит при двух родителях, у которых ткань не соответствует, успешная беременность требует, чтобы иммунная система матери была подавлен. Считается, что NK-клетки являются важным типом клеток в этом процессе.[23] Эти клетки известны как "маточные NK-клетки "(uNK-клетки), и они отличаются от периферических NK-клеток. Они находятся в CD56яркий Подмножество NK-клеток, обладающих высокой секрецией цитокинов, но с низкой цитотоксической способностью и относительно сходных с периферическим CD56яркий NK-клетки с немного другим рецепторным профилем.[23] Эти клетки uNK являются наиболее многочисленными лейкоциты подарок в утробе матери на ранних сроках беременности составляет около 70% лейкоцитов, но вопрос о том, откуда они берутся, остается спорным.[24]

Эти NK-клетки обладают способностью вызывать цитотоксичность клеток. in vitro, но на более низком уровне, чем периферические NK-клетки, несмотря на то, что они содержат перфорин.[25] Отсутствие цитотоксичности in vivo может быть связано с наличием лигандов для их ингибирующих рецепторов. Трофобласт клетки подавляют HLA-A и HLA-B защищаться от цитотоксические Т-клетки -опосредованная смерть. Обычно это запускает NK-клетки, не узнавая себя; однако эти клетки выживают. Избирательное удержание HLA-E (который является лигандом рецептора, ингибирующего NK-клетки НКГ2А ) и HLA-G (который является лигандом рецептора, ингибирующего NK-клетки KIR2DL4 ) трофобластом, как полагают, защищает его от гибели, опосредованной NK-клетками.[23]

NK-клетки матки не показали значительной разницы у женщин с повторный выкидыш по сравнению с контролем. Однако у женщин с повторяющимися выкидышами процент периферических NK-клеток выше, чем в контрольных группах.[26]

NK-клетки секретируют высокий уровень цитокинов, которые помогают опосредовать их функцию. NK-клетки взаимодействуют с HLA-C для производства цитокинов, необходимых для пролиферации трофобластов. Некоторые важные цитокины, которые они выделяют, включают: TNF-α, Ил-10, IFN-γ, GM-CSF и TGF-β, среди прочего.[23] Например, IFN-γ расширяет и истончает стенки спиральных артерий матери, чтобы усилить приток крови к месту имплантации.[27]

Уклонение NK-клеток от опухолевых клеток

Сбрасывая приманку NKG2D растворимые лиганды опухолевых клеток могут избежать иммунных ответов. Эти растворимые лиганды NKG2D связываются с рецепторами NKG2D NK-клеток, активируя ложный NK-ответ и, следовательно, создавая конкуренцию за рецепторный сайт.[1] Этот метод уклонения встречается в рак простаты. Кроме того, опухоли рака простаты могут уклоняться от распознавания клеток CD8 из-за их способности подавлять экспрессию молекул MHC класса 1. Этот пример уклонения от иммунитета фактически подчеркивает важность NK-клеток в надзоре за опухолью и ответной реакции, поскольку клетки CD8 могут, следовательно, действовать на опухолевые клетки только в ответ на NK-инициированную продукцию цитокинов (адаптивный иммунный ответ).[28]

Избыточные NK-клетки

Экспериментальное лечение NK-клетками привело к чрезмерной продукции цитокинов и даже септический шок. Истощение воспалительного цитокина интерферон гамма отменил эффект.[нужна цитата ]

История

В ранних экспериментах по клеточно-опосредованной цитотоксичности против опухолевых клеток-мишеней, как на онкологических больных, так и на животных моделях, исследователи постоянно наблюдали то, что было названо «естественной» реактивностью; то есть определенная популяция клеток, по-видимому, способна лизировать опухолевые клетки без предварительной сенсибилизации к ним. Первое опубликованное исследование, в котором утверждалось, что необработанные лимфоидные клетки способны обеспечивать естественный иммунитет к опухолям, было проведено доктором Генри Смитом в Медицинской школе Университета Лидса в 1966 году.[29] что привело к выводу, что «феномен, по-видимому, является выражением защитных механизмов против роста опухоли, присутствующих у нормальных мышей». Другие исследователи также сделали аналогичные наблюдения, но поскольку эти открытия не соответствовали установленной в то время модели, многие изначально считали эти наблюдения артефактами.[30]

