Конфокальная микроскопия - Confocal microscopy

Конфокальная микроскопия
MeSHD018613
Код ОПС-3013-301
Принцип работы флуоресцентного и конфокального микроскопов

Конфокальная микроскопия, чаще всего конфокальная лазерная сканирующая микроскопия (CLSM) или же лазерная конфокальная сканирующая микроскопия (LCSM), это метод оптического изображения для увеличения оптическое разрешение и контраст из микрофотография с помощью пространственное отверстие для блокировки расфокусированного света при формировании изображения.[1] Захват нескольких двумерных изображений на разной глубине в образце позволяет реконструировать трехмерные структуры (процесс, известный как оптическое сечение ) внутри объекта. Этот метод широко используется в научных и промышленных сообществах, и его типичные применения находятся в Науки о жизни, полупроводник осмотр и материаловедение.

Свет проходит через образец под обычным микроскопом настолько глубоко в образец, насколько он может проникнуть, в то время как конфокальный микроскоп фокусирует только меньший луч света на одном узком уровне глубины за раз. CLSM обеспечивает контролируемый и очень ограниченный глубина резкости.

Основная концепция

Принцип сенсора конфокальной точки из патента Мински
GFP слитый белок экспрессируется в Nicotiana benthamiana. Флуоресценция видна с помощью конфокальной микроскопии.

Принцип конфокальной визуализации был запатентован в 1957 г. Марвин Мински[2] и направлен на преодоление некоторых ограничений традиционных широкополосных флуоресцентные микроскопы.[3] В обычном (т.е. широкопольном) флуоресцентный микроскоп, целиком образец равномерно залит светом от источника света. Все части образца могут быть возбуждены одновременно, и в результате флуоресценция обнаруживается микроскопом фотоприемник или же камера включая большую несфокусированную часть фона. Напротив, конфокальный микроскоп использует точечное освещение (см. Функция распределения точек ) и точечное отверстие в оптически сопряженной плоскости перед детектором для устранения расфокусированного сигнала - название «конфокальная» происходит от этой конфигурации. Поскольку только свет, производимый флуоресценцией, очень близок к фокальная плоскость могут быть обнаружены, изображение оптическое разрешение, особенно в направлении глубины образца, намного лучше, чем у широкопольных микроскопов. Однако, поскольку большая часть света от флуоресценции образца блокируется в отверстии, это повышенное разрешение достигается за счет снижения интенсивности сигнала - пока обнажения часто требуются. Чтобы компенсировать это падение сигнала после точечное отверстие, интенсивность света определяется чувствительным детектором, обычно фотоумножитель трубка (ФЭУ) или лавинный фотодиод, преобразуя световой сигнал в электрический.[4]

Поскольку одновременно освещается только одна точка в образце, для получения 2D- или 3D-изображений требуется сканирование по обычному растру (то есть по прямоугольному шаблону из параллельных линий сканирования) в образце. Луч сканируется по образцу в горизонтальной плоскости с помощью одного или нескольких (сервопривод управляемые) колеблющиеся зеркала. Этот метод сканирования обычно имеет низкую реакцию. задержка и скорость сканирования может быть изменена. Чем медленнее сканирование, тем лучше соотношение сигнал шум, что приводит к лучшему контраст.

Достижимая толщина фокальной плоскости в основном определяется длиной волны используемого света, деленной на числовая апертура из объектив, но и оптическими свойствами образца. Тонкий оптическое сечение possible делает эти типы микроскопов особенно хорошими для получения трехмерных изображений и профилирования поверхности образцов.

Последовательные срезы составляют «z-стек», который можно либо обработать для создания трехмерного изображения, либо объединить в двухмерный стек (в основном берется максимальная интенсивность пикселей, другие распространенные методы включают использование стандартного отклонения или суммирование пикселей).[1]

Конфокальная микроскопия позволяет проводить прямые, неинвазивные, серийные исследования. оптическое сечение Неповрежденных, толстых, живых образцов с минимальной пробоподготовкой, а также незначительным улучшением латерального разрешения по сравнению с широкопольной микроскопией.[4] Биологические образцы часто обрабатывают флуоресцентные красители чтобы сделать выбранные объекты видимыми. Однако фактическая концентрация красителя может быть низкой, чтобы свести к минимуму нарушение биологических систем: некоторые приборы могут отслеживать отдельные флуоресцентные молекулы. Также, трансгенный методы могут создавать организмы, которые производят свои собственные флуоресцентные химерные молекулы (например, слияние GFP, зеленый флуоресцентный белок с интересующим белком). Конфокальные микроскопы работают по принципу точечного возбуждения в образце (дифракционно ограниченное пятно) и точечного обнаружения результирующего флуоресцентного сигнала. Точечное отверстие в детекторе обеспечивает физический барьер, который блокирует расфокусированную флуоресценцию. Только в фокусе или в центре Диск Эйри, записывается. Растровое сканирование образца по одной точке позволяет собирать тонкие оптические срезы путем простого изменения z-фокуса. Полученные изображения можно сложить, чтобы получить трехмерное изображение образца.

Методы горизонтального сканирования

Это конфокальное изображение, сделанное на EMBL световая микроскопия, показывает группу диатомеи с голубыми клеточными стенками, красными хлоропластами, синей ДНК и зелеными мембранами и органеллами

Коммерчески доступны четыре типа конфокальных микроскопов:

Конфокальные лазерные сканирующие микроскопы используйте несколько зеркал (обычно 2 или 3 сканирующих линейно по осям x и y) для сканирования лазером по образцу и «десканирования» изображения по фиксированному отверстию и детектору.

Вращающийся диск (Диск Нипкова ) конфокальные микроскопы используют серию движущихся отверстий на диске для сканирования пятен света. Поскольку серия точечных отверстий сканирует область параллельно, каждому точечному отверстию позволяют парить над определенной областью в течение более длительного периода времени, тем самым уменьшая энергию возбуждения, необходимую для освещения образца, по сравнению с лазерными сканирующими микроскопами. Пониженная энергия возбуждения снижает фототоксичность и фотообесцвечивание образца часто делает его предпочтительной системой для визуализации живых клеток или организмов.

Микролинза улучшенная или же двойной вращающийся диск конфокальные микроскопы работают по тем же принципам, что и конфокальные микроскопы с вращающимся диском, за исключением того, что второй вращающийся диск, содержащий микролинзы, помещается перед вращающимся диском, содержащим точечные отверстия. С каждым отверстием связана микролинза. Микролинзы захватывают широкую полосу света и фокусируют ее в каждое точечное отверстие, значительно увеличивая количество света, направляемого в каждое точечное отверстие, и уменьшая количество света, блокируемого вращающимся диском. Конфокальные микроскопы с микролинзой значительно более чувствительны, чем стандартные системы с вращающимся диском. Yokogawa Electric изобрел эту технологию в 1992 году.[5]

Микроскопы с программируемой матрицей (PAM) использовать электронное управление пространственный модулятор света (SLM), который создает набор движущихся точечных отверстий. SLM - это устройство, содержащее массив пикселей с некоторым свойством (непрозрачность, отражательная способность или же оптическое вращение ) отдельных пикселей, которые можно отрегулировать электронным способом. SLM содержит микроэлектромеханические зеркала или же жидкокристаллический составные части. Изображение обычно получается устройство с зарядовой связью (CCD) камера.

У каждого из этих классов конфокальных микроскопов есть свои преимущества и недостатки. Большинство систем либо оптимизированы для скорости записи (например, захвата видео), либо для высокого пространственного разрешения. Конфокальные лазерные сканирующие микроскопы могут иметь программируемую плотность выборки и очень высокое разрешение, в то время как Nipkow и PAM используют фиксированную плотность выборки, определяемую разрешением камеры. Изображения частота кадров обычно работают медленнее для одноточечных систем лазерного сканирования, чем для систем с вращающимся диском или PAM. Коммерческие конфокальные микроскопы с вращающимся диском обеспечивают частоту кадров более 50 в секунду[6] - желательная функция для динамических наблюдений, таких как визуализация живых клеток.

На практике Nipkow и PAM позволяют сканировать несколько отверстий параллельно одной и той же области.[7] пока отверстия находятся на достаточно большом расстоянии друг от друга.

Новейшие разработки в области конфокальной лазерной сканирующей микроскопии теперь позволяют получать изображения с большей, чем при стандартной скорости видео (60 кадров в секунду), изображениями с помощью нескольких микроэлектромеханических сканирующих зеркал.

Конфокальный Рентгеновская флуоресценция Визуализация - это новый метод, который позволяет контролировать глубину в дополнение к горизонтальному и вертикальному прицеливанию, например, при анализе скрытых слоев в картине.[8]

Повышение разрешения

CLSM - это метод сканирования изображений, в котором разрешающая способность полученный результат лучше всего объяснить, сравнив его с другим методом сканирования, таким как растровый электронный микроскоп (SEM). CLSM имеет то преимущество, что не требует подвешивания зонда на несколько нанометров от поверхности, как в случае AFM или же СТМ, например, когда изображение получается путем сканирования поверхности с помощью тонкого наконечника. Расстояние от линзы объектива до поверхности (называемое рабочее расстояние) обычно сравнимо с таковым в обычном оптическом микроскопе. Это зависит от оптической конструкции системы, но типичное рабочее расстояние составляет от сотен микрометров до нескольких миллиметров.