К 1973 году активность «естественного убийства» была установлена ​​у самых разных видов, и было постулировано существование отдельной линии клеток, обладающих этой способностью. Открытие того, что уникальный тип лимфоцитов отвечает за «естественную» или спонтанную цитотоксичность, было сделано в начале 1970-х докторантом Рольфом Кисслингом и докторантом Хью Проссом на мышах.[31] и Хью Проссом и докторантом Микаэлем Джондалом в человеке.[32][33] Работа мыши и человека проводилась под руководством профессоров. Ева Кляйн и Ханс Вигзелл, соответственно, из Каролинского института в Стокгольме. Исследование Кисслинга включало хорошо изученную способность Т-лимфоцитов лизировать опухолевые клетки, против которых они были ранее иммунизированы. Просс и Джондал изучали клеточно-опосредованную цитотоксичность в нормальной крови человека и влияние удаления различных клеток, несущих рецептор, на эту цитотоксичность. Позже в том же году Рональд Херберман опубликовали аналогичные данные относительно уникальной природы эффекторной клетки мыши.[34]Человеческие данные были подтверждены, по большей части, Западом. и другие.[35] с использованием аналогичных методов и той же линии эритролейкозных клеток-мишеней, K562. K562 очень чувствителен к лизису человеческими NK-клетками, и на протяжении десятилетий K562 51Анализ высвобождения хрома стал наиболее часто используемым методом определения функциональной активности NK человека.[36] Его почти универсальное использование означает, что экспериментальные данные можно легко сравнивать в разных лабораториях по всему миру.

Использование центрифугирования с прерывистой плотностью, а затем моноклональные антитела естественная убивающая способность была сопоставлена ​​с подмножеством крупных гранулярных лимфоцитов, известных сегодня как NK-клетки. Демонстрация того, что изолированные в градиенте плотности крупные гранулярные лимфоциты ответственны за активность NK человека, сделанная Тимоненом и Сакселой в 1980 г.,[37] это был первый раз, когда NK-клетки были визуализированы под микроскопом, и был крупным прорывом в этой области.

Приложения

Противораковая терапия

Поскольку NK-клетки распознают клетки-мишени, когда они экспрессируют чужие антигены HLA (но не свои), инфузии аутологичных (собственных) NK-клеток не показали каких-либо противоопухолевых эффектов. Вместо этого исследователи работают над использованием аллогенных клеток из периферической крови, что требует, чтобы все Т-клетки были удалены перед инфузией пациентам, чтобы исключить риск болезнь трансплантат против хозяина, что может быть фатальным. Этого можно добиться с помощью иммуномагнитной колонки (CliniMACS). Кроме того, из-за ограниченного количества NK-клеток в крови (только 10% лимфоцитов являются NK-клетками), их количество необходимо увеличивать в культуре. Это может занять несколько недель, и доход зависит от донора. Более простой способ получить большое количество чистых NK-клеток - это размножение клеток NK-92, клетки которых непрерывно растут в культуре и могут быть увеличены до клинического уровня в мешках или биореакторах.[38] Клинические исследования показали, что он хорошо переносится, и у пациентов с раком легких, меланомой и лимфомой наблюдались некоторые противоопухолевые реакции.[39][40] Однако существуют значительные ограничения, связанные с иммунотерапией NK-92, поскольку клеточная линия была получена от пациента с неходжкинской лимфомой и, таким образом, должна быть облучена до инфузии, что ограничивает сохранение in vivo. Кроме того, в клетках NK-92 отсутствует CD-16, что делает их неспособными выполнять ADCC, что не позволяет использовать эту терапию в сочетании с терапией моноклональными антителами.[41]

Клетки NK-92 были получены от пациента с неходжкинской лимфомой и, таким образом, должны быть облучены перед инфузией, что ограничивает сохранение in vivo. В родительских клетках NK-92 также отсутствует CD16, что делает их неспособными выполнять ADCC изначально. [35] Однако они могут быть сконструированы так, чтобы включать CD16, таким образом обеспечивая функцию ADCC и расширяя их потенциальную терапевтическую ценность.