В CLSM образец освещается точечным лазерным источником, и каждый элемент объема связан с дискретной интенсивностью рассеяния или флуоресценции. Здесь размер сканируемого объема определяется размером пятна (близким к дифракция предел) оптической системы, поскольку изображение сканирующего лазера представляет собой не бесконечно малую точку, а трехмерную дифракционную картину. Размер этой дифракционной картины и определяемый ею фокусный объем регулируются числовая апертура линзы объектива системы и длины волны используемого лазера. Это можно рассматривать как классический предел разрешения обычных оптических микроскопов, использующих широкопольное освещение. Однако с помощью конфокальной микроскопии можно даже улучшить предел разрешения методов широкопольного освещения, поскольку конфокальная апертура может быть закрыта для устранения дифракционной картины более высоких порядков.[нужна цитата ]. Например, если диаметр крошечного отверстия установлен на 1 Воздушный блок тогда только дифракционная картина первого порядка проходит через апертуру к детектору, в то время как более высокие порядки блокируются, таким образом улучшая разрешение за счет небольшого уменьшения яркости. При флуоресцентных наблюдениях предел разрешения конфокальной микроскопии часто ограничен соотношение сигнал шум вызвано небольшим количеством фотонов, обычно доступных в флуоресцентной микроскопии. Этот эффект можно компенсировать, используя более чувствительные фотоприемники или увеличивая интенсивность точечного лазерного источника. Увеличение интенсивности освещения лазером может привести к чрезмерному обесцвечиванию или другому повреждению исследуемого образца, особенно для экспериментов, в которых требуется сравнение яркости флуоресценции. При визуализации тканей, которые обладают дифференциальной рефракцией, таких как губчатый мезофилл листьев растений или другие ткани, содержащие воздушное пространство, часто проявляются сферические аберрации, ухудшающие качество конфокального изображения. Однако такие аберрации можно значительно уменьшить, помещая образцы в оптически прозрачные нетоксичные перфторуглероды, такие как перфтордекалин, который легко проникает в ткани и имеет почти такой же показатель преломления, как и вода.[9]

Использует

CLSM широко используется во многих биологическая наука дисциплины, от клеточная биология и генетика к микробиология и биология развития.[10] Он также используется в квантовой оптике, визуализации нанокристаллов и спектроскопии.

Биология и медицина

Пример стопки изображений конфокального микроскопа, показывающих распределение актиновых филаментов по клетке.

Клинически CLSM используется для оценки различных заболеваний глаз и особенно полезен для визуализации, качественного анализа и количественной оценки эндотелиальных клеток роговица.[11] Он используется для локализации и выявления присутствия нитчатых грибковых элементов в роговица строма в случаях кератомикоз, что позволяет проводить быструю диагностику и тем самым раннее начало окончательной терапии. Исследование методов CLSM для эндоскопический процедуры (эндомикроскопия ) тоже подает надежды.[12] В фармацевтической промышленности рекомендовалось следить за процессом производства тонкопленочных фармацевтических форм, чтобы контролировать качество и равномерность распределения лекарств.[13] Конфокальная микроскопия также используется для изучения биопленки - сложные пористые структуры, которые являются предпочтительной средой обитания микроорганизмов. Некоторые временные и пространственные функции биопленок можно понять, только изучив их структуру на микро- и мезомасштабах. Исследование на микроуровне необходимо для выявления активности и организации отдельных микроорганизмов.[14]

Оптика и кристаллография

CLSM используется как механизм поиска данных в некоторых 3D оптическое хранилище данных систем и помог определить возраст Папирус Магдалины.

Сохранение аудио

В IRENE Система использует конфокальную микроскопию для оптического сканирования и восстановления поврежденного исторического аудио.[15]

Варианты и улучшения

Улучшение осевого разрешения

Функция рассеяния точки для микроотверстия представляет собой эллипсоид, длина которого в несколько раз превышает его ширину. Это ограничивает осевое разрешение микроскопа. Один из способов преодоления этого - 4Pi микроскопия где падающий и / или испускаемый свет может мешать как сверху, так и снизу образца, чтобы уменьшить объем эллипсоида. Альтернативный метод - конфокальная тета-микроскопия. В этой технике конус освещающего света и обнаруживаемый свет расположены под углом друг к другу (лучший результат, когда они перпендикулярны). Пересечение двух функций рассеяния точки дает гораздо меньший эффективный объем выборки. Из этого развился микроскоп с одноплоскостной подсветкой. Кроме того деконволюция может использоваться с использованием экспериментально полученного функция разброса точки чтобы убрать нечеткий свет, улучшив контраст как в осевой, так и в боковой плоскостях.