Инфузии Т-клеток, сконструированных для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR), который распознает молекулу антигена на лейкозных клетках, могут вызывать ремиссии у пациентов с запущенной лейкемией. Существуют логистические проблемы для увеличения количества Т-клеток, и исследователи работают над применением той же технологии к NK-клеткам периферической крови и NK-92. Клетки NK-92 могут быть сконструированы так, чтобы включать как CD16, так и CAR, чтобы позволить им выполнять как ADCC-опосредованное уничтожение с помощью антител IgG1, так и CAR-опосредованное уничтожение из одной и той же клетки. Одна такая производная от NK-92 клеточная линия, называемая t-haNK, была сконструирована с использованием как CD16, так и анти-PD-L1 CAR, и в настоящее время находится в клинической разработке по показаниям в онкологии. НК-92.

В исследовании, проведенном в Бостонской детской больнице, в сотрудничестве с Институт рака Дана-Фарбер, у которых мыши с ослабленным иммунитетом заразились лимфомы из EBV инфекции, NK-активирующий рецептор, называемый NKG2D был слит со стимулирующим Fc часть антитела EBV. Слияние NKG2D-Fc оказалось способным снижать рост опухоли и продлевать выживаемость реципиентов. В модели трансплантации лимфом, подпитываемых LMP1, слияние NKG2D-Fc оказалось способным снижать рост опухоли и продлевать выживаемость реципиентов.

При лимфоме Ходжкина, при которой злокачественные клетки Ходжкина Рида-Штернберга обычно дефицитны по HLA класса I, уклонение от иммунитета частично опосредовано перекосом в сторону фенотипа истощенных NK-клеток PD-1hi, и повторная активация этих NK-клеток, по-видимому, является одним из факторов. механизм действия, вызванный блокадой контрольной точки.[42]

Новые открытия

Врожденная устойчивость к ВИЧ

Недавние исследования показывают, что специфические взаимодействия генов KIR-MHC класса I могут контролировать врожденную генетическую устойчивость к определенным вирусным инфекциям, включая ВИЧ и его последующее развитие СПИД.[4] Было обнаружено, что определенные аллотипы HLA определяют прогрессирование ВИЧ в СПИД; примером является HLA-B57 и аллели HLA-B27, которые, как было обнаружено, замедляют прогрессирование от ВИЧ к СПИДу. Это очевидно, потому что пациенты, экспрессирующие эти аллели HLA, имеют более низкую вирусную нагрузку и более постепенное снижение CD4+ Т номера ячеек. Несмотря на обширные исследования и собранные данные по измерению генетической корреляции аллелей HLA и аллотипов KIR, еще не сделано твердого вывода о том, какая комбинация обеспечивает снижение восприимчивости к ВИЧ и СПИДу.

NK-клетки могут оказывать иммунное давление на ВИЧ, что ранее было описано только для Т-клеток и антител.[43] ВИЧ мутирует, чтобы избежать активности NK-клеток.[43]

Тканеворезидентные NK-клетки

Большая часть наших текущих знаний получена из исследований NK-клеток селезенки мыши и периферической крови человека. Однако в последние годы были описаны популяции резидентных в ткани NK-клеток.[44][45] Эти резидентные в ткани NK-клетки обладают транскрипционным сходством с резидентными в тканях Т-клетками памяти, описанными ранее. Однако резидентные в ткани NK-клетки не обязательно имеют фенотип памяти, и фактически большинство резидентных в ткани NK-клеток функционально незрелы.[46] Эти специализированные подмножества NK-клеток могут играть роль в гомеостазе органов. Например, в печени человека NK-клетки обогащены определенным фенотипом и участвуют в контроле фиброза печени.[47][48] Резидентные в тканях NK-клетки также были идентифицированы в таких местах, как костный мозг, селезенка, а в последнее время - в легких, кишечнике и лимфатических узлах. На этих участках резидентные в ткани NK-клетки могут действовать как резервуар для поддержания незрелых NK-клеток у людей на протяжении всей жизни.[46]