Супер разрешение

Существуют конфокальные варианты, которые достигают разрешения ниже дифракционного предела, например стимулированная эмиссионная обедненная микроскопия (STED). Помимо этой техники, существует множество других (не конфокальных) методы сверхвысокого разрешения доступны как PALM, (d) STORM, SIM и так далее. Все они имеют свои преимущества, такие как простота использования, разрешение и необходимость в специальном оборудовании, буферах или флуорофорах.

Работоспособность при низких температурах

Для изображения образцов при низких температурах использовались два основных подхода, основанные на лазерная сканирующая конфокальная микроскопия архитектура. Один из подходов - использовать криостат непрерывного действия: только образец имеет низкую температуру и оптически адресуется через прозрачное окно.[16] Другой возможный подход состоит в том, чтобы часть оптики (особенно объектив микроскопа) находилась в криогенное хранилище Дьюара.[17] Этот второй подход, хотя и более громоздкий, гарантирует лучшую механическую стабильность и позволяет избежать потерь из-за окна.

Изображений

  • Частичный профиль поверхности монеты номиналом 1 евро, измеренный с помощью дискового конфокального микроскопа Нипкова.

  • Данные отражения для монеты номиналом 1 евро.

  • Цветное изображение актин волокна в рак клетка.

  • Зеленый сигнал от анти-тубулин антитело, конъюгированное с Alexa Fluor 488) и ядра (синий сигнал от ДНК, окрашенной DAPI) в клетках корневой меристемы 4-дневного возраста Arabidopsis thaliana (Col-0). Шкала шкалы: 5 мкм.

История

Начало: 1940–1957 гг.

Схема из заявки на патент Мински, показывающая принцип работы конфокального сканирующего микроскопа, который он построил.

В 1940 году Ганс Гольдманн, офтальмолог в Берн, Швейцария, разработала щелевая лампа система документирования офтальмологических обследований.[18] Эта система рассматривается некоторыми более поздними авторами как первая конфокальная оптическая система.[19][20]

В 1943 году Зюн Коана опубликовал конфокальную систему.[21][19] На рисунке в этой публикации показан путь конфокального луча передачи.

В 1951 году коллега Коаны Хирото Наора описал конфокальный микроскоп в журнале. Наука за спектрофотометрия.[22]

Первый конфокальный сканирование микроскоп был построен Марвин Мински в 1955 году и патент был подан в 1957 году. Сканирование точки освещения в фокальной плоскости достигалось путем перемещения предметного столика. Никаких научных публикаций представлено не было, и изображения, сделанные с их помощью, не сохранились.[23][24]

Тандемный сканирующий микроскоп

Схема тандемного сканирующего микроскопа Петра. Красная полоса добавлена ​​для обозначения Nipkow-Disk.

В 1960-е гг. Чехословацкий Моймир Петрад с медицинского факультета Карлов университет в Пльзень разработала тандемный сканирующий микроскоп, первый коммерческий конфокальный микроскоп. Он был продан небольшой компанией в Чехословакии и в Соединенных Штатах компанией Tracor-Northern (позже Noran) и использовался вращающийся Диск Нипкова для создания множественных точечных отверстий возбуждения и излучения.[20][25]

Чехословацкий патент был подан в 1966 году Петраем и Миланом Хадравски, чехословацкими коллегами. Первая научная публикация с данными и изображениями, полученными с помощью этого микроскопа, была опубликована в журнале Science в 1967 году под авторством М. Дэвида Эггера из Йельский университет и Петрадь.[26] В качестве сноски к этой статье упоминается, что Петрад разработал микроскоп и руководил его конструкцией, и что он был отчасти «научным сотрудником» Йельского университета. Вторая публикация 1968 года описывала теорию и технические детали инструмента, а также Хадравски и Роберт Галамбос, руководитель группы Йельского университета в качестве дополнительных авторов.[27] В 1970 г. был получен патент США. Он был подан в 1967 году.[28]

1969: Первый конфокальный лазерный сканирующий микроскоп.