Смотрите также

Рекомендации

  1. ^ а б c Вивье Э., Раулет Д.Х., Моретта А., Калиджури М.А., Зитвогель Л., Ланье Л.Л., Йокояма В.М., Уголини С. (январь 2011 г.). «Врожденный или адаптивный иммунитет? Пример естественных клеток-киллеров». Наука. 331 (6013): 44–9. Bibcode:2011Научный ... 331 ... 44В. Дои:10.1126 / science.1198687. ЧВК  3089969. PMID  21212348.
  2. ^ а б c d е Пфефферле А, Якобс Б., Зольберг Э, Мальмберг К. (2020). «Расшифровка гомеостаза естественных киллерных клеток». Границы иммунологии. 11: 812. Дои:10.3389 / fimmu.2020.00812. ЧВК  7235169. PMID  32477340.
  3. ^ Roitt I, Brostoff J, Male D (2001). Иммунология (6-е изд.), 480p. Сент-Луис: Мосби, ISBN  0-7234-3189-2.
  4. ^ а б c d Iannello A, Debbeche O, Samarani S, Ahmad A (июль 2008 г.). «Противовирусные реакции NK-клеток при ВИЧ-инфекции: I. Гены рецепторов NK-клеток как детерминанты устойчивости к ВИЧ и прогрессирования СПИДа». Журнал биологии лейкоцитов. 84 (1): 1–26. CiteSeerX  10.1.1.619.9639. Дои:10.1189 / jlb.0907650. PMID  18388298. S2CID  26975415.
  5. ^ Уолцер Т., Блери М., Ша Дж., Фузери Н., Чассон Л., Роббинс С.Х., Джегер С., Андре П., Готье Л., Даниэль Л., Шемин К., Морель И., Далод М., Имбер Дж, Пьер М., Моретта А., Романь Ф. , Вивье Э (февраль 2007 г.). «Идентификация, активация и селективное удаление in vivo NK-клеток мыши с помощью NKp46». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 104 (9): 3384–9. Bibcode:2007PNAS..104.3384W. Дои:10.1073 / pnas.0609692104. ЧВК  1805551. PMID  17360655.
  6. ^ Сивори С., Витале М., Морелли Л., Сансеверино Л., Аугульяро Р., Боттино С., Моретта Л., Моретта А. (октябрь 1997 г.). «p46, новая поверхностная молекула, специфичная для естественных клеток-киллеров, которая опосредует активацию клеток». Журнал экспериментальной медицины. 186 (7): 1129–36. Дои:10.1084 / jem.186.7.1129. ЧВК  2211712. PMID  9314561.
  7. ^ Арина А., Мурильо О, Дубро Дж., Аспиликуэта А., Альфаро С., Перес-Грасиа Дж. Л., Бенданди М., Паленсия Б., Эрвас-Стаббс С., Мелеро I (май 2007 г.). «Клеточные связи естественных лимфоцитов-киллеров в иммунологии и иммунотерапии рака». Мнение эксперта по биологической терапии. 7 (5): 599–615. Дои:10.1517/14712598.7.5.599. PMID  17477799. S2CID  43003664.
  8. ^ Watzl C (2014). Как вызвать убийцу: модуляция реактивности естественных клеток-киллеров на многих уровнях. Достижения в иммунологии. 124. С. 137–70. Дои:10.1016 / B978-0-12-800147-9.00005-4. ISBN  9780128001479. PMID  25175775.
  9. ^ Хашеми Э., Маларканнан С (2020). «Резидентные в тканях NK-клетки: развитие, созревание и клиническая значимость». Рак. 12 (6): 1553. Дои:10.3390 / раки12061553. ЧВК  7352973. PMID  32545516.
  10. ^ а б c d Ву С, Фу Т, Цзян И, Шао З (2020). «Естественные клетки-киллеры в биологии и терапии рака». МОЛЕКУЛЯРНЫЙ РАК. 19 (1): 120. Дои:10.1186 / s12943-020-01238-х. ЧВК  7409673. PMID  32762681.