В 1969 и 1971 годах М. Дэвид Эггер и Пол Давидовиц из Йельский университет, опубликовал две статьи, описывающие первые конфокальные лазер сканирующий микроскоп.[29][30] Это был точечный сканер, то есть генерировалось только одно пятно освещения. Он использовал микроскопию эпи-освещения-отражения для наблюдения за нервной тканью. Гелий-неоновый лазер мощностью 5 мВт с длиной волны 633 нм отражался полупрозрачным зеркалом в сторону объектива. Объектив представлял собой простую линзу с фокусным расстоянием 8,5 мм. В отличие от всех более ранних и более поздних систем, образец сканировался путем перемещения этой линзы (сканирование объектива), что приводило к перемещению фокальной точки. Отраженный свет возвращался к полупрозрачному зеркалу, прошедшая часть фокусировалась другой линзой на детекторное отверстие, за которым помещалась трубка фотоумножителя. Сигнал визуализировался ЭЛТ В осциллографе катодный луч перемещался одновременно с объективом. Специальное устройство позволило сделать Фотографии Polaroid, три из которых были показаны в публикации 1971 года.

Авторы размышляют о флуоресцентных красителях для in vivo расследования. Они ссылаются на патент Мински, спасибо Стиву Беру, в то время докторанту в Школа медицины Альберта Эйнштейна в Нью-Йорк где он разработал конфокальный линейный сканирующий микроскоп,[31] за предложение использовать лазер с «микроскопом Мински» и поблагодарить Галамбоса, Хадравского и Петра за обсуждения, приведшие к разработке их микроскопа. Мотивация для их разработки заключалась в том, что в тандемном сканирующем микроскопе только доля 10−7 освещающего света участвует в формировании изображения в окуляре. Таким образом, качество изображения было недостаточным для большинства биологических исследований.[19][32]

1977–1985: Точечные сканеры с лазерами и сценическим сканированием.

В 1977 г. Колин Дж. Р. Шеппард и Амарджьоти Чоудхури, Оксфорд, UK, опубликовал теоретический анализ конфокальных и лазерных сканирующих микроскопов.[33] Вероятно, это первая публикация, в которой используется термин «конфокальный микроскоп».[19][32]

В 1978 году братья Кристоф Кремер и Томас Кремер опубликовал проект конфокального лазерного сканирующего микроскопа, использующего флуоресцентное возбуждение с электронным автофокусом. Они также предложили лазерное точечное освещение с помощью «4π-точечного света».голограмма “.[32][34] Эта конструкция CLSM объединила метод лазерного сканирования с трехмерным обнаружением биологических объектов, помеченных флуоресцентные маркеры в первый раз.

В 1978 и 1980 годах оксфордская группа Колина Шеппарда и Тони Уилсон описал конфокальный микроскоп с эпи-лазерным освещением, сценическим сканированием и фотоумножители как детекторы. Столик мог перемещаться по оптической оси (оси z), что позволяло производить оптические последовательные секции.[32]

В 1979 г. Фред Бракенхофф и коллеги продемонстрировали, что теоретические преимущества оптического секционирования и улучшения разрешения действительно достижимы на практике. В 1985 году эта группа стала первой, кто опубликовал убедительные изображения, полученные с помощью конфокального микроскопа, которые смогли ответить на биологические вопросы.[35] Вскоре после этого многие другие группы начали использовать конфокальную микроскопию для ответа на научные вопросы, которые до этого оставались загадкой из-за технологических ограничений.

В 1983 г. И. Дж. Кокс и К. Шеппард из Оксфорда опубликовали первую работу, в которой конфокальный микроскоп управлялся компьютером. Первый коммерческий лазерный сканирующий микроскоп, столик-сканер SOM-25, был предложен Oxford Optoelectronics (после нескольких поглощений, приобретенных BioRad), начиная с 1982 года. Он был основан на конструкции оксфордской группы.[20][36]

С 1985 года: лазерные точечные сканеры со сканированием луча.

В середине 1980-х гг. Уильям Брэдшоу Амос и Джон Грэм Уайт и коллеги, работающие в Лаборатория молекулярной биологии в Кембридж построил первый сканирующий микроскоп с конфокальным лучом.[37][38] Столик с образцом не двигался, вместо этого было пятно освещения, что позволяло получать изображения быстрее: четыре изображения в секунду по 512 строк в каждом. Сильно увеличенные промежуточные изображения, благодаря длине пути луча 1-2 метра, позволяли использовать обычные ирисовая диафрагма в виде «точечного отверстия» диаметром ~ 1 мм. Первые микрофотографии были сделаны с длительной экспозицией на пленке до того, как была добавлена ​​цифровая камера. Дальнейшее улучшение позволило впервые увеличить масштаб подготовки. Zeiss, Leitz и Кембриджские инструменты не интересовался коммерческим производством.[39] В Совет медицинских исследований (MRC) наконец спонсировала разработку прототипа. Дизайн был приобретен Био-Рад, дополненный компьютерным управлением и выпущенный на рынок как «MRC 500». Преемник MRC 600 позже стал основой для разработки первого двухфотонно-флуоресцентный микроскоп разработан в 1990 г. Корнелл Университет.[35]

События на Королевский технологический институт KTH в Стокгольм примерно в то же время привел к коммерческому CLSM, распространенному Шведский компания Зарастро.[40] Предприятие было приобретено в 1990 году компанией Molecular Dynamics,[41] но со временем производство CLSM было прекращено. В Германии, Heidelberg Instruments, основанная в 1984 году, разработала CLSM, которая изначально предназначалась для промышленных приложений, а не для биологии. Этот инструмент был приобретен в 1990 г. Leica Lasertechnik. Компания Zeiss уже представила на рынке неконфокальный лазерный сканирующий микроскоп для определения точки полета, который был модернизирован до конфокального. Отчет 1990 г.,[42] упомянул некоторых производителей конфокальных линз: Sarastro, Technical Instrument, Meridian Instruments, Bio-Rad, Leica, Tracor-Northern и Zeiss.[35]

В 1989 г. Фриц Карл Прейкшат вместе с сыном Экхардом Прейкшатом изобрели сканирование лазерный диод микроскоп для гранулометрического анализа.[43][44] Он и Экхард Прейкшат стали соучредителями Lasentec с целью его коммерциализации. В 2001 году Lasentec была приобретена Mettler Toledo.[45] Они используются в основном в фармацевтической промышленности для обеспечения контроля процесса кристаллизации на месте в больших системах очистки.

Смотрите также

  • Микроскопия с двухфотонным возбуждением: Хотя они используют родственную технологию (оба являются лазерными сканирующими микроскопами), многофотонные флуоресцентные микроскопы не являются строго конфокальными микроскопами. Период, термин конфокальный возникает из-за наличия диафрагма в сопряженная фокальная плоскость (конфокальный). Эта диафрагма обычно отсутствует в многофотонных микроскопах.