  11. ^ а б Market M, Angka L, Martel AB, Auer RC (2020). «Сглаживание кривой COVID-19 с помощью иммунотерапии на основе естественных клеток-киллеров». Границы иммунологии. 11: 1512. Дои:10.3389 / fimmu.2020.01512. ЧВК  7324763. PMID  32655581.
  12. ^ а б Терунума Х., Дэн Х, Деван З., Фудзимото С., Ямамото Н. (2008). «Потенциальная роль NK-клеток в индукции иммунных ответов: значение для иммунотерапии на основе NK-клеток при раке и вирусных инфекциях». Международные обзоры иммунологии. 27 (3): 93–110. Дои:10.1080/08830180801911743. PMID  18437601. S2CID  27557213.
  13. ^ Смит MJ, Hayakawa Y, Takeda K, Yagita H (ноябрь 2002 г.). «Новые аспекты наблюдения за естественными клетками-киллерами и терапии рака». Обзоры природы. Рак. 2 (11): 850–61. Дои:10.1038 / nrc928. PMID  12415255. S2CID  1430364.
  14. ^ Лодоэн МБ, Ланье Л.Л. (2005). «Вирусная модуляция иммунитета NK-клеток». Обзоры природы Микробиология. 3 (1): 59–69. Дои:10.1038 / nrmicro1066. PMID  15608700. S2CID  16655783.
  15. ^ а б Антонанджели Ф, Зингони А, Сориани А, Сантони А (2019). «Старые клетки: жизнь или смерть - это вопрос NK-клеток». Журнал биологии лейкоцитов. 105 (6): 1275–1283. Дои:10.1002 / JLB.MR0718-299R. PMID  30811627. S2CID  73469394.
  16. ^ а б Прата Л.Г., Овсянникова И.Г., Чкония Т., Киркланд Дж.Л. (2018). «Очистка стареющих клеток иммунной системой: новые терапевтические возможности». Семинары по иммунологии. 40: 101275. Дои:10.1016 / j.smim.2019.04.003. ЧВК  7061456. PMID  31088710.
  17. ^ Рёлле А., Поллманн Дж., Червенка А. (сентябрь 2013 г.). «Память об инфекциях: новая роль естественных клеток-киллеров». Патогены PLOS. 9 (9): e1003548. Дои:10.1371 / journal.ppat.1003548. ЧВК  3784484. PMID  24086127.
  18. ^ Пызик М, Видаль С.М. (2009). «Естественные клетки-киллеры: NK-клетки бегут по дорожке памяти». Иммунология и клеточная биология. 87 (4): 261–3. Дои:10.1038 / icb.2009.10. PMID  19290015. S2CID  42943696.
  19. ^ а б Sun JC, Beilke JN, Lanier LL (январь 2009 г.). «Адаптивные иммунные свойства естественных клеток-киллеров». Природа. 457 (7229): 557–61. Bibcode:2009Натура.457..557S. Дои:10.1038 / природа07665. ЧВК  2674434. PMID  19136945.
  20. ^ Гума М., Ангуло А., Вилчес С., Гомес-Лозано Н., Малац Н., Лопес-Ботет М. (декабрь 2004 г.). «Отпечаток цитомегаловирусной инфекции человека в репертуаре рецепторов NK-клеток». Кровь. 104 (12): 3664–71. Дои:10.1182 / кровь-2004-05-2058. PMID  15304389.
  21. ^ Мэлоун Д.Ф., Лунеманн С., Хенгст Дж., Юнггрен Х.Г., Маннс М.П., ​​Сандберг Дж. К., Корнберг М., Ведемейер Х., Бьеркстрем Н.К. (2017). "Цитомегаловирусные адаптивные естественные разрастания клеток-киллеров не подвержены одновременным инфекциям, вызываемым хроническим гепатитом". Границы иммунологии. 8 (8): 525. Дои:10.3389 / fimmu.2017.00525. ЧВК  5421146. PMID  28533779.