Рекомендации

  1. ^ а б Pawley JB (редактор) (2006). Справочник по биологической конфокальной микроскопии (3-е изд.). Берлин: Springer. ISBN  0-387-25921-X.CS1 maint: дополнительный текст: список авторов (связь)
  2. ^ Подана в 1957 г., выдана в 1961 г. США 3013467 
  3. ^ Мемуары об изобретении конфокального сканирующего микроскопа, Сканирование 10 (1988), pp128–138.
  4. ^ а б Вальщик Т.Дж., Дэвидсон М.В. (2007). «Введение в конфокальную микроскопию». Ресурсный центр Olympus Fluoview. Национальная лаборатория сильного магнитного поля. Получено 2007-07-25.
  5. ^ «Аналитика для патента США № 5162941, Конфокальный микроскоп».
  6. ^ "Технические данные NanoFocus µsurf конфокальный микроскоп белого света с вращающимся диском ". Архивировано из оригинал на 2014-01-20. Получено 2013-08-14.
  7. ^ «Технические данные сенсорной головки Sensofar 'PLu neox' Dual, объединяющей конфокальную и интерферометрическую методы, а также спектроскопическую рефлектометрию».
  8. ^ Винце Л. (2005). «Конфокальная рентгенофлуоресцентная визуализация и рентгенофлуоресцентная томография для трехмерного микроанализа микроэлементов». Микроскопия и микроанализ. 11 (Приложение 2). Дои:10.1017 / S1431927605503167.
  9. ^ Литтлджон, Джордж Р .; Gouveia, João D .; Эднер, Кристоф; Смирнов, Николай; С любовью, Джон (2010). «Перфтордекалин повышает разрешение мезофилла Arabidopsis thaliana in vivo при конфокальной микроскопии». Новый Фитолог. 186 (4): 1018–1025. Дои:10.1111 / j.1469-8137.2010.03244.x. HDL:10026.1/9344. ISSN  1469-8137. PMID  20374500.
  10. ^ Хуан Карлос Штокерт, Альфонсо Бласкес-Кастро (2017). "Глава 6 Флуоресцентные приборы и методы". Флуоресцентная микроскопия в науках о жизни. Издательство Bentham Science. С. 180–184. ISBN  978-1-68108-519-7. Получено 24 декабря 2017.
  11. ^ Патель Д.В., МакГи С.Н. (2007). «Современная конфокальная микроскопия in vivo роговицы живого человека с использованием белого света и методов лазерного сканирования: большой обзор». Clin. Экспериментируйте. Офтальмол. 35 (1): 71–88. Дои:10.1111 / j.1442-9071.2007.01423.x. PMID  17300580. S2CID  23029612.
  12. ^ Hoffman A, Goetz M, Vieth M, Galle PR, Neurath MF, Kiesslich R (2006). «Конфокальная лазерная эндомикроскопия: техническое состояние и текущие показания». Эндоскопия. 38 (12): 1275–83. Дои:10.1055 / с-2006-944813. PMID  17163333.
  13. ^ Le Person, S .; Puiggali, J.R .; Барон, М .; Рокес, М. (1998). «Сушка в ближнем инфракрасном диапазоне фармацевтических тонких пленок: экспериментальный анализ внутреннего массопереноса». Химическая инженерия и переработка: интенсификация процессов. 37 (3): 257–263. Дои:10.1016 / S0255-2701 (98) 00032-4.
  14. ^ Гитис, Виталий; Ротенберг, Гади (2020). Гитис, Виталий; Ротенберг, Гади (ред.). Справочник по пористым материалам. Сингапур: World Scientific. С. 63–64. Дои:10.1142/11909. ISBN  978-981-122-322-8.
  15. ^ Процесс оцифровки. Проект IRENE, Библиотеки Калифорнийского университета в Беркли.
  16. ^ Hirschfeld, V .; Хюбнер, К. (2010).«Чувствительный и универсальный лазерный сканирующий конфокальный оптический микроскоп для флуоресценции одиночных молекул при 77 К». Обзор научных инструментов. 81 (11): 113705–113705–7. Bibcode:2010RScI ... 81k3705H. Дои:10.1063/1.3499260. PMID  21133476.
  17. ^ Grazioso, F .; Patton, B.R .; Смит, Дж. М. (2010). «Конфокальный оптический микроскоп со сканирующим лучом высокой стабильности для работы при низких температурах». Обзор научных инструментов. 81 (9): 093705–4. Bibcode:2010RScI ... 81i3705G. Дои:10.1063/1.3484140. PMID  20886985.
  18. ^ Ганс Гольдманн (1939). "Spaltlampenphotographie und –photometrie". Офтальмология. 98 (5/6): 257–270. Дои:10.1159/000299716. Примечание: 98-й том относится к 1939 году, однако на первой странице статьи январь 1940 года указан как дата публикации.
  19. ^ а б c d Колин Дж. Р. Шеппард (3 ноября 2009 г.). «Конфокальная микроскопия. Развитие современной микроскопии». Визуализация и микроскопия.онлайн
  20. ^ а б c Барри Р. Мастерс: конфокальная микроскопия и микроскопия с многофотонным возбуждением. Генезис визуализации живых клеток. SPIE Press, Беллингем, Вашингтон, США, 2006 г., ISBN  978-0-8194-6118-6, С. 120-121.
  21. ^ Зюн Коана (1942). Журнал Института светотехники. 26 (8): 371–385. Отсутствует или пусто | название = (помощь) Статья доступна на сайт журнала. PDF-файл с пометкой «P359 - 402» имеет размер 19020 килобайт и содержит также соседние статьи из того же номера. На рисунке 1б статьи показана схема конфокального тракта прохождения луча.
  22. ^ Наора, Хирото (1951). «Микроспектрофотометрия и цитохимический анализ нуклеиновых кислот». Наука. 114 (2959): 279–280. Bibcode:1951Научный ... 114..279N. Дои:10.1126 / science.114.2959.279. PMID  14866220.
  23. ^ Марвин Мински: Аппарат для микроскопии. Патент США 3.013.467, подана 7 ноября 1957 г., предоставлена ​​19 декабря 1961 г.
  24. ^ Марвин Мински (1988). «Воспоминания об изобретении конфокального сканирующего микроскопа». Сканирование. 10 (4): 128–138. Дои:10.1002 / sca.4950100403.
  25. ^ Гай Кокс: методы оптической визуализации в клеточной биологии. 1. издание. CRC Press, Taylor & Francis Group, Бока-Ратон, Флорида, США, 2006 г., ISBN  0-8493-3919-7, страницы 115-122.
  26. ^ Egger MD, Petrăn M (июль 1967). «Новый микроскоп в отраженном свете для просмотра неокрашенных клеток мозга и ганглиев». Наука. 157 (786): 305–7. Bibcode:1967Научный ... 157..305E. Дои:10.1126 / science.157.3786.305. PMID  6030094. S2CID  180450.
  27. ^ MOJMÍR PETRÁ; МИЛАН АДРАВСКИЙ; М. ДЭВИД ЭГГЕР; РОБЕРТ ГАЛАМБОС (1968). "Сканирующий тандемный микроскоп в отраженном свете". Журнал Оптического общества Америки. 58 (5): 661–664. Bibcode:1968JOSA ... 58..661P. Дои:10.1364 / JOSA.58.000661.
  28. ^ Моймир Петрадь, Милан Хадравски: СПОСОБ И УСТРОЙСТВО ПОВЫШЕНИЯ РАЗРЕШЕНИЯ, СИЛЫ И КОНТРАСТНОСТИ. онлайн в Google Patents, подана 4 ноября 1967 г., предоставлена ​​30 июня 1970 г.
  29. ^ Давидовиц, П .; Эггер, М. Д. (1969). «Сканирующий лазерный микроскоп». Природа. 223 (5208): 831. Bibcode:1969Натура.223..831D. Дои:10.1038 / 223831a0. PMID  5799022. S2CID  4161644.
  30. ^ Давидовиц, П .; Эггер, М. Д. (1971). «Сканирующий лазерный микроскоп для биологических исследований». Прикладная оптика. 10 (7): 1615–1619. Bibcode:1971ApOpt..10.1615D. Дои:10.1364 / AO.10.001615. PMID  20111173.
  31. ^ Барри Р. Мастерс: конфокальная микроскопия и микроскопия с многофотонным возбуждением. Генезис визуализации живых клеток. SPIE Press, Беллингем, Вашингтон, США, 2006 г., ISBN  978-0-8194-6118-6С. 124-125.
  32. ^ а б c d Шинья Иноуэ (2006). «Глава 1: Основы конфокального сканирования изображений в световой микроскопии». В Джеймсе Паули (ред.). Справочник по биологической конфокальной микроскопии (3-е изд.). ООО "Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа". стр.1 –19. ISBN  978-0-387-25921-5.
  33. ^ Sheppard, C.J.R .; Чоудхури, А. (1977). «Формирование изображения в сканирующем микроскопе». Optica Acta: Международный журнал оптики. 24 (10): 1051–1073. Дои:10.1080/713819421.
  34. ^ Cremer, C .; Кремер Т. (1978). «Соображения по поводу лазерного сканирующего микроскопа с высоким разрешением и глубиной резкости». Microscopica Acta. 81: 31–44. PMID  713859.
  35. ^ а б c Амос, У.; Уайт, Дж. (2003). «Как конфокальный лазерный сканирующий микроскоп попал в биологические исследования». Биология клетки. 95 (6): 335–342. Дои:10.1016 / S0248-4900 (03) 00078-9. PMID  14519550. S2CID  34919506.
  36. ^ Cox, I.J .; Шеппард, К. Дж. (1983). «Сканирующий оптический микроскоп, включающий в себя цифровой каркас и микрокомпьютер». Прикладная оптика. 22 (10): 1474. Bibcode:1983ApOpt..22.1474C. Дои:10.1364 / ао.22.001474. PMID  18195988.
  37. ^ Уайт, Дж. Г. (1987). «Оценка конфокального и обычного изображения биологических структур с помощью флуоресцентной световой микроскопии». Журнал клеточной биологии. 105 (1): 41–48. Дои:10.1083 / jcb.105.1.41. ISSN  0021-9525. ЧВК  2114888. PMID  3112165.
  38. ^ Анон (2005). "Доктор Джон Уайт FRS". royalsociety.org. Лондон: Королевское общество. Архивировано из оригинал на 2015-11-17.
  39. ^ Amos, W.B .; Уайт, Дж. (2003). «Как конфокальный лазерный сканирующий микроскоп попал в биологические исследования». Биология клетки. 95 (6): 335–342. Дои:10.1016 / S0248-4900 (03) 00078-9. PMID  14519550. S2CID  34919506.
  40. ^ Карлссон, К .; Danielsson, P.E .; Lenz, R .; Liljeborg, A .; Majlöf, L .; Ослунд, Н. (1985). «Трехмерная микроскопия с использованием конфокального лазерного сканирующего микроскопа». Письма об оптике. 10 (2): 53–55. Bibcode:1985 ОптL ... 10 ... 53C. Дои:10.1364 / OL.10.000053. PMID  19724343.
  41. ^ Брент Джонсон (1 февраля 1999 г.). «Образ - это все». Ученый. онлайн
  42. ^ Дайана Морган (23 июля 1990 г.). "Конфокальные микроскопы расширяют горизонты карьеры в области клеточной биологии". Ученый. онлайн
  43. ^ «Аппарат и метод анализа частиц».
  44. ^ «Аппарат и метод анализа частиц».
  45. ^ Все права защищены, Mettler-Toledo International Inc. «Анализ распределения частиц по размерам». Архивировано из оригинал на 2016-10-09. Получено 2016-10-06.

внешняя ссылка

Библиотечные ресурсы о
Конфокальная микроскопия