  22. ^ Хаммер К., Рюкерт Т., Борст Э.М., Данст Дж., Хаубнер А., Дурек П., Генрих Ф., Гаспарони Г., Бабич М., Томич А., Пьетра Г., Нинен М., Блау И. В., Хофманн Дж., На И. К., Принц И., Кенеке С. , Hemmati P, Babel N, Arnold R, Walter J, Thurley K, Mashreghi MF, Messerle M, Romagnani C (май 2018 г.). «Пептид-специфическое распознавание штаммов цитомегаловируса человека контролирует адаптивные естественные клетки-киллеры». Иммунология природы. 19 (5): 453–463. Дои:10.1038 / s41590-018-0082-6. PMID  29632329. S2CID  4718187.
  23. ^ а б c d Лэш Г.Е., Робсон С.К., Балмер Дж. Н. (март 2010 г.). «Обзор: Функциональная роль естественных киллеров матки (uNK) в децидуальной оболочке беременности у человека на ранних сроках». Плацента. 31 Приложение (S): S87–92. Дои:10.1016 / j.placenta.2009.12.022. PMID  20061017.
  24. ^ Балмер Дж. Н., Уильямс П. Дж., Лэш Г. Е. (2010). «Иммунные клетки в плацентарном ложе». Международный журнал биологии развития. 54 (2–3): 281–94. Дои:10.1387 / ijdb.082763jb. PMID  19876837.
  25. ^ Kopcow HD, Аллан Д.С., Чен X, Рыбалов Б., Андзельм М.М., Ге Б., Стромингер Дж.Л. (октябрь 2005 г.). «Децидуальные NK-клетки человека образуют незрелые активирующие синапсы и не являются цитотоксическими». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 102 (43): 15563–8. Bibcode:2005ПНАС..10215563К. Дои:10.1073 / pnas.0507835102. ЧВК  1266146. PMID  16230631.
  26. ^ Сешадри С., Сункара СК (2013). «Естественные клетки-киллеры при женском бесплодии и повторном невынашивании беременности: систематический обзор и метаанализ». Обновление репродукции человека. 20 (3): 429–38. Дои:10.1093 / humupd / dmt056. PMID  24285824.
  27. ^ Ашкар А.А., Ди Санто Дж. П., Крой Б. А. (июль 2000 г.). «Гамма-интерферон способствует инициированию модификации сосудов матки, децидуальной целостности и созреванию естественных клеток-киллеров матки во время нормальной беременности у мышей». Журнал экспериментальной медицины. 192 (2): 259–70. Дои:10.1084 / jem.192.2.259. ЧВК  2193246. PMID  10899912.
  28. ^ О'Лири JG, Goodarzi M, Drayton DL, von Andrian UH (май 2006 г.). «Независимый от Т-клеток и В-клеток адаптивный иммунитет, опосредованный естественными клетками-киллерами». Иммунология природы. 7 (5): 507–16. Дои:10.1038 / ni1332. PMID  16617337. S2CID  1459858.
  29. ^ Смит HJ (декабрь 1966 г.). «Антигенность канцерогенных и спонтанных опухолей у инбредных мышей». Британский журнал рака. 20 (4): 831–7. Дои:10.1038 / bjc.1966.95. ЧВК  2008147. PMID  5964614.
  30. ^ Олдхэм РК (1983). «Естественные клетки-киллеры: артефакт в реальность: одиссея в биологии». Отзывы о метастазах рака. 2 (4): 323–36. Дои:10.1007 / BF00048565. PMID  6375859. S2CID  11301147.
  31. ^ Kiessling R, Klein E, Pross H, Wigzell H (февраль 1975 г.). ""Природные «клетки-киллеры у мышей. II. Цитотоксические клетки со специфичностью для клеток лейкемии Молони мыши. Характеристики киллерных клеток». Европейский журнал иммунологии. 5 (2): 117–21. Дои:10.1002 / eji.1830050209. PMID  1086218.
  32. ^ Просс Х.Ф., Жондал М. (август 1975 г.). «Цитотоксические лимфоциты от нормальных доноров. Функциональный маркер не-Т-лимфоцитов человека». Клиническая и экспериментальная иммунология. 21 (2): 226–35. ЧВК  1538269. PMID  810282.
  33. ^ Jondal M, Pross H (апрель 1975 г.). «Поверхностные маркеры на человеческих В- и Т-лимфоцитах. VI. Цитотоксичность в отношении клеточных линий как функциональный маркер для субпопуляций лимфоцитов». Международный журнал рака. 15 (4): 596–605. Дои:10.1002 / ijc.2910150409. PMID  806545. S2CID  30612835.
  34. ^ Герберман РБ, Нанн М.Э., Холден Х.Т., Лаврин Д.Х. (август 1975 г.). «Естественная цитотоксическая реактивность лимфоидных клеток мыши против сингенных и аллогенных опухолей. II. Характеристика эффекторных клеток». Международный журнал рака. 16 (2): 230–9. Дои:10.1002 / ijc.2910160205. PMID  1080480. S2CID  24410880.
  35. ^ West WH, Cannon GB, Kay HD, Bonnard GD, Herberman RB (январь 1977 г.). «Естественная цитотоксическая реактивность лимфоцитов человека против линии миелоидных клеток: характеристика эффекторных клеток». Журнал иммунологии. 118 (1): 355–61. PMID  299761.
  36. ^ Просс Х.Ф., Бейнс М.Г., Рубин П., Шрагдж П., Паттерсон М.С. (январь 1981 г.). «Спонтанная цитотоксичность, опосредованная лимфоцитами человека, против опухолевых клеток-мишеней. IX. Количественное определение активности естественных клеток-киллеров». Журнал клинической иммунологии. 1 (1): 51–63. Дои:10.1007 / BF00915477. PMID  7334070. S2CID  24437710.
  37. ^ Тимонен Т., Саксела Э. (1980). «Выделение человеческих NK-клеток центрифугированием в градиенте плотности». Журнал иммунологических методов. 36 (3–4): 285–91. Дои:10.1016/0022-1759(80)90133-7. PMID  7430655.
  38. ^ Гонг Дж. Х., Маки Дж., Клингеманн Х. Г. (апрель 1994 г.). «Характеристика линии клеток человека (NK-92) с фенотипическими и функциональными характеристиками активированных естественных клеток-киллеров». Лейкемия. 8 (4): 652–8. PMID  8152260.
  39. ^ Arai S, Meagher R, Swearingen M, Myint H, Rich E, Martinson J, Klingemann H (2008). «Инфузия аллогенной клеточной линии NK-92 пациентам с запущенным почечно-клеточным раком или меланомой: испытание фазы I». Цитотерапия. 10 (6): 625–32. Дои:10.1080/14653240802301872. PMID  18836917.
  40. ^ Тонн Т., Беккер С., Эссер Р., Швабе Д., Сейфрид Е. (август 2001 г.). «Клеточная иммунотерапия злокачественных новообразований с использованием клональной линии естественных киллеров NK-92». Журнал гематотерапии и исследования стволовых клеток. 10 (4): 535–44. Дои:10.1089/15258160152509145. PMID  11522236.
  41. ^ Матошевич, С (2018). "Вирусная и невирусная инженерия естественных киллерных клеток как новые методы адоптивной иммунотерапии рака". J Immunol Res. 2018: 4054815. Дои:10.1155/2018/4054815. ЧВК  6166361. PMID  30306093.
  42. ^ Вари Ф, Арпон Д., Кин С., Хертцберг М.С., Талауликар Д., Джайн С., Цуй К., Хан Э, Тобин Дж., Берд Р., Кросс Д., Эрнандес А., Гулд С., Берч С., Ганди М.К. (апрель 2018 г.). «Иммунное уклонение через PD-1 / PD-L1 на NK-клетки и моноциты / макрофаги более заметно при лимфоме Ходжкина, чем DLBCL». Кровь. 131 (16): 1809–1819. Дои:10.1182 / кровь-2017-07-796342. ЧВК  5922274. PMID  29449276.
  43. ^ а б Альтер Дж., Хекерман Д., Шнайдевинд А., Фадда Л., Кэди С.М., Карлсон Дж. М., Оньянг-Ндза К., Мартин М., Ли Б., Хаку С. И., Каррингтон М., Аллен Т. М., Альтфельд М. (август 2011 г.). «Адаптация ВИЧ-1 к иммунному давлению, опосредованному NK-клетками». Природа. 476 (7358): 96–100. Дои:10.1038 / природа10237. ЧВК  3194000. PMID  21814282.
  44. ^ Йокояма ВМ, Сойка Д.К., Пэн Х., Тиан Зи (01.01.2013). «Резидентные в тканях естественные клетки-киллеры». Симпозиумы Колд-Спринг-Харбор по количественной биологии. 78: 149–56. Дои:10.1101 / sqb.2013.78.020354. PMID  24584057.
  45. ^ Сойка Д.К., Плугастель-Дуглас Б., Ян Л., Пак-Виттель М.А., Артемов М.Н., Иванова Ю., Чжун С., Чейз Дж. М., Ротман ПБ, Ю. Дж., Райли Дж. К., Чжу Дж., Тиан З., Йокояма В. М. (январь 2014 г.). «Резидентные в тканях естественные клетки-киллеры (NK) представляют собой клеточные линии, отличные от NK-клеток тимуса и обычных селезеночных клеток». eLife. 3: e01659. Дои:10.7554 / elife.01659. ЧВК  3975579. PMID  24714492.
  46. ^ а б Догра П., Ранкан К., Ма В., Тот М., Сенда Т., Карпентер Д. Д., Кубота М., Мацумото Р., Тапа П., Сабо П. А., Ли Пун М. М., Ли Дж., Аракава-Хойт Дж., Шен Й, Фонг Л., Ланьер Л. Л. , Фарбер Д.Л. (февраль 2020 г.). «Тканевые детерминанты развития, функции и проживания человеческих NK-клеток». Клетка. 180 (4): 749–763. e13. Дои:10.1016 / j.cell.2020.01.022. ЧВК  7194029. PMID  32059780.
  47. ^ Хадспет К., Донадон М., Чимино М., Понтарини Э, Тенторио П, Прети М., Хонг М., Бертолетти А., Биччиато С., Инверницци П., Лугли Э, Торзилли Г, Гершвин М.Э., Мавилио Д. (январь 2016 г.). «Резидентные в печени человека NK-клетки CD56 (светлые) / CD16 (отрицательные) сохраняются в синусоидах печени за счет взаимодействия путей CCR5 и CXCR6». Журнал аутоиммунитета. 66: 40–50. Дои:10.1016 / j.jaut.2015.08.011. ЧВК  4718768. PMID  26330348.
  48. ^ Фасбендер Ф, Widera A, Хенгстлер JG, Watzl C (2016). «Естественные клетки-киллеры и фиброз печени». Границы иммунологии. 7: 19. Дои:10.3389 / fimmu.2016.00019. ЧВК  4731511. PMID  26858722.

дальнейшее чтение

  • Клеточная и молекулярная иммунология Авторы: Аббул К. Аббас и Эндрю Лихтман Сондерс. Авторское право 2003 г.
  • Как работает иммунная система, 2-е издание, Лорен Сомпайрак, доктор философии Blackwell Publishing 2003
  • Иммунобиология: иммунная система в здоровье и болезнях Авторы: Джейнвей, Трэверс, Уолпорт и Шломчик Черччилл Ливингстон Copyright 2005
  • Кубы Иммунология, 6-е издание, Томас Дж. Киндт, Ричард А. Голдсби и Барбара А. Осборн, W.H. Фриман и компания, Нью-Йорк

внешняя ссылка